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HPLC法测定金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量

2014-03-07舒金富罗红梅

药学研究 2014年2期
关键词:花茶芦丁回收率

舒金富,罗红梅

(衢州市食品药品检验所,浙江衢州324000)

HPLC法测定金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量

舒金富,罗红梅

(衢州市食品药品检验所,浙江衢州324000)

目的建立金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱E-clipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-乙腈(B)-0.1%磷酸溶液(C),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;检测波长334 nm;柱温30℃。结果芦丁线性范围在21.22~339.58μg,r=0.999 4,样品加样平均回收率为100.0%(RSD=1.10%);蒙花苷线性范围在1.75~28.08μg,r=0.999 3,样品加样平均回收率为99.2%(RSD=1.17%)。结论该方法简便、准确,可用于制剂的质量控制。

高效液相色谱法;金菊五花茶颗粒;芦丁;蒙花苷;含量测定

金菊五花茶颗粒是由金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花、甘草等组成,具有清热利湿,凉血解毒,清肝明目的功效。芦丁为槐花的主要成分,蒙花苷为野菊花的主要成分,因此有必要对此两种成分进行质量控制,本文采用高效液相色谱法测定其芦丁和蒙花苷的含量,进行了质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪,二极管阵列检测器(DAD);Mettler XP205电子天平;超声仪(250 W,华南超声设备厂)。

1.2 药品与试剂 芦丁对照品(批号:100080-200707,含量90.5%),蒙花苷对照品(批号:111528-2000606,含量86.7%)、均由中国药品生物制品检定所供;甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇为分析纯,水为屈臣氏蒸馏水;金菊五花茶颗粒样品3批(广东嘉应制药股份有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150mm,5μm);柱温30℃;流动相:甲醇(A)-乙腈(B)-0.1%磷酸溶液(C),梯度洗脱[0~4 min,4%(A):14%(B):82%(C);4~10 min,7%(A):20%(B):73%(C);10~28 min,10%(A):25%(B):65%(C)];流速1.0 mL·min-1;检测波长334 nm;进样量20μL。

2.2 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品58.62 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照贮备液(1)。精密称取蒙花苷对照品10.12 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照贮备液(2)。精取上述两种对照品贮备液各2 mL,置与50 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取样品约2 g,置100 mL量瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定重量,超声30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液制备 取除去槐花、野菊花以外的其他药材,按金菊五花茶颗粒生产过程所得阴性样本,再按样品制备方法制成阴性溶液。

图1 金菊五花茶的色谱图

2.5 线性关系考察 分别各精密吸取“2.2”项下的对照品贮备液(1)、(2)各0.25、0.50、1.0、2.0、4.0 mL分别置于25 mL量瓶中,加甲醇稀至刻度,摇匀,各取20μL注入液相色谱仪中测定,以峰面积为纵坐标,对照品浓度为横坐标,进行线性回归。

芦丁回归方程为Y=17.197X-85.006 r=0.999 4,可见芦丁在21.22~339.58μg范围内线性关系良好。

蒙花苷回归方程为Y=41.818X+11.055,r=0.999 3,可见蒙花苷在1.75~28.08μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液20μL重复进样6次,记录对照品峰面积,计算芦丁RSD为1.65%,蒙花苷RSD为1.46%,表明本实验精密度良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液,在上述色谱条件下,分别在溶液制备后的0、1、3、5、7、9 h进行测定,以峰面积计算芦丁RSD为1.58%,蒙花苷RSD为1.75%,表明供试品溶液在9 h内基本稳定。

2.8 重现性实验 取同一批样品6份,精密称定,按上述供试液的制备方法和色谱条件进行测定,芦丁及蒙花苷的RSD分别为1.36%和1.51%,结果表明本方法的重现性良好。

2.9 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品9份,每份约1 g,按低、中、高三个剂量分别各加入0.8、1.0、1.2 mL的上述两种对照品贮备液,每个剂量平行3次,按“2.3”项下制成供试品溶液,测定其中的芦丁和蒙花苷的含量,并计算回收率。芦丁平均回收率为100.0%,RSD为1.10%,蒙花苷平均回收率为99.2%,RSD为1.17%。结果见表1,2。

表1 芦丁回收率实验考察结果

表2 蒙花苷回收率实验考察结果

2.10 样品的含量测定 取样品3批,按照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,分别精取对照品溶液和供试品溶液和20μL,按上述色谱条件测定蒙花苷和芦丁的含量,结果见表3。

表3 样品的含量测定

3 讨论

3.1 在流动相的选择中,采用了甲醇-0.1%磷酸溶液,乙腈-0.1%磷酸溶液,甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液,甲醇-0.2%磷酸溶液等不同梯度不同流动相组成的实验中,结果采用甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液的本方法梯度较为合适。

3.2 对芦丁和蒙花苷分别进行紫外扫描两者的最大吸收波长分别为325 nm(蒙花苷)和359 nm(芦丁),考虑蒙花苷在325 nm和334 nm测得响应值变化不大而芦丁的含量比蒙花苷大近20倍,因此选择334 nm作为测定波长。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:295.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第十册)[S].Z10-92.

[3]王琳.HPLC测定金菊五花茶冲剂中芦丁的含量[J],中国实用医药.2007,2(21):50-51.

Determ ination of rutin and linarin in Jinju W uhuacha Granules by HPLC

SHU Jin-fu,LUO Hong-mei
(Quzhou Institute for Food and Drug Control,Quzhou 324000,China)

ObjectiveTo establish amethod for determining the contents of rutin and linarin in Jinju Wuhuacha Granules by HPLC.M ethodsAn Eclipse XDB-C18column(4.6mm×150mm,5μm)was used withmethanol(A)-acetonitrile(B)-0.1%phosphoric acid(C)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1,and the UV-detection wavelength was set at 334 nm,column temperature at30℃.Resu ltsThe calibration curves for rutin between 21.22 and 339.58μg(r=0.999 4)and for linarin between 1.75 and 28.08μg(r=0.999 3)were linear.Recoverieswere 100.0% with RSD 1.10%for rutin and 99.2%with RSD 1.17%for linarin.ConclusionThemethod was simple and reliable for the quality control of Jinjuwuhuacha Granules.

HPLC;Jinju Wuhuacha Granules;Rutin;Linarin;Quantitative determination

R927.2

A

2095-5375(2014)02-0080-003

舒金富,男,研究方向:药品检验,E-mail:qzsjfu@163.com

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