PTEN、P27和BAG-1在子宫内膜癌中的表达及临床意义＊

梁艳芳，曾今诚，康东平，王玲梅，陈 灿，阮建波

（1.东莞市太平人民医院／暨南大学医学院附属东莞医院病理科，广东东莞523808；2.广东省医学分子诊断重点实验室，广东东莞523808；3.广东医学院检验医学研究所，广东东莞523808）

子宫内膜癌是女性生殖道常见三大恶性肿瘤之一，是妇科肿瘤中的常见病、多发病。近年来，其发病率已上升至女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%。目前，子宫内膜癌的漏诊率较高，究其原因，主要是其缺乏特异临床表现，预后常与肿瘤生物学特性及恶性程度等多种因素相关。因此，如何早期诊断及正确判断预后成为目前子宫内膜癌临床研究的热点之一。细胞周期失控是癌变的重要原因，一旦细胞正常的生长、发育平衡被打破，细胞将发生增殖失控而导致癌变。为进一步研究这些因素在子宫内膜癌中的表达及相互作用，本研究采用免疫组织化学方法检测子宫内膜癌组织中PTEN、P27、BAG-1的表达情况，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择东莞市太平人民医院2005～2011年手术切除经病理确诊的子宫内膜癌患者102例标本、子宫内膜增生90例的标本（其中单纯性增生40例，复杂性增生16例，不典型增生34例）和正常子宫内膜组织44例的标本。102例患者年龄34～64岁，平均53.40岁；按照国际妇产科联盟（FIGO）进行手术-病理分期：Ⅰ期60例，Ⅱ期22例，Ⅲ～Ⅳ期20例；组织学分级：G1级44例，G2级34例，G3级24例；无肌层浸润52例，有肌层浸润50例，其中浅肌层浸润（＜1／2）30例，深肌层浸润（≥1／2）20例。以上标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片。

1.2 试剂 PTEN和P27鼠抗人单克隆抗体、免疫组织化学试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。BAG-1兔抗人单克隆抗体购自深圳晶美生物工程有限公司。染色步骤按试剂盒要求进行。用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作阴性对照，已知结肠癌和乳腺癌阳性切片作为阳性对照。

1.3 方法 采用免疫组织化学SP法。PTEN阳性染色位于细胞质，呈黄色或棕黄色颗粒。P27阳性染色主要位于细胞核内，为棕黄色颗粒。BAG-1阳性染色位于细胞质，部分细胞出现细胞核棕黄色颗粒。采用双盲法随机选取10个高倍视野（×400），每个高倍视野计数100个肿瘤细胞。观察阳性细胞所占的百分比及染色强度。对阳性细胞所占的百分比计分（＜5%＝0分，5%～25%＝1分，26%～50%＝2分，51%～75%＝3分，＞75%＝4分）及染色强度（无色＝0，淡黄色＝1，棕黄色＝2，深棕色＝3）进行评分，累积0分为阴性（-），累积大于或等于1分为阳性（＋），其中1～2分为（＋），3～4分为（＋＋），5～6分为（＋＋＋）。以累积积分大于或等于3分为高表达，否则视为低表达。

表1 PTEN、P27、BAG-1在子宫内膜组织中的表达［n（%）］

表2 PTEN、P27、BAG-1表达与患者临床病理特征的关系［n（%）］

1.4 统计学处理 采用SPSS15.0统计软件进行统计分析。计数资料的比较采用χ2检验，关联性分析采用Pearson相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PTEN、P27、BAG-1在子宫内膜组织中的表达 免疫组织化学SP法显示，PTEN和BAG-1主要表达于细胞质，P27主要表达于细胞核。PTEN、P27、BAG-1在子宫内膜组织中均存在差异表达。PTEN和P27在子宫内膜癌和子宫内膜增生组织中低表达，而BAG-1在子宫内膜癌和子宫内膜增生组织中高表达，χ2检验分析显示，三者在子宫内膜癌或子宫内膜增生组织中的表达与正常子宫内膜组织比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。子宫内膜癌组织中PTEN和P27表达与子宫内膜增生组织中的表达比较，差异均无统计学意义（χ2＝0.000，P＝0.234；χ2＝9.025，P＝0.128）；子宫内膜癌组织中BAG-1表达与子宫内膜增生组织中的表达比较，差异有统计学意义（χ2＝0.063，P＝0.001）。

2.2 PTEN、P27、BAG-1与患者临床病理特征的关系 免疫组织化学SP法结果显示，PTEN在G1级子宫内膜癌组织中的表达明显高于G2～G3级（P＜0.05），BAG-1在G1级子宫内膜癌组织中的表达明显低于G2～G3级（P＜0.05），P27表达与子宫内膜癌组织学分级无关（P＞0.05）。PTEN和P27表达均与患者FIGO临床分期、肌层浸润程度、年龄及肿瘤大小无关（P＞0.05），BAG-1表达与患者FIGO临床分期和肌层浸润程度相关，Ⅱ～Ⅳ期明显高于Ⅰ期（P＜0.05），肌层浸润程度越深表达越高（P＜0.05）。BAG-1表达与患者年龄及肿瘤大小无关（P＞0.05）。见表2。

2.3 PTEN、P27、BAG-1在子宫内膜癌中的相关性分析Pearson相关分析子宫内膜癌PTEN、P27、BAG-1之间的关联性显示，子宫内膜癌中PTEN和P27表达存在相关性（P＜0.05），BAG-1和P27两者在子宫内膜癌中的表达无关联性（P＞0.05），见表3；PTEN和BAG-1表达之间也存在关联性（P＜0.05），见表4。

表3 PTEN和P27关联性分析（n）

表4 PTEN和BAG-1关联性分析（n）

3 讨 论

PTEN是1997年发现的具磷酸酯酶活性的抑癌基因。近年来研究发现其抑癌作用的发挥主要体现在通过参与PTEN／PI3K／AKT、PTEN／FAK／P130cas、PTEN／ERK、p53／MDM2、FRAP／mTOR等多条信号途径，诱导细胞周期停止和程序性细胞死亡，调节细胞粘连、迁移和分化，抑制血管的生成等［1］。特别是PTEN参与调节的PI3K／AKT信号途径是一个独立于其他通路的新的生长因子信号传导系统，参与调控肿瘤细胞代谢、生长、凋亡、恶变等生物学特性。PTEN是目前已知的子宫内膜癌中突变率最高的基因，蒋宋薇等［2］研究也认为PTEN表达缺失与子宫内膜癌的发生有关。本研究通过检测102例子宫内膜癌组织，90例子宫内膜增生组织和44例正常子宫内膜组织也发现，癌组织和增生组织PTEN的表达有较高缺失率。PTEN的表达在子宫内膜癌的发生发展中具有重要作用。本研究还发现，癌组织中PTEN缺失表达与P27缺失表达存在关联性（P＜0.05）。同时与BAG-1过表达存在关联性（P＜0.05）。P27是一个重要的候选抑癌基因，是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白家族的重要成员，在控制细胞G1／S期检查点中具有重要作用。P27表达缺失使肿瘤细胞容易跨过G1／S期检查点从而诱导细胞恶性增殖。P27低表达已被认为与肿瘤预后不良及高侵袭性密切相关［3］。近来Abu Backer等［4］认为，P27在鉴别子宫颈内腺癌与子宫内膜癌中具有重要意义。子宫内膜癌中P27缺失表达较子宫颈内腺癌更高。本研究也显示，子宫内膜癌中具有较高P27缺失率。BAG-1是BAG家族的重要成员，在拮抗肝细胞生长因子、血小板衍生生长因子介导的细胞凋亡中发挥重要作用［5］。BAG-1可通过与Bcl-2、肝细胞生长因子受体、热休克蛋白 Hsp70／Hsc70、Raf-1激酶及多种甾体类激素受体相互作用，形成复合体，调节细胞生长增殖和凋亡抑制的作用，BAG-1也是通过多种途径来实现凋亡抑制的。相关研究表明，BAG-1在多种恶性肿瘤中均有较高的表达且与肿瘤的恶性转化密切相关［6-7］。本研究通过免疫组织化学SP法检测了PTEN、P27、BAG-1在子宫内膜癌组织中的表达情况，结果显示PTEN和P27在子宫内膜癌和子宫内膜增生组织中低表达，而BAG-1在子宫内膜癌和子宫内膜增生组织中高表达。PTEN在G1级子宫内膜癌组织中的表达明显高于G2～G3级，BAG-1在G1级子宫内膜癌组织中的表达明显低于G2～G3级，且PTEN和BAG-1表达之间存在相关性。PTEN表达与患者FIGO临床分期、肌层浸润程度、年龄及肿瘤大小无关。BAG-1表达与患者FIGO临床分期和有无肌层浸润相关，与患者年龄及肿瘤大小无关。究竟是PTEN表达影响了BAG-1表达，还是BAG-1表达影响着PTEN表达？还有待深入研究。作者认为，PTEN和BAG-1在子宫内膜癌的发生过程中具有重要作用，并可能存在某种关联性。PTEN是目前已知的子宫内膜癌中突变率最高的基因，其在子宫内膜癌中的本质作用还在深入研究中。目前，多数研究认为BAG-1在乳腺癌发生发展中具有重要作用。Townsend等［8］研究发现，BAG-1在乳腺癌中的阳性率为92%（147／160），并认为乳腺癌组织学分级与BAG-1细胞核阳性呈负相关，高分化肿瘤核表达减弱，但与细胞质表达关联性差异无统计学意义（P＞0.05）。目前，在妇科肿瘤中BAG-1的研究主要集中于宫颈癌和卵巢癌的基础性研究，在子宫内膜癌的研究相对较少。早年Ribeiro-Silva［9］发现10%以上的宫内膜鳞腺癌细胞BAG-1阳性表达。夏守国等［10］研究发现BAG-1可能参与子宫内膜癌细胞凋亡与分化的调控。张宾等［11］在子宫内膜样腺癌中的研究发现BAG-1高表达与子宫内膜样腺癌的发生、发展有关。结合本研究结果，作者认为BAG-1可能在子宫内膜癌发生发展中起到一个比较重要的作用。Bamberger等［12］发现P27可调控正常子宫内膜增生，其低或缺失表达可能是子宫内膜癌发生的重要步骤。本研究结果表明，P27表达水平随着子宫内膜癌恶性程度的增加而下降，但与患者FIGO临床分期、有关肌层浸润、年龄及肿瘤大小无关。本研究提示PTEN、P27缺失表达和BAG-1过表达可能在子宫内膜癌的发生发展中起一定的作用。

［1］曾今诚，林观平，周克文.PTEN信号途径与肿瘤相关研究进展［J］.广东医学院学报，2010，28（2）：193-196.

［2］蒋宋薇，徐红，梁秀就，等.子宫内膜癌组织PTEN和cerbB-2蛋白表达临床意义的探讨［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16（16）：1246-1249.

［3］Nycum LR，Smith LM，Farley JH，et al.The role of p27in endometrial carcinoma［J］.Gynecol Oncol，2001，81（2）：242-246.

［4］Abu Backer FM，Mustapha NR，Othman NH.Combined expression of p161NK4aand p27Kip1，but not p21WAF1，differentiates endocervical from endometrial adenocarcinoma［J］.Anal Quant Cytol Histol，2011，33（5）：283-288.

［5］Shimanuki Y，Takahashi K，Cui R，et al.Role of serum vascular endothelial growth factor in the prediction of angiogenesis and prognosis for non-small cell lung Cancer［J］.Lung，2005，183（1）：29-42.

［6］Turner BC，Krajewski S，Krajewska M，et al.BAG-1：a novel biomarker predicting long-term survival in earlystage breast Cancer［J］.J Clin Oncol，2001，19（4）：992-1000.

［7］Song JY，Kim JW，Lee JK，et al.BAG-1expression in normal endometrium，endometrial hyperplasia and endometrial Cancer［J］.Acta Obstet Gynecol Scand，2008，87（8）：862-867.

［8］Townsend PA，Dublin E，Hart IR，et al.BAG-i expression in human breast Cancer：interrelationship between BAG-1 RNA，protein，HSC70expression and clinico-pathological data［J］.J Pathol，2002，197（1）：51-59.

［9］Ribeiro-Silva A.Immunohistochemical features of a papillary squamous cell carcinoma of the endometrium with transitional cell differentiation［J］.Diagn Pathol，2007，2（26）：26.

［10］夏守国，李大可，黄惠琼，等.抗凋亡蛋白BAG-1在子宫内膜癌中的表达及其与肿瘤分化的关系［J］.四川医学，2006，27（8）：863-864.

［11］张宾，李畅，种道群，等.子宫内膜样腺癌组织GELSOLIN和BAG-1蛋白的表达及其临床意义［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16（11）：856-859.

［12］Bamberger AM，Riethdorf L，Milde-Langosch K，et al.Strongly reduced expression of the cell cycle inhibitor p27in endometrial neoplasia［J］.Virchows Arch，1999，434（5）：423-428.