DAPK和P53在食管鳞癌中的表达和相关性*

王 超，翟建文，杨福申，胡基刚，齐庆彬

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.河北工程大学附属医院胸外科)

DAPK和P53在食管鳞癌中的表达和相关性*

王 超1，翟建文2，杨福申2，胡基刚2，齐庆彬2

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.河北工程大学附属医院胸外科)

目的:探讨食管鳞癌死亡相关蛋白激酶(DAPK)、P53蛋白表达的变化及其与食管鳞癌临床病理因素的关系。方法:应用组织芯片免疫组化法检测104例食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜DAPK和P53蛋白的表达。结果:食管鳞癌DAPK的阳性表达率明显低于癌旁正常黏膜，P53的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜(P＜0.05);食管鳞癌DAPK表达与浸润深度和淋巴结转移有关，P53表达与分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05);食管鳞癌DAPK和P53的表达呈负相关(r=-0.349，P＜0.05)。结论:食管鳞癌DAPK和P53蛋白表达呈负相关可能与食管鳞癌的发生发展密切相关。

死亡相关蛋白激酶(DAPK);p53;食管鳞癌

死亡相关蛋白激酶(DAPK)是一类多基序的钙调素调控的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在各种组织中广泛表达，参与内源性和外源性凋亡，DAPK基因甲基化与肿瘤的发生发展有关[1]。p53是一种抑癌基因，可直接或间接感受凋亡信号，从而启动细胞凋亡。本研究旨在探讨DAPK、p53在食管癌发生发展中的作用，以期探寻食管鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2013年1月-2013年12月河北工程大学附属医院胸外科收治的成人食管鳞癌手术标本及癌旁正常黏膜组织(距癌组织＞5cm)各104例。其中男68例、女36例，年龄39-73岁(平均61±5.1岁)。全部食管鳞癌患者术前均未经过放化疗和免疫治疗;术后病理诊断均为鳞状细胞癌，肿瘤直径＜5cm 46例、≥5cm 58例，癌组织侵及浆膜层42例、未侵及浆膜层62例，高分化36例、中分化45例、低分化23例，有淋巴结转移56例、无淋巴转移48例。

1.2 制作组织芯片 制作组织芯片(10×8mm)，采用美国Beecher Tissue Arrayer打孔(每孔2mm)，石蜡包埋，常规连续切片(3-4 μ m)。

1.3 免疫组织化学染色及结果判定 采用免疫组化染色法检测组织DAPK、P53蛋白的表达(兔抗人多克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司，稀释倍数均为1:150)，以细胞质或细胞核出现棕褐色颗粒为阳性表达。每张切片随机选取5个高倍(×400)视野，每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞百分率并分级:阳性细胞数＜10%为阴性(-)，11-50%为弱阳性(+)，＞50%为强阳性(++)。染色结果由两位病理医师分别阅片并核实诊断。

1.4 统计分析 采用SPSS 19.0统计软件进行分析，率的比较行卡方检验，相关分析采用Spearman秩相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DAPK、P53在食管鳞癌和癌旁正常黏膜中的表达DAPK阳性产物位于细胞质，食管鳞癌DAPK的阳性表达率明显低于癌旁正常黏膜(P＜0.05);P53阳性产物位于细胞核，食管鳞癌P53的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜(P＜0.05)。见表1:

表1 食管癌和癌旁正常黏膜DAPK和P53的表达情况

2.2 DAPK、P53表达与食管鳞癌临床病理因素的关系食管鳞癌DAPK表达与年龄、性别、肿瘤大小及分化程度无关(P＞0.05)，与浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05)。食管鳞癌P53表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无关(P＞0.05)，与分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05)。见表2:

表2 DAPK、P53表达与食管鳞癌临床病理因素的关系

2.3 食管癌DAPK和P53表达的相关性 食管癌组织DAPK和P53的表达呈负相关(r=-0.349，P＜0.05)。见表3:

表3 食管鳞癌组织DAPK与P53表达的相关性

3 讨论

食管鳞癌由食管上皮渐进性间变发展而来，是抑癌基因失活、癌基因激活、基因组不稳定等共同作用的结果。DAPK作为一种细胞凋亡的正调控因子，具有调节细胞生存和凋亡及抑制肿瘤发生发展的作用[2-4]。有报道证明，DAPK基因在多种肿瘤细胞和组织中出现表达缺失或降低，导致凋亡作用无法启动，因此，DAPK在肿瘤的发生、发展及转移的过程中发挥重要作用[5-8]。刘莺等[9]研究发现，DAPK基因甲基化同食管鳞癌TNM分级及淋巴结转移有着密切相关;郑吉等[10]发现，食管鳞癌DAPK的表达与淋巴结及远处转移有密切关系。本研究结果与前人的报道一致，食管鳞癌DAPK阳性表达率明显低于正常食管黏膜上皮，并且与食管癌的分化程度和浸润深度有关。

P53是一种抑癌基因，为包含393个氨基酸的转录因子，活性形式为四聚体。细胞中DNA损伤、纺锤丝断裂、癌基因异常激活、缺氧以及ATP储备下降等信号都能促使P53基因表达升高。目前的研究表明，P53可以直接或间接感受凋亡信号，利用其转录活化的特性或直接的蛋白-蛋白信号传递启动细胞凋亡[11]。本研究发现，食管鳞癌P53阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜，且与食管癌的分化程度和淋巴结转移有关。进一步分析发现，食管鳞癌DAPK与P53蛋白的表达呈负相关，说明DAPK和P53可能共同参与了食管鳞癌的发生和发展。

综上所述，DAPK和P53蛋白在食管鳞癌中表达呈负相关可能与食管鳞癌的发生发展密切相关，二者联合检测有助于综合判断食管鳞癌的恶性程度、转移潜能和预后。

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EXPRESSION AND CORRELATION OF DAPK AND P53 IN ESOPHAGEAL SQUAMOUS CARCINOMA

WANG Chao, ZHAI Jian-wen, YANG Fu-shen, et al
(Chengde medical college, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the death-associated protein kinase (DAPK) and P53 protein expression in esophageal squamous carcinoma and their relationships with clinicopathologic characteristics of esophageal squamous carcinoma.Methods:Tissue microarray immunohistochemical method was used to detect the DAPK and P53 protein expression in 104 cases esophageal squamous carcinoma and adjacent normal mucosa.Results:Compared with adjacent normal mucosa, the DAPK expression in esophageal squamous carcinoma obviously declined, P53 expression obviously increased (P＜0.05). In esophageal squamous carcinoma, DAPK expression was associated with infiltration depth and lymph node metastasis (P＜0.05); P53 expression was related to differentiated degree and lymph node metastasis (P＜0.05). In esophageal squamous carcinoma, DAPK expression was negatively correlated with P53 expression.Conclusions:Negative correlation of DAPK and P53 expression in esophageal squamous carcinoma may be closely related to the development of esophageal squamous carcinoma.

Death-associated protein kinase (DAPK); P53; Esophageal squamous carcinoma

* 河北省自然科学基金项目(H2014402078)

R735.1

A

1004-6879(2014)06-0465-04

2014-06-16)