苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究*

刘 亮，丁丽娜，万路平，陈东林△，陈荣华，吴永秀

(1.遵义医药高等专科学校，贵州遵义 563002;2.遵义市果蔬工作站)

苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究*

刘 亮1，丁丽娜1，万路平1，陈东林1△，陈荣华2，吴永秀2

(1.遵义医药高等专科学校，贵州遵义 563002;2.遵义市果蔬工作站)

目的:优化观音草总皂苷的水提取工艺。方法:采用正交试验法，以总皂苷的含量为考察指标。结果:薯蓣皂苷的线性范围是4-24μg/ml，r=0.9995。各因素对总皂苷得率的影响顺序为提取次数＞液料比(ml/g)＞提取温度＞提取时间，其中液料比和提取次数对总皂苷得率具有显著影响(P＜0.05)。结论:观音草中总皂苷的最佳提取工艺为:提取温度70℃，提取时间30min，液料比12:1(ml/g)，提取次数3次。

观音草;总皂苷;提取工艺

观音草Reineckia carnea (Andr.) Kunth是百合科植物吉祥草的带根全草，是苗族地区常用药之一，是著名的苗族药，也是我省“十二五”重点发展的六大苗药品种之一。苗医理论认为观音草药性冷，质征为气微味甜，入热经，走肺、肝二架，表、中、里三关。目前，观音草主要作为止咳化痰药使用，具有清肺止咳、理血、解毒的功效。我省百灵企业集团制药有限公司以观音草为主药，生产的百灵牌“咳速停糖浆”和“咳速停胶囊”享誉全国;由遵义万才药业有限公司生产的“复方吉祥草含片”、由贵州和仁堂制药有限公司生产的“咳清胶囊”也是以观音草为主药的苗药品种。这些药物在市场上反应良好，占有一定的市场份额。通过查阅文献发现，观音草尚无水提取工艺优选方面的研究，而药厂一般以水为提取溶剂提取观音草中的总皂苷。本研究旨在为水提取法提取观音草中总皂苷在工业生产中的应用积累参数，为观音草的进一步开发、利用提供实验数据。

1 仪器与试药

Aquelix 5型实验室高纯水系统(重庆市金富科技发展有限公司)，UV2501紫外分光光度计(日本岛津公司)，DKS-26型电热恒温水浴锅(宁波江南仪器厂)，FA2004B型电子天平(上海越平科学仪器有限公司)，Senco R系列旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)，予华牌SHZ-DⅢ型循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，FW200型高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司)。

薯蓣皂苷对照品，上海华壹生物科技有限公司(批号:19057-60-4);观音草药材采于贵州遵义，经遵义医药高等专科学校张学愈副教授鉴定为百合科植物观音草Reineckia carnea (Andr.) Kunth;其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计 本研究以观音草中总皂苷的含量为指标，在查阅文献的基础上[1-6]，选择影响水提率的提取温度、提取时间、液料比、提取次数四个因素为考察指标，采用L9(34)正交表进行试验。正交试验因素水平见表1:

2.2 供试品溶液的制备 精密称取观音草粗粉1g，分别按正交表L9(34)在恒温水浴锅中进行提取，提取液抽滤，合并滤液并转移至100ml容量瓶中加水稀释至刻度，摇匀。准确吸取10ml于分液漏斗中，用水饱合正丁醇分3次萃取，每次15ml，正丁醇萃取液再用水饱和正丁醇20ml洗涤，减压回收正丁醇至干，残渣用甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取薯蓣皂苷对照品1.2mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 标准曲线的制备 分别精密移取薯蓣皂苷对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2ml置于10ml具塞试管内，挥干甲醇，再分别加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，摇匀，密塞。60℃水浴显色15min，取出后立即用冰水冷却5min，再加入5ml冰醋酸稀释，摇匀，静置10min，于460nm处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，质量浓度(C)为横坐标进行线性回归。回归方程为A=0.019121C＋0.006133，r=0.9995，结果表明，薯蓣皂苷在4-24μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 供试品溶液的测定 分别精密吸取供试品溶液1.0ml，按2.4的操作方法显色，于460nm处测定吸光度。实验设计及数据处理结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 L9(34)正交试验结果

表3 方差分析表

2.6 结果与方差分析 由表2分析可知，观音草总皂苷最佳的提取工艺为A3B1C3D3。由表3方差分析可知，各因素对总皂苷得率的影响顺序为D＞C＞A＞B，其中液料比和提取次数对总皂苷得率具有显著影响(P＜0.05)。因此，考虑节约成本等实际情况，提取工艺调整为A1B1C3D3，即提取温度70℃，提取时间30min，液料比12:1(ml/g)，提取次数3次。

3 讨论

皂苷分子结构中无共轭双键，在紫外可见光区无特征性吸收峰，可以利用显色反应后在可见光范围产生的特征性吸收峰。根据前期研究文献，结合紫外法的显色特点，本研究以薯蓣皂苷为对照品，采用香草醛-高氯酸法显色，对观音草中总皂苷的含量进行测定，显色过程中严格控制温度和时间。

常用的提取皂苷的方法有水提法，醇提法。本研究在查阅文献的基础上，综合考虑总皂苷的提取率、成本及环保等因素，最终决定以水为提取溶剂进行正交试验，优化观音草总皂苷的提取工艺。结果表明，液料比及提取次数对总皂苷的含量有显著影响，考虑节约成本等实际情况，确定最佳的工艺为提取温度70℃、提取时间30min、液料比12:1(ml/g)、提取次数3次。

[1]王桂红，肖伊，胡俊杰，等.理气消瘿片水提取工艺研究[J].湖北中医药大学学报，2011，13(1):23-26.

[2]刘向前.三七总皂苷水提取工艺的优化试验[J].中国药师，2006，9(3):215-216.

[3]王店云，单进军，韩新民.正交试验法优选安神定志灵的水提取工艺[J].辽宁中医杂志，2014，41(6):1249-1251.

[4]贺葵邦，王英姿，张春泥，等.正交试验优选地龙水提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(6):33-35.

[5]朱立俏，盛华刚.正交试验优选藤梨根总多糖的水提取工艺[J].广州化工，2013，41(1):82-83.

[6]李霞，梁惠珍，门九章.正交试验优选雄芍颗粒的水提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(5):40-41.

(基础医学栏目编辑:陈志宏)

STUDY ON WATER EXTRACTION TECHNIQUE OF TOTAL SAPONINS IN REINECKIA CARNEA (ANDR.) KUNTH

LIU Liang, DING Li-na, WAN Lu-ping, et al
(Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Guizhou Zunyi 563002, China)

Objective:To optimize the water extraction technique of total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth.Methods:The orthogonal optimization experiment was used in this study with the total saponins content in Reineckia carnea (Andr.) Kunth as the index.Results:The linear range of dioscin was 4-24μg/ml (r=0.9995). The sequence of every factor for rate of the total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth was extraction times＞liquid-to-solid ratio (ml/g)＞extraction temperature＞extraction duration. Among them, the liquid-to-solid ratio and extraction times had significant influence on total saponins yield.Conclusions:The best extraction technique of total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth is extraction temperature 70℃, extraction duration 30 minutes,liquid-to-solid ratio 12:1 (ml/g), extraction 3 times.

Reineckia carnea (Andr.) Kunth; Total saponins; Extraction technique

R917

A

1004-6879(2014)06-0470-02

*遵义市科技局、遵义医药高等专科学校联合科技计划项目(遵市科合社字【2012】18号)，遵义市红花岗区科学技术项目(遵红科合社字【2012】06号)

△ 通讯作者

2014-04-29)