56例复发性自然流产患者免疫治疗的临床特征观察与分析

刘正爱

邹城市妇幼保健院生殖科，山东 邹城 273500

56例复发性自然流产患者免疫治疗的临床特征观察与分析

刘正爱

邹城市妇幼保健院生殖科，山东 邹城 273500

目的观察同种免疫型复发性自然流产（RSA）淋巴细胞主动免疫治疗临床效果。方法对我院不孕不育生殖中心就诊治疗900余例复发性自然流产（2～5次）患者进行临床分类和病因筛查，对资料完整的患者进行病因分析。结果56例治疗后再次妊娠34人，已有活产患者19人，转阴后成功妊娠者34人，APLA阴性成功妊娠5人。结论淋巴细胞主动免疫治疗，能促使封闭抗体转阴并提高复发性流产患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴细胞主动免疫治疗，保胎成功率高，孕后才做淋巴细胞主动免疫治疗，保胎成功率较孕前免疫治疗成功率明显降低。重点筛查流产原因，综合保胎治疗可提高保胎成功率。

复发性自然流产；封闭抗体；淋巴细胞免疫治疗

1 资料和方法

1.1 临床资料

2011年1月～2013年8月，在邹城市妇幼保健院不孕不育生殖中心就诊的免疫治疗复发性自然流产的患者500例，年龄28～42岁，其中56例APLA阴性患者采用淋巴细胞免疫疗法进行血清封闭抗体的检测。本中心不孕专科门诊对同种免疫型复发性流产患者给予淋巴细胞免疫治疗（LIT），所有患者均自愿接受治疗并签署知情同意书。

1.2 免疫治疗前检查

双方检查血常规、ABO及Rh血型，丙肝lgM、乙肝二对半，HIV、RPR，供血者检查无异常方可做免疫治疗。若供血者检查异常，选用第三方供血。

1.3 实验试剂

检测试剂盒由中国医学科学院生物医学工程研究所灏洋生物联合实验室监制、天津市灏洋生物制品有限责任公司提供，按试剂盒操作说明进行操作。每次间隔2～3周注射1次，3次为一疗程，治疗过程中嘱患者避孕，疗程结束后，鼓励患者在6个月内受孕，妊娠后每周1次，继续治疗2～3次。

操作简便，结果方便易读，检测位点4个，灵敏度高，特异性好，结果可靠。

1.4 方法

1.4.1 准备10 ml移液管，标注患者姓名及编号，加人淋巴细胞分离液分别注入15ml无菌离心管，每管4 ml，共5管，与血液比为1∶1。

1.4.2 在无菌条件下抽取丈夫静脉血30 ml，肝素抗凝（10∶1）。

1.4.3 分别吸取丈夫6 ml静脉血，倾斜离心管沿管壁缓慢加在人淋巴分离液上，注意一定要缓慢加入，以免跟分离液混匀而致分界不清，影响分离效果。

1.4.4 离心。3 000转/10 min。

1.4.5 提取淋巴细胞洗涤。离心结束后，用吸管吸取中间层，富含淋巴细胞的细胞转至无菌试管中，并加无菌生理盐水至8 ml，混匀。

1.4.6 离心。进行离心洗涤。弃上清，加生理盐水反复洗涤混匀，3 000转/10 min进行第二次离心洗涤。

1.4.7 重复洗涤3次，3 000转/10 min。

1.4.8 彻底弃上清，留沉渣，加入生理盐水2 ml于离心管内轻轻吹打均匀。将全部液体转至另一无菌的5 ml离心管内。

1.4.9 计数淋巴细胞吸取5 μl混匀提取液于一洁净的载玻片上，盖上，22×22 mm盖玻片。放置1 min，在显微镜下计数，总放大倍数为400倍，据计数结果调整淋巴细胞浓度为（20～60）108/ml，混匀备用[1]。

1.4.10 消毒接受免疫者用1 ml无菌针管皮内注射前臂6～8个小皮丘，尽量避开血管。

2 结果

2.1 患者治疗一个周期后指标变化情况分析

研究中，分别在0周、1周、3周、5周时，采丈夫静脉血30 ml通过内注射的方式将丈夫的淋巴细胞注入到妻子体内。

2.2 患者治疗3个疗程后转阳率分析

详见表1。

表1 3个疗程后转阳率结果

2.3 患者免疫治疗后相关指标分析

转阳后妊娠率56例再次妊娠34人，妊娠率60.7% （34/56），已有活产患者19人，占33.9%（19/56），转阳后成功妊娠者34人，占87.2%，（34/39），APLA阴性成功妊娠5人，占12.8%（5/39）。

2.4 淋巴细胞注射副作用

注射淋巴细胞后均有程度不同的注射皮丘部位发红、瘙痒或肿大，1例过敏。1例发生全身团块状荨麻疹；首次注射淋巴细胞后一周，皮肤出现数个散在淤血点，口服抗过敏药西替利嗪后好转；第二次淋巴细胞注射后再次出现皮肤淤血点，较第一次淤血点明显减少；第三次注射后未发生皮肤瘀斑，未发生血液传染病感染。

表2 免疫治疗后封闭抗体转阳后妊娠结果

3 讨论

3.1 复发性流产的病因比较复杂，有学者认为：HLA抗原基因多态性与复发性自然流产关系密切的HLA基因可能是免疫治疗妊娠结局有价值的预测因子。复发性流产夫妇间白细胞抗原共容性大主要在HLA-A、HLA-B、HLADR、HLA-DQA1的位点[2]。

3.2 本研究中，接受治疗的56名患者中，阴性者7人，占12.5%（7/56），APLA阴性成功妊娠者5人，占8.93%（5/56），这可能是因为主动免疫治疗使这些患者诱发了由细胞免疫参与的免疫抑制，使封闭效应增强反应。

3.3 有明确病因者应尽快开展相应治疗，综上所述，对于复发性自然流产患者进行APLA的检测是非常必要的。APLA阴性的患者应常规行淋巴细胞主动免疫治疗，提高APLA的阳性率及再次妊娠的成功率，淋巴细胞主动免疫治疗复发性自然流产安全有效。APLA水平变化的监测，对指导复发性自然流产患者妊娠及对再次妊娠的结局有良好的指导意义。

3.4 本研究对淋巴细胞主动免疫治疗能促使封闭抗体转阳并提高复发性流产患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴细胞主动免疫治疗保胎成功率高，表明封闭抗体阳性对复发性自然流产的必要性，但本中心接受免疫治疗的患者数相对较少，今后进一步对治疗的患者进行分析观察与研究，并对患者远期安全性进行跟踪观察和分析，因此对免疫治疗的远期疗效有待于今后工作中进行样本长时间观察，进一步验证结果，以提高妊娠保胎成功率。

[1]林其德. 现代生殖免疫学[M]. 1版. 北京：人民卫生出版社，2006：157-173.

[2]李杰兰, 马卫军. 主动免疫治疗不明原因复发性自然流产的临床分析[J]. 齐齐哈尔医学院学报, 2012, 33(14): 1865-1866.

R271.9

B

1674-9308（2014）06-0035-02

10.3969/J.ISSN.1674-9308.2014.06.023