利福昔明对家兔肠道菌群的影响

张勇

（巴州区动物疫病预防控制中心，四川巴中 636000）

利福昔明对家兔肠道菌群的影响

张勇

（巴州区动物疫病预防控制中心，四川巴中 636000）

本实验就利福昔明对家兔肠道菌群的影响进行了研究。将利福昔明按25、50、100mg/kg三个剂量组分别给40日龄家兔口服，连续用药3d，并于首次用药后第4、7、10d剖杀家兔，取盲肠和回肠内容物进行乳酸杆菌和大肠杆菌的选择性培养并计数，以此评价利福昔明对家兔肠道菌群数量的影响。结果显示：利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的大肠杆菌菌群数目与空白对照组相比数量减少，其中，高剂量组(100mg/kg)在首次用药后第7、10d对家兔回肠大肠杆菌影响差异显著(P＜0.05)。利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的乳酸杆菌与空白对照组相比差异不显著(P＞0.05)。

利福昔明；乳酸杆菌；大肠杆菌；家兔

利福昔明（Rifaximin）为半合成广谱肠道抗生素，是目前用于肠道细菌感染的利福霉素衍生物类抗生素，对革兰氏阳性菌及阴性菌都有强大的杀灭作用[1]，抗菌活性很强。

正常肠道微生物菌群是在动物内环境中定居、繁殖的一类菌群，在动物处于健康状态时不表现出异常或致病现象。这些正常菌群在动物机体内构成了一道天然屏障，是动物机体内环境中不可缺少的组成部分，它对维持肠道内正常的微生态环境，抵御其它致病菌或潜在致病菌的入侵等方面起着重要作用[2]。乳酸杆菌、双歧杆菌和芽孢杆菌等是动物机体内的正常菌群[4]，广泛分布于动物的肠道中。研究显示，家兔盲肠里乳酸杆菌和大肠杆菌的数量较为可观并且稳定[3]。因此，本试验选择盲肠和回肠作为检测乳酸杆菌的肠段，初步研究利福昔明对家兔正常菌群的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

SW-CJ-JC型超净工作台、恒温培养箱、电子分析天平、移液器。

1.1.2 试剂

利福昔明原粉（含量99.9%）、乳酸杆菌选择性培养基（LBS）、伊红美兰琼脂（EMB）、磷酸盐稀释液。

1.1.3 实验动物

40周龄未经任何疫苗免疫家兔60只，雌雄各半，常规饲养管理，自由采食及饮水。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组与处理

将35日龄家兔随机分成低、中、高和空白对照组，每组15只，40日龄时将利福昔明以低、中、高三个剂量组分别以25、50、100mg/kg灌服，2次/d，连用3d。空白对照组灌服等量生理盐水。

1.2.2 样品采集与处理

分别在首次用药后的第4d、第7d、第10d早晨每组随机取5只家兔处死后，立即打开腹腔，按组织学区分并结扎各肠段，在回肠和盲肠入口处用细线紧紧扎住，然后将扎口的盲肠取下来，保持盲肠内容物与外界隔绝，防止污染，用于测定内容物中大肠杆菌、乳酸杆菌含量。同样方法取靠近盲肠的回肠段。

1.2.3 样品稀释

在超净台中取两肠段靠近黏膜部位的内容物，取1.0g肠内容物于无菌试管内，加入无菌稀释液9 mL经振荡器振荡至混匀，静置一段时间，然后从中吸取上清液1.0mL放入盛有9mL稀释液的第二个试管中进行10-2稀释，振荡混匀，以此类推，将梯度稀释到10-7。

1.2.4 接种与培养

取10-3、10-4、10-5稀释度的菌液各20μL接种于大肠杆菌选择性培养基(EMB)上；取10-5、10-6、10-7稀释度的菌液各50μl接种于乳酸杆菌选择性培养基(LBS)上，每个稀释度各接种3个平皿，EMB平皿37℃培养24h，LBS平皿37℃培养48h。根据选择性培养基、菌落形态、颜色及革兰氏染色特点鉴定细菌，选择具有可数性稀释度的平板(以长100～200个菌落为宜)，根据菌落可数性原则，即1个细菌产生1个菌落，对2种微生物进行平板菌落计数，求其平均值并计算每克肠道内容物所含细菌数。以每克肠道内容物中细菌个数的对数(lgcfu/g)表示。计算公式如下：每克盲容物菌落数的对数=log10(菌落数×稀释倍数×每次稀释取样毫升数)/(接种用样品毫升数×样品克数)[5]。 1.2.5 数据分析

实验数据采用SPSS(Ver.19.0)软件进行统计分析。试验组与对照组之间的差异采用单因子方差(One-Way Anova)分析。多重比较采用最小显著差数法(LSD)，结果用平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 细菌分离

大肠杆菌在EMB培养基上生长良好,菌落呈红色,表面光滑,低凸,边缘整齐,有光泽。镜检为革兰氏染色阴性、两端钝圆的短杆状。乳酸杆菌在LBS培养基上生长良好，为小的乳白色稍有突起的菌落，中央呈乳突状隆起，边缘不整齐，镜检革兰氏染色为阳性，呈紫色细小弯曲的链状或排列成栅。

2.2 对家兔肠道菌群的影响

表1 家兔每克肠内容物菌群数的对数 lg CFU/g

由表1可以看出，利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的大肠杆菌菌群数目与空白对照组相比数量减少，其中，高剂量组在首次用药后第7d和第10d对回肠大肠杆菌影响差异显著(P＜0.05)，其他各剂量组无显著差异(P＞0.05)；利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的乳酸杆菌与空白对照组相比整体数量有增加的趋势，但差异不显著(P＞0.05)。

3 讨论

动物机体内正常菌群彼此之间保持着动态平衡，是动物机体内十分重要的非特异性防御屏障。肠道中正常菌群与宿主的正常生理功能有着密切的关系，对某些入侵的病原微生物具有明显的拮抗作用。大肠杆菌和乳酸杆菌为肠道中正常菌群，其中乳酸杆菌可产生类抗生素物质、乳酸等，并降低肠道pH值，既可抑制病原微生物的生长繁殖，又能促进肠道中其它厌氧菌的生长繁殖。本试验中测得的对照组大肠杆菌和乳酸杆菌的数量与多起实验报道的盲肠和回肠中大肠杆菌的数目基本吻合,但整体分析用药后大肠杆菌的数目下降，乳酸杆菌的数目上升。这表明，乳酸菌作为肠道菌群的一部分，其作为益生素菌种在肠道内生长繁殖，对肠道内有益微生物有一定的助生长作用，而对致病菌则有一定拮抗作用，能够有效改善肠道环境。

利福昔明口服不吸收并对厌氧菌有极强的杀灭作用，将其与金霉素进行随机、双盲对照研究以比较它们治疗肠道菌群失调的有效性和安全性，结果表明，利福昔明是治疗小肠细菌过度生长、维持肠道菌群平衡安全、有效的药物[5,6]。

本实验结果证实利福昔明对家兔肠道内益生菌乳酸杆菌数量没有明显影响，但能够削弱致病菌大肠杆菌的繁殖能力，帮助机体确立肠道益生菌群的优势地位，并建立稳态正常菌群，增强动物机体免疫能力，从而预防雏家兔的消化道疾病。

[1]Scrascia M,Forcillo M,Maimone F,et al.Susceptibility to rifaximin ofVibrio cholerae strainsfrom different geographical areas [J].Antimicrob Chemother,2003,52:303.

[2]Fuller,R.The importance oflactobacilli in main taining normal microbialbalance in the crop[J].ritish Poultry Science,1977,(18): 85～94.

[3]Lu J R,Umelaal I M,Barry harmon,et al.Diversity and succession of the intestinal bacterial community of the maturing broiler chicken[J].App l Environ Microbiol,2003,11:6816～6824.

[4]吕丹娜，刘正伟，许丽，等.不同脱乙酰度壳聚糖对肉仔鸡肠道菌群的影响[J].中国饲料，2007,16:17～19.

[5]CorazzaGR,VentrucciM,StrocchiA,et al.Treatment ofsmall intestine bacterial overgrowth with rifaximin,a non-absorbable rifamycin[J].Int Med Res1988,(16):312～316.

[6]Corazza GR,Sorge M,Strocchi A,et al.Non-absorbable antibioticsand small bowel bacterial overgrowth[J].Ital JGastroenterol1992,(24):4～9.

1004-2342（2014）01-0027-02

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2013-12-29）