油橄榄叶提取物联合美沙酮对海洛因成瘾大鼠消化酶活性及十二指肠组织结构的影响

王昱

(陇南师范高等专科学校生化系, 甘肃 成县 742500)

油橄榄叶提取物联合美沙酮对海洛因成瘾大鼠消化酶活性及十二指肠组织结构的影响

王昱

(陇南师范高等专科学校生化系, 甘肃 成县 742500)

目的: 探讨油橄榄叶提取物(olive leaf extract, OLE)联合美沙酮对海洛因依赖大鼠胃肠道消化酶活性及十二指肠组织结构的影响.方法: 将40只健康大鼠随机分成正常组、模型组、美沙酮组、OLE+美沙酮组.按递增法采用皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型, 造模后药物处理30 d, 用比色法检测血清脂肪酶(LPS)、淀粉酶(AMS)和胰蛋白酶(TRS)活性, 用生物显微技术观察十二指肠组织结构的变化.结果: 与正常组相比, 模型组海洛因依赖大鼠血清LPS、AMS、TRS活性显著降低, 十二指肠粘膜上皮掉落、溶解, 隐窝空泡化甚至消失; 与模型组相比, OLE+美沙酮组和美沙酮组大鼠血清LPS、AMS、TRS活性明显升高, 十二指肠组织病理损害程度明显减轻.OLE联合美沙酮对海洛因依赖大鼠消化功能的治疗效果比美沙酮组更明显.结论： OLE和美沙酮联合治疗海洛因造成的胃肠道损害疗效优于单一的用药, 两药合用具有很好的协同作用.

油橄榄叶提取物; 海洛因; 美沙酮; 消化酶; 十二指肠

阿片类物质滥用已成为当今世界严重的社会问题和医学问题, 其中海洛因滥用最为突出.海洛因成瘾可引起动物、人类多种脏器的损害.目前已知阿片类依赖戒断症状涉及较多, 其治疗方法已越来越多.美沙酮维持治疗是海洛因等阿片类物质依赖者治疗的重要措施之一, 但许多实验[1]证明单一的治疗方法虽有助于减轻戒断症状和功能恢复, 但效果并不理想, 而且这些药物本身有成瘾性, 具有长期或终生服药的特点, 若使用不当又会成为新的毒品, 只有通过联合治疗才能克服单一用药的缺点, 提高治疗效果.消化酶是由消化系统分泌的起营养和消化作用的酶类, 因反应底物不同而分为蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等几种.消化酶活力是评价动物生理机能的重要指标之一.

油橄榄(Olea europaea Linn)属木樨科(Oleaceae), 油橄榄叶提取物(olive leaf extract, OLE)是从油橄榄叶中提取的组分, 主要成分为黄酮类和萜类内酯化合物[2-5], 近年来药理研究发现具有很好的抗氧化、降血脂、排铅等作用[6-9].但OLE对海洛因依赖大鼠的胃肠道损伤是否具有保护作用尚未见文献报道.本研究拟以海洛因依赖大鼠为模型, 利用比色法和生物显微技术观察比较OLE和美沙酮对海洛因造成的胃肠道损害的治疗作用, 以期为油橄榄叶提取物基础研究和临床应用提供更多的实验依据.

1 材料与方法

1.1 材料

盐酸海洛因(纯度≥98%, 成县公安局提供); 脂肪酶(LPS)、淀粉酶( AMS)、胰蛋白酶 (TRS)试剂盒购自南京建成生物工程研究所; 油橄榄叶提取物由陇南田园油橄榄科技开发有限公司提供; 美沙酮注射液(天津中央药业有限公司生产, 批号020515); 其它试剂均为国产分析纯; U-1800型UV-VIS全自动分光光度计spectrophotometer(日本); TGL-16M型高速台式冷冻离心机(美国); SD大鼠♀, 体重200-250 g [兰州大学实验动物中心, 许可证号: SCXK (甘)2005-0007].

1.2 方法

1.2.1 动物模型建立与给药

健康♀性SD大鼠40只, 同条件饲养, 喂食普通固体饲料, 自由饮水.随机分正常组、模型组、OLE+美沙酮组、美沙酮组, 每组10只.除正常组大鼠皮下注射生理盐水外, 其余大鼠按体重第1天剂量1 mg/kg 海洛因皮下注射, 一天总剂量平分两次注射(下同).第2天之后, 每天递增1 mg/kg, 直至每天剂量达到20 mg/kg, 持续维持该剂量10 d, 共计处理30 d[10].建模后根据替代递减原则, 给予OLE+美沙酮组、美沙酮组大鼠进行脱毒治疗.1～10 d、11 ～ 20 d、21 ～ 30 d美沙酮灌胃剂量依次为: 10, 5, 2.5 mg/kg, OLE+美沙酮组同时灌胃1000 mg/kg OLE[9],正常组和模型组每天灌胃等量生理盐水.

1.2.2 酶活性测定

末次灌胃后将大鼠禁食 24 h 后, 各组实验动物摘眼球取血, 离心分离血清, 按照试剂盒说明测定LPS、AMS、TRS 的活性.

1.2.3 组织学观察

各组实验动物取十二指肠一段, 用预冷的生理盐水冲洗干净, 迅速投入15%的中性福尔马林液固定24 h,常规石蜡包埋切片(6 μm), H.E染色, 在光学显微镜(Olympus, FX-35WA, Japan)下观察并拍照.

1.2.4 数据处理

2 结果

2.1 海洛因依赖大鼠血清消化酶活性的变化

与正常组相比, 模型组大鼠血清AMS、LPS、TRS活性显著降低(P<0.01), 经治疗后, 与模型对照组相比, OLE+美沙酮组和美沙酮组大鼠血清AMS、LPS、TRS活性明显升高(P<0.05, P<0.01), 尤其是OLE+美沙酮组大鼠血清AMS、LPS、TRS活性接近正常水平(P > 0.05, P < 0.05), OLE+美沙酮组大鼠血清AMS、LPS、TRS活性明显高于美沙酮组(P > 0.05, P < 0.05, 表1).

表1 海洛因依赖大鼠血清消化酶活性的变化Table 1 Change of serum digestive enzyme activity in the heroin dependence rats

2.2 各组大鼠十二指肠的病理形态学改变

由图1 A ～ H结果所示, 正常组十二指肠结构完好, 小肠绒毛连贯完整、排列整齐, 绒毛表面覆盖柱状细胞,数量众多, 与杯细胞相间排列, 各细胞大小均匀一致, 粘膜固有层结构完整, 粘膜下层具有大量的十二指肠腺;模型组十二指肠粘膜上皮细胞大量脱落, 小肠绒毛脱落, 散在于肠腔中, 小肠隐窝出现大片空洞, 细胞大量破裂、坏死, 细胞核降解; 美沙酮组十二指肠结构与模型组相比, 病理改变明显减轻; OLE+美沙酮组十二指肠结构基本恢复正常.

图1 各组大鼠十二指肠的组织结构(HE染色, 标尺示20 μm)Fig.1 histological structure of duodenal in each group (HE staining, Bar=20μm)

3 讨论

海洛因为阿片半合成品, 进入体内水解为吗啡, 使胃肠蠕动减慢, 消化液分泌聚减.美沙酮是合成的麻醉性药物, 能完全替代海洛因而控制戒断症状, 但是, 其本身也有一定的成瘾性.在递减撤药的过程中, 患者的心理依赖和恐惧感严重, 出现恶心、呕吐、腹泻、便秘、肌肉关节疼痛、失眠等戒断症状[11].这既是导致脱毒者复吸的原因之一, 也是当今亟待解决的治疗难点.

近年来研究者发现一些天然植物产物联合美沙酮能够改善海洛因依赖者戒断症状, 提高临床脱毒效果.许继艳、徐泽民等[11-12]发现应用附子、干姜、细辛、党参、白术等联合美沙酮能够益气安神, 提高海洛因依赖者的免疫力.胡永等[13]证明罗通定联合美沙酮能改变内源性阿片肽基因表达, 增加脑啡肽和内啡肽的释放.李少成等[14]通过美沙酮合并东莨菪碱进行海洛因依赖临床对照研究, 发现联合治疗抑制胆碱能细胞的过度兴奋, 解除血管痉挛、改善微循环, 促进了戒断症状的消除.我们前期研究发现OLE具有很好的抗氧化、排铅等作用[9,15].但OLE联合美沙酮治疗是否同样协同促进海洛因戒断症状的康复, 尚未见相关报道.十二指肠作为生物体内营养物质的主要消化和吸收场所之一, 在食物消化和营养物质代谢中起着重要作用.多种消化酶在十二指肠中参与食糜的分解与消化.肠粘膜绒毛上皮细胞刷状缘的消化酶在最终消化阶段处于关键地位, 其活性与肠粘膜结构完整性密切相关, 是监测小肠功能受损最敏感的指标[16].

本实验通过研究OLE联合美沙酮对海洛因依赖大鼠消化酶及小肠组织结构的影响, 检测了大鼠血清AMS、LPS、TRS活性, 观察了十二指肠组织结构的变化.结果显示: 模型组大鼠血清AMS、LPS、TRS活性显著降低,十二指肠组织结构发生显著的病理改变, 经OLE联合美沙酮处理后则可以逆转上述指标的变化.本实验还发现, OLE联合美沙酮对海洛因依赖大鼠胃肠道损害的治疗效果要比单纯使用美沙酮处理组更明显.其可能机制是:一方面, 美沙酮具有作用时间较长、不易产生耐受性、药物依赖性低, 能与阿片受体相结合, 调节下丘脑-垂体-肾上腺等系统[17], 从而缓解戒断症状或防止戒断症状出现.另一方面, OLE中含有大量的活性成分, 已有大量的实验证实OLE有明显的抗炎、抗氧化、抗菌等作用[2-9], 增强了机体的抗氧化能力有关.

综上所述, 在采用美沙酮替代递减脱毒治疗的同时辅以OLE治疗, 能起到相辅相成的作用, 减轻了小肠组织的病理损害程度.此研究为中西医结合及药物联合应用进行海洛因脱毒提供了实验依据.

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Effects of olive leaf extract combined methadone on digestive enzyme activity and histological structure of duodenum in the heroin dependence rats

WANG Yu
(Department of Biology and Chemistry, Longnan Teachers’ College, Chengxian 742500, P.R.C.)

Objective: To explore effects of olive leaf extract (OLE) and methadone on gastrointestinal digestive enzyme activity and histological structure of duodenum in the heroin dependence rats.Methods: Forty rats were randomly divided into normal control group, model group, methadone group, and OLE + methadone group.Each group of rats was subcutaneously given heroin with increasing dosage to establish heroin administration except the normal control group.After modeling, the rats were administrated with OLE and methadone for 30 d.Spectrophotometry was applied to measure the activities of lipase (LPS), amylase (AMS) and trypsin (TRS) in serum.The changes of duodenal histological structure were observed by bio-microscopy.Results: Compared with normal control group, the activities of serum LPS, AMS and TRS in model group were significantly lower than those in normal control group.The epithelial cells exhibited abscission and cytolysis, small intestinal crypts vacuolization and disappear even.After OLE and methadone administration, compared with model group, the activities of serum LPS, AMS and TRS were significantly increased. The physiological damages score improved.OLE combined methadone has better treatment efficacy on digestive function damage compared with treatment with single methadone.Conclusion: There is a better curative effect in OLE combined methadone than in single of methadone to treat heroin-induced gastrointestinal injure.The combination of OLE combined methadone has a synergistic effect.

olive leaf extract; heroin; methadone; digestive enzyme; duodenum

R93

A

1003-4271(2014)06-0866-05

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.06.12

2014-07-05

王昱(1973-), 男, 汉族, 甘肃天水人, 教授, 硕士, 研究方向: 细胞与发育生物学.E-mail: gswangyu@126.com

甘肃省自然科学基金项目(1107RJZK243);甘肃省高等学校科研资助项目(1128B-01).