鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

刘丽君万培伟万根刘昌林

（1.吉安市澄江镇人民政府，江西 吉安 343000；2.江西生物科技职业学院；3.江西农业大学；4.南昌市农科院）

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

刘丽君1万培伟2万根3刘昌林4

（1.吉安市澄江镇人民政府，江西 吉安 343000；2.江西生物科技职业学院；3.江西农业大学；4.南昌市农科院）

对江西丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎的病死鸭进行病原菌的分离鉴定、生化试验和药敏试验,初步鉴定为鸭疫里氏杆菌。药敏实验结果发现分离菌对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮高度敏感，对青霉素、红霉素、诺氟沙星、四环素、氨苄西林存在耐药性。

鸭疫里氏杆菌；生化鉴定；药敏试验

鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎[1]，是由鸭疫里氏杆菌(Riemerellaanatipestifer,RA)引起的以家鸭、家鹅、火鸡等多种禽类多发的一种急性或慢性传染病，主要引起1～8周龄尤其是2～3周龄雏鸭大批发病、死亡、生长发育受阻[2]，其病理变化特点为纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎，发病率5%～90%，病死率可高达90%[3]，随着抗药菌广泛、长期大量甚至违规使用，使得鸭疫里氏杆菌耐药现象日益增多，因此用药前最好能做药敏实验，筛选高敏药物，并注意药物的交替使用。目前鸭传染性浆膜炎已成为危害养鸭业的主要细菌性传染病之一,通过细菌分离、鉴定、生化鉴定、药敏实验，对于鸭疫里氏杆菌的预防和治疗有一定的意义。

本研究从初步鉴定为鸭疫里氏杆菌病的病死鸭心包液、肝脏、和脾脏等病料中分别进行了细菌的分离和鉴定，并进行了药敏试验确定了其敏感药，为鸭传染性浆膜炎的有效防制提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源。从江西省丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中取鸭的心脏、肝脏与平皿内，4℃保存待检。

1.1.2 主要试剂。药敏片和生化微量发酵管（购自杭州天和微生物试剂有限公司，4℃冰箱保存）、无菌犊牛血清（购自杭州天杭微生物科技有限公司）。

1.1.3 培养基。胰蛋白胨大豆琼脂培养基（自制）、麦康凯琼脂培养基（自制）。

1.2 实验方法

1.2.1 胰蛋白胨大豆琼脂培养基的制备。酪蛋白胰酶消化物15g、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g、氯化钠5g、琼脂15g、纯化水1000mL，取各成分加热溶解，并调pH值至7.3±0.2，115℃高压灭菌20min。倒入平板、冷却备用。

1.2.2 细菌的分离与培养。无菌取死鸭的心血、肝脏、脑、脾脏等病料并分别划线接种到胰蛋白胨大豆琼脂含有血清的平板、麦康凯琼脂平板2种培养基各2份，一份37℃常规培养24～48h,另一份置入CO2培养箱中，37℃培养24～48h[5]。观察细菌的生长情况、菌落特征，并取生长良好的疑似菌落进行纯化。

1.2.3 细菌形态的观察与革兰氏染色步骤。将纯化培养的菌落进行涂片，进行革兰氏染色：滴加草酸铵结晶紫染色液，染1～3min，水洗；加革兰氏碘液媒染，作用1～2min，水洗；加95%酒精脱色约30s至1 min，水洗；加沙黄水溶液复染30s左右，水洗，染色后，在油镜下观察细菌形态。

1.2.4 生化特征鉴定。选择甘露酣、醋酸盐、枸橼酸盐、H2S、山梨醇、甘露醇、山梨醇、乳糖、木糖、棉子糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、尿素、还原性硝酸盐等微量生化反应管进行试验。用无菌生理盐水将分离菌纯培养物洗下并制成悬液,分别接种于各微量生化反应管，37℃放置48h，观察结果。

1.2.5 药敏试验。按常规药敏片法测定分离菌株对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素、链霉素、呋喃唑酮等13种抗菌素的敏感性。判定标准：抑菌直径

小于10mm为不敏感，10～14mm为中敏，15～20mm高敏，大于20mm为极敏。药敏试验按常规K－B法进行[6]，判断标准参照CLSIM100－S20[7]。

2 结果与分析

2.1 细菌分离及培养特性结果

经24h培养后观察麦康凯培养基上不见细菌生长，在CO2培养箱的胰蛋白胨大豆琼脂固体培养基可见到表面光滑、稍隆起、圆形、边缘整齐、有光泽、直径大小为1～1.8mm的菌落，其分离培养特性和鸭疫里氏杆菌的特性一致。

2.2 染色的形态特征

革兰氏染色后，在油镜下可见分离的阴性短杆菌，菌体呈多形性（菌体长短不一，部分菌体呈长丝状）多数呈单个存在，少数成双排列,没有芽孢,不能运动。其形态特征和鸭疫里氏杆菌的形态一致。

2.3 生化鉴定结果

表1 分离菌的生化鉴定结果

分离菌只与尿素反应呈阳性，其它反应均为阴性，生化鉴定结果与鸭疫里氏杆菌的生化特性基本一致。根据细菌的分离培养实验、其形态观察及生化结果，将该菌鉴定为鸭疫里氏杆菌。2.4药敏试验结果

分离菌对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮为高度敏感，对青霉素、红霉素、四环素、氨苄西林、诺氟沙星有耐药性。（表2）

表2 分离菌的药敏试验结果mm

3 讨论

本试验收集了江西丰城地区鸭场的病例，其临床症状和病理变化符合鸭疫里氏杆菌病的特征，部分分离到了病原菌，根据临床症状、病理变化、细菌形态特性及生化特征等鉴定，确诊为鸭疫里氏杆菌。

对鸭疫里氏杆菌的研究表明鸭疫里氏杆菌容易产生耐药性，由于大量使用和滥用抗生素，鸭疫里氏杆菌对许多抗生素药物都有不同程度的耐药性。而且各地菌株之间耐药谱不尽相同，呈现多样化[8]。

本试验通过药敏试验结果表明，该菌株对庆霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮为高度敏感。所以该场对于鸭疫里氏杆菌的药物防治可以选择以上药物。对青霉素、红霉素、诺氟沙星、四环素、氨苄西林有耐药性，产生耐药性原因可能是养殖者盲目在饲料或饮水中长期添加大量的抗菌药，因此建议发生细菌性疾病时，首先应从改善环境卫生和加强饲养管理入手，不要盲目添加抗生素类药物，同时可结合维生素、中草药进行治疗。因此用药前最好做药敏试验，筛选高敏药物，并注意药物的交替使用以避免其耐药性的产生。

疫苗防控也是防治该病的有效方法之一，注射疫苗可使机体产生有效保护[9、10]，但由于该病的血清型较多，不同血清型间交叉保护率低，因此，疫苗的选择必须与本地流行血清型相吻合[11]，选择优势血清型制备疫苗进行预防。

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1004－2342（2014）05－0011－02

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