HPLC法测定五味子中五味子乙素的含量
2014-02-06姜一婧任广菊杨安博夏丽杰
姜一婧 任广菊 杨安博 郑 鑫 夏丽杰
(吉林省白山市食品药品检验所,白山 134300)
HPLC法测定五味子中五味子乙素的含量
姜一婧 任广菊 杨安博 郑 鑫 夏丽杰
(吉林省白山市食品药品检验所,白山 134300)
目的 采用高效液相色谱法测定五味子中五味子乙素的含量。方法 色谱柱:Diamonsil C18 5μm(4.6×250mm),流动相:甲醇-水(72∶28),流速:0.8ml·min-1,柱温:30℃,检测波长:236nm。结果 五味子在0.1106~1.106μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9993);平均加样回收率为99.78%,RSD为0.16%(n=6)。结论 该方法简便易行,结果可靠,可有效地控制五味子的质量。
五味子;高效液相色谱法;五味子乙素
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。习称“北五味子”。秋季果实成熟时采摘,晒干或蒸后晒干,除去果梗及杂质。[1]增加五味子乙素的含量测定,简便准确,故本文采用高效液相色谱法测定五味子中五味子乙素的含量,能够更有效地控制五味子的质量。
1 仪器与试药样品
岛津2010AHT高效液相色谱仪;五味子乙素对照品(批号:110765-200710,供含量测定用)由中国药品生物制品检定研究院提供,五味子样品为各地抽样样品,甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18 5μm(250×4.6) mm;流动相:甲醇-水(72:28)。检测波长:236nm;流速:0.8ml·min-1;柱温:30℃。在此条件下,供试品中五味子乙素与其相邻峰完全达到基线分离,保留时间为26min左右,理论板数按五味子乙素峰计N=14122。
2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备 对照品溶液的制备,取五味子乙素对照品适量,加甲醇制成每1ml含50µg的溶液,摇匀,即得。
供试品溶液的制备, 取样品粉末0.5g,置50ml量瓶中,加甲醇约30ml,超声提取30分钟,取出,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3 试剂干扰试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、甲醇液各10μl,分别注入液相色谱仪,测得各液相色谱图,色谱图见图1~3。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有相应的色谱峰,而试剂无干扰。
图1 五味子乙素对照品色谱图
图2 供试品色谱图
图3 甲醇色谱图
2.4 线性关系考察 取五味子乙素对照品,精密称定,用甲醇配制成浓度为0.00553 mg·ml-1的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.2,0.4,0.8,1,1.4,1.8,2.0 ml分别置10ml量瓶中,各加甲醇稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件分别吸取10μl注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制关系曲线,回归方程为:Y=4236626X+82510 r2=0.9993。五味子乙素在0.1106~1.106μg范围内呈良好的线性关系。符合外标法定量测定的要求。
表1 标准曲线数据
标准曲线曲线图
2.5 精密度试验 取同一供试品溶液,连续进样6次,依法测定,峰面积的RSD=0.64%,表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,每间隔一定时间进样1次,依法测定,峰面积的RSD=1.16%(n=6),结果表明供试品溶液在24小时内稳定。
2.7 重现性试验 取同一批样品,依法独立提取测定6次,结果测得样品中五味子乙素含量的RSD=1.01%(n=6)。
2.8 回收率试验 取已测知含量的同批样品(含量为0.635 %,即6.35mg/g)0.25g,取6份,精密称定,取其中两份分别精密加入五味子乙素对照品0.4685mg (五味子乙素: 0.0937mg/ml,精密加入5ml),再取两份分别精密加入五味子乙素对照品0.937mg (五味子乙素:0.0937mg/ml,精密加入10ml),最后两份分别精密加入五味子乙素对照品1.4055mg (五味子乙素:0.0937mg/ ml,精密加入15ml),依法测定,计算回收率,结果见表1,平均回收率为99.78%,RSD=0.16%。
计算公式:
表2 回收率试验结果
2.9 样品测定 依法测定十批样品,结果见表2。
表3 十批样品测定结果
3 讨论
3.1 样品前处理方法曾试验用乙醇提取测定,结果与甲醇比较,甲醇提取含量大,故选用甲醇作为提取溶剂。
3.2 从供试品液相色谱图看,在五味子乙素峰的前后密集小峰,笔者曾试图通过D101大孔吸附树脂柱或氧化铝柱、氧化铝加活性炭柱进行分离,结果未见改善且含量降低。还曾试验用不同成分、不同比例的流动相进行分离,结果以所选系统为最佳,虽然相邻峰较近,但已达到基线分离,分离度为1.8、1.5。
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京中国医药科技出版社,2010:61
10.3969/j.issn.1672-2779.2014.12.073
1672-2779(2014)-12-0111-02
杰 本文校对:刘 丽
2013-11-27)