HPLC法测定五味子中五味子乙素的含量

2014-02-06姜一婧任广菊杨安博夏丽杰

中国中医药现代远程教育 2014年12期

关键词：乙素五味子回收率

姜一婧任广菊杨安博郑鑫夏丽杰

(吉林省白山市食品药品检验所，白山 134300）

HPLC法测定五味子中五味子乙素的含量

姜一婧任广菊杨安博郑鑫夏丽杰

(吉林省白山市食品药品检验所，白山 134300）

目的采用高效液相色谱法测定五味子中五味子乙素的含量。方法色谱柱：Diamonsil C18 5μm（4.6×250mm），流动相：甲醇-水（72∶28），流速：0.8ml·min-1，柱温：30℃，检测波长：236nm。结果五味子在0.1106～1.106μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9993）；平均加样回收率为99.78%，RSD为0.16%(n=6)。结论该方法简便易行，结果可靠，可有效地控制五味子的质量。

五味子；高效液相色谱法；五味子乙素

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。习称“北五味子”。秋季果实成熟时采摘，晒干或蒸后晒干，除去果梗及杂质。[1]增加五味子乙素的含量测定，简便准确，故本文采用高效液相色谱法测定五味子中五味子乙素的含量，能够更有效地控制五味子的质量。

1 仪器与试药样品

岛津2010AHT高效液相色谱仪；五味子乙素对照品（批号：110765-200710,供含量测定用）由中国药品生物制品检定研究院提供，五味子样品为各地抽样样品，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18 5μm(250×4.6) mm；流动相：甲醇-水（72：28）。检测波长：236nm；流速：0.8ml·min-1；柱温：30℃。在此条件下，供试品中五味子乙素与其相邻峰完全达到基线分离，保留时间为26min左右，理论板数按五味子乙素峰计N=14122。

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备对照品溶液的制备，取五味子乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含50µg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备，取样品粉末0.5g，置50ml量瓶中，加甲醇约30ml，超声提取30分钟，取出，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 试剂干扰试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液、甲醇液各10μl，分别注入液相色谱仪，测得各液相色谱图，色谱图见图1～3。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相应的色谱峰，而试剂无干扰。

图1 五味子乙素对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 甲醇色谱图

2.4 线性关系考察取五味子乙素对照品,精密称定,用甲醇配制成浓度为0.00553 mg·ml-1的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1，1.4，1.8，2.0 ml分别置10ml量瓶中，各加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别吸取10μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制关系曲线，回归方程为：Y＝4236626X+82510 r2＝0.9993。五味子乙素在0.1106～1.106μg范围内呈良好的线性关系。符合外标法定量测定的要求。

表1 标准曲线数据

标准曲线曲线图

2.5 精密度试验取同一供试品溶液，连续进样6次，依法测定，峰面积的RSD=0.64%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验取同一供试品溶液，每间隔一定时间进样1次，依法测定，峰面积的RSD=1.16%(n=6)，结果表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.7 重现性试验取同一批样品,依法独立提取测定6次，结果测得样品中五味子乙素含量的RSD=1.01%(n=6)。

2.8 回收率试验取已测知含量的同批样品（含量为0.635 %，即6.35mg/g）0.25g,取6份，精密称定，取其中两份分别精密加入五味子乙素对照品0.4685mg (五味子乙素： 0.0937mg/ml，精密加入5ml)，再取两份分别精密加入五味子乙素对照品0.937mg (五味子乙素：0.0937mg/ml，精密加入10ml)，最后两份分别精密加入五味子乙素对照品1.4055mg (五味子乙素：0.0937mg/ ml，精密加入15ml)，依法测定，计算回收率，结果见表1，平均回收率为99.78%，RSD=0.16%。

计算公式：