结核分枝杆菌检验方法分析

周 毅

尚志市人民医院，黑龙江 尚志 150601

结核分枝杆菌检验方法分析

周 毅

尚志市人民医院，黑龙江 尚志 150601

目的探讨结核分枝杆菌的临床检验方法。方法选取2012年5月～2013年9月我院收治的由结核分枝杆菌引起疾病的患者24例，对临床病灶位置采集标本进行检验。结果通过检验培养分析结核分枝杆菌对紫外线的耐受程度，90%结核分枝杆菌在3～5小时内紫外线照射下均能被杀死。讨论通过临床检验分析，结核分枝杆菌营养要求高、生长缓慢，结核分枝杆菌对紫外线的抵抗力弱。

结核分枝杆菌；检验；方法

结核分枝杆菌复合群包括结核分枝杆菌（M.tuberculosis）、牛分枝杆菌（M．bovis）、非洲分枝杆菌（M．africanum）和田鼠分枝杆菌（M.microti）。前三种对人类有致病性。选择2012年5月～2013年9月我院收治的由结核分枝杆菌引起疾病的患者24例，对临床检验资料进行总结如下。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

选择2012年5月～2013年9月，我院收治的由结核分枝杆菌引起疾病的患者24例，其中男性患者14例，女性患者10例。对病灶部位进行标准采集做病理检验，确诊疾病病原菌为结核分枝杆菌。

1.2 方法

结核病的标本采集视病变部位而定。一般肺结核可以采集痰、支气管洗涤或喉拭子；结核性胸膜炎采集胸腔积液、腹水等；肠结核可采集粪便；肾结核者采集尿液；皮肤结核采集脓液或伤口分泌物。各种结核都可以采集病灶组织标本。具体的标本采集方法及涂片方式：（1）痰标本的采集：留取清晨咳痰3～5 ml。如咳痰少可以收集前一天晚至清晨咳出的全部痰；也可以通过3%～l0%的盐水雾化吸入或口服氯化铵促进排痰[1]。（2）直接涂片：因直接挑取标本（或处理标本）涂抹载玻片而得名。根据涂抹的厚度可以分为薄片和厚片。取0.0l ml标本涂抹10 mm×10 mm范围为薄片，取0.1 ml涂抹20 mm×15 mm为厚片。

1.3 统计分析

利用SPSS 19.0软件建立数据库，对临床数据进行统计对比处理，计量结果采用t检验，P＜0.05，则差异有统计意义。

2 结果

通过检验培养分析结核分枝杆菌对紫外线的耐受程度，发现90%结核分枝杆菌在3～5小时内紫外线照射下均能被杀死。

3 讨论

结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，单个、成堆或呈束状排列，大小（0.3～0.6）μm×（1～4）μm，形态如球状、串珠状或丝状，革兰染色不易着色，其抗酸染色阳性，一般采用齐-尼（Ziehl-Neelsen，E-N）抗酸染色后，结核分枝杆菌呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色。结核分枝杆菌在液体培养基中细菌生长较快，一般1～2周即可生长，分枝杆菌先于管底生长，可出现沉淀，然后随管壁上升到表面生长形成菌膜，有毒的菌株在液体培养基中呈束状生长。利用分枝杆菌能耐酸碱的特性，用酸碱处理标本使标本中的杂菌被抑制甚至杀死，同时还可以溶解标本中的黏液、脓汁、蛋白等，使其中包裹的分枝杆菌释放出来，提高检出率。可以采用下述方法来处理：（1）酸处理法：取痰标本数毫升，加入2～4倍的4%硫酸（依据标本的黏稠度来定），振荡混匀，室温放置20分钟，其间振摇2～3次促进液化。该法适用于接种碱性L-T培养基。（2）碱处理法：取痰标本数毫升，加入2～4倍量2%氢氧化钠（依据标本的黏稠度来定），振荡器上振荡5～10分钟（或置室温30分钟），其间振摇2～3次。该法适用于接种酸性L-J培养基。（3）苯扎溴铵法：将痰标本加入1～2倍量的0.1%胰蛋白酶溶液，振荡至消化均匀，加入l／2量的0.3%新洁尔灭，混匀后室温放置5分钟[2]。

结核分枝杆菌的染色常采用抗酸染色和金胺〇染色。（1）齐-尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色：将标本原涂片经干燥、火焰固定后加初染液，加热至出现蒸气3～5分钟，不能沸腾，不能蒸干，冷却水洗。加脱色液直至红色刚好消退（不得超过l0分钟），水洗。加复染液复染0.5～1.0分钟（集菌染片可1～3分钟），水洗，自然干燥后镜检[3]。结果抗酸菌呈红色或粉红色，背景和其他杂菌呈蓝色。取碱性复红贮存液（取型号为89的碱性复红液溶于95%乙醇100 m1中）10 ml加5%碳酸水溶液90 ml，混匀即是初染液。浓盐酸3 ml加95%乙醇97 ml，混匀即为脱色液。而复染色液则是取亚甲蓝0.3 g溶于95%乙醇50 ml，然后加水至100 ml，混匀。用时10倍稀释即可。（2）金胺〇染色：标本经涂片干燥、火焰固定后，滴加初染液，10～15分钟后水洗。加脱色液l～2分钟直至无黄色，水洗。加复染液l～2分钟，水洗，自然干燥后荧光显微镜检。结果为背景黑色，抗酸菌显金黄色或橙黄色荧光。

细菌鉴别显示，凡7天内生长菌落者为快速生长分枝杆菌（RunyonⅣ群），7天以上生长者为慢生长分枝杆菌，而结核分枝杆菌为慢生长分枝杆菌。分离菌株接种3支L-J培养基，2支用铝箔或黑纸包裹密封，另1支不包纸，置于37℃5%～l0%二氧化碳条件下培养。当未包纸的试管内有肉眼可见的菌落生长时，打开l支包纸管观察其菌落有无色素产生。如果有色素产生则为暗产色菌（Runyon，Ⅱ群）；若无色素产生，则开启试管胶塞通气，增加管内氧含量，并做光照试验：以100 W灯泡在相距50 cm处照射3小时，继续置于37℃环境中培养3天，每天观察l次，并与另1支未打开的纸包管比较产生的色素。产生色素者为光产色菌（Runyon l群）。

结核分枝杆菌在5%～l0%的C02条件下对其生长有促进作用，其对营养要求高，并且对某些营养成分有特殊的要求。例如，结核分枝杆菌专嗜甘油为碳源，分枝杆菌则以丙硐酸盐为碳源。天冬酰胺是结核分枝杆菌生长最好的氮源，钾、镁、铁、磷等无机离子均对其生长有促进作用。

［1］ 毛太兰． 小金县疾控中心结核分枝杆菌检测方法探讨[J]． 中西医结合心血管病电子杂志，2014, 35（5）: 3．

［2］ 周珍文． 分枝杆菌的实验室诊断[J]． 中华检验医学杂志，2014，37（3）: 239-240．

［3］ 杜彦懿，王平，张文莉，等． 涂片镜检法与培养法检测结核分枝杆菌的结果比较． 内蒙古中医药，2011，31(24): 83-84．

The Analysis on Testing Methods of Mycobacterium Tuberculosis

ZHOU Yi , Shangzhi People's hospital, Shangzhi Heilongjiang 150601, China

ObjectiveThe clinical testing methods of mycobacterium tuberculosis is to be investigated.MethodsTested the clinical collecting specimens of lesion location from 24 cases of patients with mycobacterium tuberculosis who were treated in hospital from May 2012 to September 2013.ResultsBy examining and testing the tolerance degree of mycobacterium tuberculosis to UV, 90 percent of mycobacterium tuberculosis could be killed with explosion to UV in 3～ 5 hours.ConclusionClinical testing shows that mycobacterium tuberculosis requires high nutrition, and it grows with slow speed, the resistance power of mycobacterium tuberculosis to UV is rather weak.

Mycobacterium tuberculosis, Testing, Methods

R450

】B

1674-9316（2014）10-0048-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.10.024