枇杷叶黄酮类化学成分研究

吕 寒， 于 盱， 陈 剑， 李维林

（ 江苏省·中国科学院植物研究所， 江苏 南京 210014）

枇杷叶黄酮类化学成分研究

吕 寒， 于 盱， 陈 剑， 李维林*

（ 江苏省·中国科学院植物研究所， 江苏 南京 210014）

目的 研究中药枇杷叶中黄酮类化学成分。 方法 采用反复硅胶、 反相硅胶、 凝胶 LH-20 柱以及制备薄层等方法分离枇杷叶黄酮提取物中的化学成分，运用化学和有机波谱分析方法确定化合物结构。结果 从枇杷叶中分离得到9 个黄酮类化合物， 经鉴定分别为山柰酚 (1)， 槲皮素 (2)， 3，5，7-三羟基黄酮 (高良姜素)(3)， 橙皮苷 (4)， 金丝桃苷 (5)， 山柰酚-3，7-二葡萄糖苷 (6)， 异槲皮苷 (7)， 槲皮苷 (8)， 芦丁 (9)。 结论 化合物 3、 4 和 6 为首次从该植物及该属植物中分离得到。

枇杷叶；化学成分；黄酮

枇杷叶为蔷薇科枇杷属植物枇杷 Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥叶， 是一味常用中药，具有清肺止咳、降逆止呕的作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口渴等症状［1］。 目前已经从枇杷叶中分离出三萜酸、 黄酮类、 多酚、 倍半萜及其苷类等成分［2］。近年来研究发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化、降血脂、抗炎、 增强免疫 等作用［3］。 为进一步研究枇杷叶的黄酮类化合物，本实验对枇杷叶黄酮类成分进行了分离。

1 仪器与材料

熔点用显微熔点测定仪 (北京泰克仪器有限公司) 测定 (温度未校正)； 核磁共振谱用 Bruker AV-300 型核磁共振仪测定； 质谱用 Agilent1100 测定。 Büchi中压柱； 柱层析用硅胶及薄层色谱用硅胶为硅胶 G(青岛海洋化工厂)，RP-18(40 ～63 μm)(Merck 等)， Sephadex LH-20(Pharmacia等)， 聚酰胺 (100 ～200 目)(青岛海洋化学厂)。柱层析溶剂由上海化学试剂厂生产，均为分析纯。药材采集自江苏苏州，经江苏省中国科学院植物研究所李维林研究员鉴定， 为枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb.)Lindl.的干燥叶， 留样于江苏省中国科学院植物研究所标本馆。

2 提取与分离

取干燥枇杷叶3 kg， 粉碎， 80%乙醇回流提取3次， 60 ℃减压浓缩， 浓缩液离心， 上清液上D101 树 脂，以 水，10% 乙 醇， 50% 乙 醇 洗 脱。50%乙醇洗脱部分，减压浓缩， 浓缩液经硅胶柱层析， 以乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱分段。 然后采用硅胶柱层析，其中乙酸乙酯洗脱部位，结合三氯甲烷-乙酸乙酯薄层制备， 得到化合物 1(10 mg)， 2 (8 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶1) 部位经三氯甲烷-乙酸乙酯反复洗脱得到化合物 3(10 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶3) 部位采用三氯甲烷-甲醇反复洗脱得到化合物 4(30 mg)， 乙酸乙酯-甲醇(10 ∶4 ～10 ∶7) 部分， 经过三氯甲烷-甲醇洗脱，RP-18 柱层析结合 sephadex LH-20 反复洗脱得到化合物5(25 mg)、 6(10 mg)、 7(28 mg)、 8(23 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶8) 部位经过 sephadex LH-20 反复洗脱得到化合物 9(10 mg)。

3 结构鉴定

化合物1: 黄色粉末， 易溶于甲醇。 盐酸镁粉反应呈阳性， 三氯化铝反应呈黄绿色荧光。 mp 278 ～279 ℃， EI-MS(m/z)286(M+)。 薄层色谱分析与山柰酚对照品 Rf值一致， 鉴定该化合物为山柰酚 (kaempferol)［4-5］。

化合物2: 黄色粉末， 易溶于甲醇。 盐酸镁粉反应呈阳性， 三氯化铝反应呈黄绿色荧光。 mp＞300 ℃， EI-MS(m/z)302(M+)。 薄层色谱分析与槲皮素对照品 Rf值一致， 鉴定该化合物为槲皮素 (quercetin)［4-5］。

化合物3: 黄色粉末， 溶于甲醇。盐酸镁粉反应呈阳性， 三氯化铝反应呈黄色荧光， mp 214 ～216 ℃， EI-MS(m/z)270(M+)，1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ:9.94(1H， s， 3-OH)，10.31(1H， s， 7-OH)， 12.47(1H， s， 5-OH)，8.04(2H，d， J=8.5Hz，H-2'， 6')， 7.50(3H，m， H-3'， 4'， 5')，6.18(1H， d， J=2.0 Hz，H-6)， 6.43(1H， d， J=2.0 Hz， H-8)。13C-NMR (DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:144.9(C-2)，135.5(C-3) ， 175.8(C-4)， 160.6(C-5)， 98.1 (C-6)， 163.8(C-7)， 93.4(C-8) ， 156.1(C-9)，102.9(C-10)，131.6(C-1')， 128.2(C-2'， 6')，127.9(C-3'， 5')，129.9(C-4')。 对照 文 献 ［6-7］， 鉴定该化合物为 3，5，7-三羟基黄酮 (高良姜素， galangin)。

化合物 4: 黄色粉末，易溶于甲醇，mp 258 ～260 ℃，三氯化铝反应呈黄色荧光， Molish 反应呈阳性。 ESI-MS:610(M+)。1H-NMR(DMSO-d6，300 MHz， TMS) δ:1.08(3H， d， J=5.67 Hz， 鼠李 糖-CH3)， 2.77(1H， m， H-3)， 3.15-3.62 (10H， m，糖质子)，3.79(3H，s， J=12.15 Hz， -OCH3)， 4.56(1H， brs， 鼠 李 糖 端 基 H)， 4.96 (1H， d， J=6.9 Hz， 葡萄糖端基 H， β构型)，5.49(1H， d， J=10.1 Hz，H-2)， 6.12(2H，d，J=3.96 Hz， H-6， 8)，6.92(3H，m，H-2'， 5'，6')， 9.03(1H， s， 3'-OH) ， 12.01(1H， s， 5-OH)。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ: 55.8(-OCH3)， 78.3(C-2)，42.1(C-3)，196.8 (C-4)， 163.0(C-5)，96.4(C-6)，165.2(C-7)， 95.6(C-8)， 162.4(C-9)， 103.4(C-10)，131.0(C-1')， 114.2(C-2')， 146.6(C-3')，148.0(C-4')， 112.4(C-5')， 117.8(C-6')；糖碳信号:3-O-glu 99.6(C-1″)，73.0(C-2″)，75.6 (C-3″)， 70.8(C-4″)， 76.3(C-5″)， 66.1(C-6″)， 6-O-rhaδ100.6(C-1‴)， 70.3(C-2‴) ， 70.8 (C-3‴)， 69.7(C-4‴)， 68.3(C-5‴)， 17.8(C-6‴)。 对照文献 ［8-9］，鉴定该化合物为 5，4'-二羟基-3'-甲氧基-二氢黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖-(6→1)-α-L-鼠李糖苷 (橙皮苷， hesperidin)。

化合物 5: 黄色粉末，易溶于甲醇，mp 231 ～232 ℃，盐酸镁粉反应呈阳性， 三氯化铝反应呈黄色 荧 光， Molish 反 应 呈 阳 性。 ESI-MS:464 (M+) 。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ: 3.01 ～3.64(6H， m， 葡萄糖质子)， 5.36(1H，d，J=8.0 Hz， 葡萄糖端基 H，β构型)， 6.17(1H，s， H-6)， 6.37(1H， s， H-8)， 6.80(1H， d， J= 8.0 Hz， H-5')， 7.52(1H， s， H-2')， 7.67(1H，d，J=8.3 Hz， H-6')。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:156.0(C-2)， 133.4(C-3)，177.2(C-4)， 161.1(C-5)， 98.9(C-6)， 164.9 (C-7)， 93.6(C-8) ， 156.3(C-9)， 103.5(C-10)，120.9(C-1')， 115.1(C-2')，144.8(C-3')， 148.6(C-4')， 115.8(C-5')，121.9(C-6')； 糖 碳 信 号:102.0(C-1″)， 71.2(C-2″)，73.2(C-3″)， 67.8(C-4″)， 75.8(C-5″)， 60.1 (C-6″)。 对照文献 ［9-11］， 鉴定该化合物为槲皮素-3-O-β-半乳糖苷 (金丝桃苷， hyperoside)。

化合物6:黄色粉末， 盐酸镁粉反应呈阳性，三氯化铝反应呈黄绿色荧光。 ESI-MS(m/z)610 (M+)， mp 222 ～223 ℃。1H-NMR(DMSO-d6， 400 MHz， TMS) δ:12.46(5-OH)， 8.03(2H，dd，J=8.5 Hz， H-6'， 2')， 6.89(2H， d， J=9.0 Hz，H-3'， 5')， 6.38(1H， s， H-8) ， 6.15(1H， s， H-6)， 5.70(1H， d， J=7 Hz， H-1″)，4.61(1H，d，J=7.7 Hz， H-1‴)， 3.07 ～3.83(12H，m， 糖质子)。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ: 156.4(C-2) ， 132.8(C-3)， 177.2(C-4)，161.2(C-5)， 98.0(C-6)， 162.1(C-7)， 93.7 (C-8)， 155.3(C-9)， 104.1(C-10)，120.9(C-1')， 115.3(C-2'， 6')， 130.9(C-3'， 5')，159.9(C-4')， 7-O-glc 103.5(C-1″)， 74.4(C-2″)， 76.6(C-3″)， 69.7(C-4″)，77.4(C-5″)，60.8(C-6″)，3-O-glu 99.0(C-1‴)， 74.4(C-2‴)， 76.5(C-3‴)， 69.5(C-4‴)， 77.0(C-5‴)，60.5(C-6‴)。 对 照文献［12-13］， 鉴 定该化合物为山柰酚-3，7-二葡萄糖苷 (kaempferol-3，7-diglucoside)。

化合物 7: 黄色粉末， 易溶于甲醇， mp 234 ～235 ℃， 盐酸镁粉反应呈阳性， 三氯化铝反应呈黄色 荧 光， Molish 反 应 呈 阳 性。 ESI-MS:464 (M+)。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ: 3.07 ～3.57(6H， m， 葡萄糖质子)， 5.69(1H，d， J=7.0 Hz， 葡萄糖端基 H， β构型)， 6.17 (1H， d，J=1.7 Hz， H-6)， 6.37(1H，d， J=1.7 Hz，H-8)，6.86(1H， d，J=8.5 Hz， H-5')， 7.67 (1H， d， J=2.0 Hz， H-2')， 7.54(1H， dd， J= 8.3， 2.0 Hz， H-6')。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:156.3(C-2)， 133.0(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)， 98.8(C-6)， 164.7 (C-7)， 93.5(C-8)， 155.6(C-9)， 104.2(C-10)， 121.1(C-1')， 115.4(C-2')， 144.9(C-3')，148.6(C-4')，115.6(C-5')， 121.8(C-6')； 糖碳信号:103.7(C-1″)， 74.4(C-2″)，76.8(C-3″)， 69.6(C-4″)， 77.5(C-5″) ， 60.7(C-6″)。对照文献 ［14］， 鉴定该化合物为槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷 (异槲皮苷， isoquercetin)。

化合物 8: 黄色粉末， mp 183 ～185℃， 盐酸-镁粉 反 应 阳 性， Molish 反 应 阳 性。 ESI-MS:448 (M+)。1H-NMR(300 MHz， DMSO) δ:0.81 (3H， d， J=5.7 Hz， 鼠李糖-CH3)，3.20 ～3.97 (4H， m， 糖质子)，5.25(1H， d， J=1.3 Hz，H-1〞)， 6.20(1H， d， V=2.0 Hz， H-6)， 6.39 (1H， d， J=2.0 Hz， H-8) ， 6.86(1H， d， J=8.3 Hz，H-5')， 7.25(1H，dd， J=8.3，2.0 Hz， H-6')， 7.29(1H， d， J=2.0 Hz， H-2')，9.32 (1H， s， 3'-OH)， 9.69(1H， s， 4'-OH) ， 10.85 (1H， s， 7-OH)， 12.65(1H， s， 5-OH)。13C-NMR (125 MHz， DMSO) δ:156.4(C-2)， 134.2(C-3)， 177.7(C-4)， 161.2(C-5)，98.6(C-6)，164.1(C-7) ， 93.7(C-8)， 155.4(C-9)， 104.0 (C-10)， 121.1(C-1')， 115.4(C-2')， 145.1 (C-3')， 148.4(C-4')， 115.6(C-5')， 120.7 (C-6')； 糖碳信号:101.8(C-1‴)，70.2(C-2‴)，70.7(C-3‴)， 71.1(C-4‴) ， 68.3(C-5‴)， 17.4 (C-6‴)。 对照文献 ［14-15 ］， 鉴定该化合物为槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷 (槲皮苷，quercetrin)。

化合物 9: 黄色粉末，mp 176 ～177 ℃，易溶于甲醇，盐酸镁粉反应呈阳性，三氯化铝反应呈黄色荧光， Molish 反应呈阳性。 薄层色谱分析与芦丁对照品 Rf值一致， 与对照品混合熔点不下降， 鉴定为芦丁 (rutin)。［S］.北京: 中国医药科技出版社， 2010.

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Studies on the flavonoids from leaf of Eriobotrya japonica(Thunb.)Lind l.

LÜHan， YU Xu， CHEN Jian， LIWei-lin*
(Institute of Botany， Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences， Nanjing 210014， China)

AIM To investigate the flavonoids from loquat leaf(Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.). M ETHODS Compounds from Loquat leaf were isolated by a combination of silica gel， ODS， sephadex LH-20 column chromatographies and preparative TLC.Their structureswere identified by chemical and spectralmethods. RESULTS Nine flavonoidswere isolated and identified as kaempferol(1) ， quercetin(2) ， galangin(3) ，hesperidin(4) ， hyperoside(5) ， kaempferol-3 ，7-diglucoside(6) ， isoquercetin(7) ， quercetrin(8) ， rutin(9) from loquat leaf.CONCLUSION Compounds 3、 4 and 6 are obtained from this plant and Eriobotrya genus for the first time.

leaf of Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.； chemical constituent；flavonoid

R284.1

:A

:1001-1528(2014)02-0329-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.025

2013-03-27

国家自然科学基金项目 (21102058)； 江苏省科技基础设施建设计划-科技公共服务平台项目 (BM2011117)

吕 寒 (1980—)， 女， 硕士， 助理研究员， 研究方向: 植物化学。 Tel:(025)84347081

*通信作者: 李维林 Tel:(025)84347002， E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net