胃癌患者外周血及癌组织中调节性T细胞和Foxp3的表达意义

卢 芩 俞 婷 张有珍 陈 霞

(东南大学附属中大医院消化科，江苏 南京 210009)

近年来国内外研究证明调节性T细胞(Tregs)如CD4+CD25+T细胞在肿瘤的发生、发展、各种抗肿瘤治疗及预测预后的过程中有十分重要的意义〔1〕。Foxp3与Tregs的发育、功能维持和表达存在一定的关系〔2〕。本研究通过测定胃癌患者外周血及癌组织中Tregs和Foxp3水平，了解Tregs和Foxp3水平在胃癌中的意义。

1 资料和方法

1.1一般资料 随机选取我院2010年4月至2013年8月住院治疗的40例经胃镜或手术病理证实的胃癌患者，所有患者在入选前均未进行相关的抗肿瘤治疗，其中男26例，女14例，年龄31～70〔平均(56.72±1.18)〕岁。参照2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UICC/AJCC)分期标准〔3〕进行胃癌TNM 分期，Ⅰ+Ⅱ期10例，Ⅲ期23例，Ⅳ期7例；分化程度：低分化18例，中分化10 例，高分化12例；肿瘤部位：贲门及胃底11例，胃体9例，幽门及胃窦20例；肿瘤大小：直径<5 cm者15 例，直径≥5 cm者25 例。有淋巴结转移者21例。另选取我院同时期的23例健康体检者，其中男14例，女9例，年龄35～72〔平均(60.47±3.09)〕岁。两组一般资料(年龄、性别等)无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。所有研究对象均对本研究内容知晓，并签署知情同意书。

1.2检测方法 采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达水平：入院第二日清晨采集静脉血液5 ml，根据文献〔4〕的方法制备细胞，并进行细胞染色，然后用Becton Dikison FACS Calibur 流式细胞仪测定淋巴细胞表面荧光素的荧光强度，在FITC-CD4/PE-CD25参数图上计算CD4+CD25+Foxp3+T细胞占所有CD4+细胞的比例。采用免疫组化法检测胃癌及癌旁组织中Foxp3+T细胞的表达水平：术后留取癌组织，另在距肿瘤边缘>5 cm处取癌旁组织标本，将癌组织标本和癌旁组织标本制成石蜡块，采用文献〔5〕的方法进行免疫组化染色，染色后置于显微镜上观察，细胞核呈棕色为阳性细胞，取5个高倍镜视野进行阳性细胞计数，结果取平均值。

1.3统计学方法 应用SPSS17.0软件，采用两独立样本的t检验及Pearson相关分析。

2 结 果

2.1两组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达水平比较 胃癌组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比为(6.72±1.20)%，显著高于对照组(3.52±1.03)%(t=10.712，P=0.000)。

2.2胃癌与癌旁组织中Foxp3+T细胞的表达水平比较 胃癌组织中的Foxp3+T细胞有(70.82±12.17)个/mm2，显著高于癌旁组织(20.47±10.21)个/mm2(t=20.046，P=0.000)。另外，显微镜下可见胃癌组织形态发生改变，而癌旁组织腺体结构正常，阳性细胞数较少。

2.3胃癌外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞及癌组织中Foxp3+T细胞表达水平的影响因素分析 胃癌TNM分期越高，患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平越高(P<0.05)；存在淋巴结转移的患者，其外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平均高于未发生淋巴结转移者(P<0.05)；胃癌分化程度越低，癌组织中的Foxp3+T细胞水平越高(P<0.05)。胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比与分化程度不同、肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05)；癌组织中的Foxp3+T细胞水平与肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05)。

2.4胃癌外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞和癌组织中Foxp3+T细胞的关系 胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比和癌组织中的Foxp3+T细胞水平呈显著正相关(r=0.850，P<0.05)。

3 讨 论

胃癌的发生和发展是一个多阶段、多因素参与的过程，与机体的免疫状态密切相关，恶性肿瘤患者往往会出现机体免疫功能状态低下和紊乱，主要原因为免疫功能失调，其中患者的细胞免疫功能状态尤其至关重要，反之患者的免疫状态在一定程度上可预示着肿瘤的发展和预后〔6〕。研究证明：宿主对机体内发生的肿瘤组织存在自发性抵抗，且以细胞免疫为主。细胞免疫一般由T淋巴细胞介导，T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要效应细胞，而且在调节免疫反应中发挥着重要作用〔7〕。国内外研究发现：Tregs在肺癌、胃肠道肿瘤、卵巢癌等多种肿瘤患者的外周血和肿瘤局部存在着数量增加现象，其可能的机制：一方面，Tregs数量增加可限制免疫反应的发生，导致机体免疫功能受损，抑制肿瘤免疫效应，肿瘤细胞得到保护而不断生长；另一方面，肿瘤细胞生长过程中可分泌一些免疫抑制因子如肿瘤坏死因子(TGF-β)、白细胞介素(IL-10)等，作用于机体从而促进Tregs的增殖。因此，Tregs的表达水平在人类肿瘤的免疫调节和治疗中的有着重要的意义〔8〕。

CD4+CD25+作为Tregs的一员，具有免疫抑制和免疫无能两大特性，不仅能抑制机体的抗肿瘤免疫效应，还能抑制自身免疫性疾病的发生，可维持机体免疫功能的稳定性〔9〕。Foxp3为叉头状/翅膀状螺旋回转录因子，在Tregs细胞表面特异表达，对CD4+CD25+T细胞的发育和功能发挥起着重要作用，可作为CD4+CD25+T细胞的功能特异性标志和特异性鉴定。小鼠实验研究发现：将小鼠的Foxp3基因敲除后，其体内产生的CD4+CD25+T细胞不具备调节功能，而转染了Foxp3基因的CD4+CD25-细胞不但可产生CD4+CD25+nTreg，而且在体外可抑制原态T淋巴细胞的增殖，减少小鼠自身免疫疾病的发生性。由此表明，Foxp3是诱导产生Tregs细胞的一种关键因子，是细胞发育的一个重要开关〔10，11〕。

本次研究发现，CD4+CD25+Foxp3+T细胞与肿瘤免疫逃逸有关，肿瘤产生后，体内的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比将会升高，细胞发生癌变可导致组织Foxp3+T细胞水平升高；另外，外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达与胃癌分期、是否转移有关，分期越高、表达量越高、转移的可能性大；癌组织中的Foxp3+T细胞水平与胃癌TNM分期、是否淋巴结转移及分化程度有关，分期越高、分化程度越低、表达量越高、转移的可能性大。进一步验证了胃癌组织的Foxp3+T细胞水平越高，外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达越高。

4 参考文献

1李 洪,李家萱,张志哲,等.糖尿病合并肺部感染血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义〔J〕.广西医学,2011;33(2):162-4.

2Preston CC, Maurer MJ,Oberg AL,etal.The ratios of CD8+ T Cells to CD4+CD25+ FOXP3+ and FOXP3- T cells correlate with poor clinical outcome in human serous ovarian cancer〔J〕.Plos One,2013;8(11):e80063.

3宋卫峰,姚丽君,裘正军,等.AJCC第7版与第6版胃癌TNM分期的比较:一项基于预后分析的918例中国胃癌人群的回顾性研究〔J〕.肿瘤,2012;32(8):615-21.

4冯 欢,郭胤仕.慢性荨麻疹患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达〔J〕.临床皮肤科杂志,2011;40(3):136-8.

5吴 铃,孟 刚.FOXP3+Tregs、IL-6在滤泡性淋巴瘤微环境中的表达及意义〔J〕.安徽医科大学学报,2011;46(7):662-6.

6陈 欣.外周血淋巴细胞计数在恶性肿瘤预后中的研究进展〔J〕.肿瘤预防与治疗,2013;26(6):367-70.

7刘昌丹,肖元初.恶性肿瘤患者免疫细胞治疗36例观察与护理〔J〕.长江大学学报(自科版)医学下旬刊,2013;10(12):49-50.

8李兰芳,任秀宝,王华庆,等.靶向调节性T细胞治疗的研究进展〔J〕.临床荟萃,2013;28(11):1299-301.

9张关亭.消化道肿瘤患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞检测的临床意义〔J〕.现代预防医学,2011;38(2):330-1,337.

10Sun J,Han ZB,Liao W,etal.Intrapulmonary delivery of human umbilical cord mesenchymal stem cells attenuates acute lung injury by expanding CD4+CD25++ Forkhead Boxp3 (FOXP3) ～+ regulatory T cells and balancing anti- and pro-inflammatory factors〔J〕.Cell Physiol Biochem,2011;27(5):587-96.

11Li M,Wang X,Fu W,etal.CD4CD25 ～+Foxp3 ～+Regulatory T cells protect endothelial function impaired by oxidized low density lipoprotein via the KLF-2 transcription factor〔J〕.Cell Physiol Biochem,2011;28(4):639-48.