妊娠期肝内胆汁淤积症患者中miR-185的表达及临床意义

王淑芬

（南华大学附属第一医院妇产科,湖南 衡阳 421002）

妊娠期肝内胆汁淤积症患者中miR-185的表达及临床意义

王淑芬

（南华大学附属第一医院妇产科,湖南 衡阳 421002）

目的研究miR-185在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用。方法提取42例妊娠期肝内胆汁淤积症患者及42例同期正常妊娠妇女外周血RNA，qRT-PCR检测表达。结果miR-185在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中明显高于正常妊娠妇女。血清miR-185水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者的年龄、孕周、经产与否无关，但是与围生儿预后相关。结论血清miR-185在妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断和围生儿预后预测中发挥重要作用。

妊娠期肝内胆汁淤积症；miR-185；临床意义

妊娠期肝内胆汁淤积症是发生在晚期妊娠的肝脏疾病,产后可治愈。发病最初伴有瘙痒,有时出现黄疸,血胆汁酸、胆红素、丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶升高。妊娠期肝内胆汁淤积症有家族遗传性,可能与种族、地理位置相关以及体内雌激素和孕激素也发挥重要作用[1-2]。自从lin-4 and let-7这两个miRNA被人们发现,随后又有很多miRNA被成功地鉴定出来。在人类疾病中,miRNA表达谱表现出独特的疾病特性并能分类不同疾病类型。miRNA的独特分类特性与很多疾病的结局也有明显联系,包括对治疗的反应、复发以及总体生存率的预测。研究发现,miR-185在肺癌、胶质瘤以及结肠癌等多种肿瘤和疾病中表达下调,且抑制多种肿瘤细胞的生长增殖与侵袭[3-5]。本研究旨在探讨miR-185在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达及在妊娠期肝内胆汁淤积症中的临床作用。

1 材料与方法

1.1 临床资料

以2010年5月至2012年12月在我院诊断为妊娠期肝内胆汁淤积症的孕妇42例为研究组,年龄21～41岁。配对同期住院42例正常产妇作为对照,年龄20～42岁。

1.2 妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断依据[2,3]

①中晚期妊娠有全身瘙痒,伴或不伴有黄疸,排除其他皮肤疾病或药敏性皮炎；②血清胆汁酸≥16 μmol/L,或者血清丙氨酸和天冬氨酸氨基转移酶＞31 U/L；③分娩后症状及体征消失；④排除其他肝脏疾病。

1.3 外周血RNA提取及miRNA检测

利用RNA抽提试剂盒提取5ml外周血的RNA存于-80 ℃。逆转录RNA 1μg。16 ℃30 min,42 ℃ 30 min,85 ℃ 10 min,4 ℃ 10 min,-20 ℃保存。qRT-PCR检测,置于qRT-PCR仪内,95.0 ℃,3 min；95.0 ℃, 12 s；62.0 ℃,35 s,40个循环；熔解曲线分析从62.0 ℃开始至95.0℃停止。

1.4 统计学分析

用SPSS13.0软件,采用t检验,P＜0.05,差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 miR-185在妊娠期肝内胆汁淤积症患者及正常妊娠妇女外周血的表达

qRT-PCR结果表明,42例妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清中miR-185的表达为对照组的（0.62±0.14）倍,差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 血清miR-185水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者临床参数的关系

血清miR-185在孕周≥35的患者miR-185表达为（0.56±0.14）倍,＜35的患者表达为0.77±0.24倍；年龄≥28岁妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达为对照组的（0.71±0.11）倍,＜28岁患者miR-185的表达为（0.59±0.14）倍；经产妇及未产妇中的表达分别为（0.66±0.13）倍和（0.58±0.14）倍,统计学分析显示血清miR-185与妊娠期肝内胆汁淤积症患者的年龄、孕周、经产与否及胎数无关（P＞0.05）。血清miR-185在围生儿正常的妊娠期肝内胆汁淤积症患者中表达为（0.72±0.15）倍,在有围生儿早产、死胎、死产的妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达为（0.24±0.08）倍,差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨 论

妊娠期肝内胆汁淤积症在不同国家对围生儿的影响不一样。妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制研究已取得了一定进展,但是仍不十分明确。miRNAs包含19-25个核苷酸,它是一类非编码的小分子单链RNAs,具有高度保守性、时间和组织特异性。通过与靶基因mRNA完全或不完全地碱基配对,RNA诱导的沉默复合物可降解靶mRNA或抑制翻译,并且在转录后水平调节靶基因的表达。miRNAs广泛存在于真核生物中,调节细胞增殖、分化和凋亡。特定的miRNAs在不同的肿瘤和不同的阶段高表达或低表达,这意味着与肿瘤的发生发展以及预后具有一定相关性[6]。但无研究表明miRNA与妊娠期肝内胆汁淤积症发病相关。本研究通过检测血清中miR-185的表达分析其在正常妊娠妇女和妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达差异。结果表明,血清miR-185水平在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中明显下调。随后我们分析了miR-185与妊娠期肝内胆汁淤积症患者临床参数的关系。miR-185与妊娠期肝内胆汁淤积症患者的年龄、孕周、经产与否无关,但与妊娠期肝内胆汁淤积症患者围生儿预后相关,围生儿正常的妊娠期肝内胆汁淤积症患者miR-185的水平明显低于围生儿早产、死胎、死产的妊娠期肝内胆汁淤积症患者的表达。因此,血清miR-185的表达可作为妊娠期肝内胆汁淤积症围生儿预后预测的潜在靶点。

[1] Hand NJ,Horner AM,Master ZR,et al.MicroRNA profiling identifies miR-185 as a regulator of disease-associated pathways in experimental biliary atresia[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr,2012,54(2):186-192.

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[3] Tang H,Wang Z,Liu X,et al.LRRC4 inhibits glioma cells growth and invasion by miR-185 mediating pathway[J].Curr Cancer Drug Targets,2012,12(8):103210-42.

[4] Zhang Z,Tang H,Wang Z,et al. MiR-185 Targets the DNA Methyltransferases 1 and Regulates Global DNA Methylation in Human Glioma[J].Mol Cancer,2011,10(1):124.

[5] 唐海林,邓敏,廖前进,等.结肠癌组织中miR-185的表达及其临床意义[J].中南医学科学杂志,2011,39(5):17-18.

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R714.7

B

1671-8194（2014）25-0253-02