乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性血清的病毒核酸载量分析

赵倩瑜 张俊峰 卫红伟

乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性血清的病毒核酸载量分析

赵倩瑜 张俊峰 卫红伟

目的 探讨分析血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (HBV-HBsAg)低水平阳性与病毒核酸载量的关系。方法 HBsAg 弱阳性的患者 3632 例 , 通过酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测血清 (HBsAg)、使用荧光定量聚合酶链反应 (FQ-PCR)检测血清乙型肝炎病毒 DNA(HBV-DNA)。结果 3632 例 HBsAg 弱阳性的患者病毒 DNA 检出率为 80.55%, 病毒核酸载量的平均值为 7.305。结论 乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性对乙型肝炎的诊断不具有代表性 , 只能能说明体内含有乙肝病毒外壳 , 还需要结合血清病毒核酸载量检测来判断患者体内是否具有乙肝病毒 DNA。只有在 HBsAg 阳性且合并病毒核酸载量值异常时 , 才有助于乙型病毒性肝炎的诊断和疗效的评估。

乙型肝炎病毒；表面抗原低水平阳性；病毒核酸载量

乙型病毒性肝炎 (viral hepatitis type B)简称乙肝 , 是由乙肝病毒 (HBV)感染引起的 , 我国是乙肝大国［1］, 乙肝病毒携带者占全世界携带者的 46.43%。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外壳 , 只具有抗原性 , 无传染性［2］。HBsAg 阳性或弱阳性是感染乙肝病毒的标志之一。HBsAg 低水平阳性存在的情况有以下几种［3］：①乙肝潜伏期 ；②无症状的乙肝病毒携带者 ；③慢性乙肝 ；④检验结果误差。由于 ELISA 试验检测的是病毒标志物 , 或多或少会对 HBV 造成漏检 , 而 PCR技术可以补充 ELISA 试验的不足 , 可效提高病毒检出率。现就本院 2013 年期间选取的 3632 例 HBsAg 低水平阳性者病毒核酸载量检测结果进行分析。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取 2013 年 1～12 月期间本院消化内科与传染病科门诊部和住院部共同收治的 HBsAg低水平阳性的患 者 3632 例 , 其 中 男 3168 例 , 女 464 例 ；年 龄 27～58 岁 ,平均年龄 36岁。所有患者经乙肝病毒酶联免疫吸附试验检测符合 HBsAg 低水平阳性。

1. 2 方法 HBsAg 检测采用 ELISA 试验［4］, 试剂盒由广州威佳科技有限公司提供。HBV-DNA 采用 FQ-PCR 检测［5］,试剂盒由宝生物工程有限公司提供。

1. 2. 1 ELISA 检测 标本在室温下离 心 (1000×g 离心 10 min)将血清和红细胞迅速小心地分离。使用不含热原和内毒素的试管 , 按照试剂盒操作步骤说明进行实验。如果标本不立即使用 , 将其分装保存于 -70℃条件下 , 避免反复冷冻 ,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。避免使用溶血或脂血。

1. 2. 2 核酸检测 留取血标本中核酸检测成分 , 将 ELISA检测结果中 HBsAg 低水平阳性标本依次编号进行核酸检测 ,检测过程依据荧光定量聚合酶链反应说明书进行。

2 结果

HBsAg 低水平阳性者 3632 例 , 占 2013 年全年在本院进行 HBsAg 检测的患者的 29.23%, 对 HBsAg 低水平阳性者进行 HBV-DNA 定量检测 , 病毒 DNA 检出率为 80.55%, 病毒核酸载量的平均值为 7.305。说明当检测出乙肝表面抗原低水平阳性时 , 只能说明人体内有乙肝病毒外壳或者是假阳性 ,而外壳里面有没有乙肝病毒 DNA则还要通过乙肝病毒核酸检测来确定。

3 讨论

HBsAg 编码区位于 HBV 编码的 5 个阅读框架的第 3 个 , HBsAg 的衣壳蛋白是由 HBsAg 的编码产物 Pre-S1、Pre-S2以及 HBsAg-PHSA-Re 共同组成［6］。当感染 HBV 后 , 病毒常以完整的病毒颗粒、丝状或管状颗粒、球形颗粒3种形式存在 , 其中病毒颗粒含有病毒蛋白和核酸。由于感染 HBV后存在一段时间的窗口期［7］, 即人体感染乙肝病毒后 , 免疫系统在消灭乙肝病毒的这段时期 , 也称乙肝恢复期末端 , 此时病毒将大量减少或者全部消失 , 但是还没有产生乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)。而 HBsAb 一般要在急性乙肝病毒感染后期或 HBsAg 消失后 , 经过一段时间才出现 , 在此间隔期HBsAg 与 HBsAb 都不能被检出 , 称为“空白期”或“窗口期”。目前虽然有先进的荧光定量 PCR 技术可以及时准确的诊断感染性疾病 , 但窗口期仍然是全世界的难题 , 且对于一些没有条件实现临床 PCR 实验室建立的医院来说 , 很难实现对 HBsAg低水平阳性乙型病毒性肝炎患者的正确诊断。所以 ,本文在此探讨血清标志物 HBsAg 低水平阳性与 HBV-DNA检测之间的相互关系 , 希望能够对乙型肝炎的临床诊断及疗效观察和预后判断起到一定的作用。

HBsAg 的出现常伴随乙肝病毒的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的标志。HBsAg 可存在于 HBV 感染者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后 2～6 个月、谷丙转氨酶升高前 2～8 周时 , 可在血清中测到 HBsAg 阳性 ；当 HBsAg 呈低水平阳性时 , 可结合荧光定量聚合酶链反应来进一步检测体内是否含有 HBV-DNA。

研究结果显示 , HBsAg 低水平阳性且乙肝病毒 DNA＜1000,则体内存在乙肝病毒的表面外壳而不存在乙肝病毒 DNA, 不存在病毒复制和传染性 ；HBsAg 阳性或弱阳性且乙肝病毒DNA＞1000, 则说明体内存在完整的乙肝病毒 , 具传染性且复制。因此 , 当出现 HBsAg 阳性或低水平阳性时 , 也不一定是 HBV 患者 , 还有可能是乙肝潜伏期、无症状携带者、慢性乙肝或者假阳性者 , 这都需要结合 PCR 检查结果做出综合判断。

参考文献

［1］邱黎霞 , 郭满盈 , 杨海燕 . 血清 PreS1, PreS2 抗原在乙肝诊断中的价值 .实验与检验医学 , 2009, 27(2):177-178.

［2］王宇 , 杨延敏 .对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前 S1 抗原的区别和临床意义 .检验医学与临床 , 2010, 7(22): 2446-2447.

［3］夏邦世 , 陈友土 , 沈忠海 .HBsAg 阴性或低值弱阳性的乙型肝炎病毒感染 .中国预防医学杂志 , 2006, 7(1):49-51.

［4］陈慧英 , 肖艳群 , 张健 , 等 . 酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨 .检验医学 , 2010, 25 (6):447-450.

［5］刘庆鸣 , 曾黎峰 , 万本愿 , 等 .乙肝病毒免疫标志物与其 DNA荧光定量聚合酶链反应之间的关系探讨 .实验与检验医学 , 2010(5):270-271.

［6］崔美兰 , 周海洋 , 刘杰 , 等 .抗乙肝病毒化学药物研究进展 .国际药学研究杂志 , 2011, 39(4):280-293.

［7］荆永正 , 孙凤英 , 于学英 .献血员感染 HBV 窗口期的病毒核酸筛查 .实用医药杂志 , 2010, 27(012):1064-1066.

2014-05-15］

471600 宜阳县人民医院检验科