邹平地区猪伪狂犬病PCR检测及流行病学调查

王剑 曲百友 马超 韩耀东 刘通

调查报告

邹平地区猪伪狂犬病PCR检测及流行病学调查

王剑 曲百友 马超 韩耀东 刘通

（山东省邹平县畜牧兽医局 256200）（山东省滨州市畜牧兽医局）

邹平县位于山东省中部偏北，西北临黄河。近年来，畜牧业飞速发展。目前存栏生猪40.76万头。随着存栏数发展，新生猪死亡率，猪呼吸道疾病越发难以控制。选取山东省邹平县地区9家猪场，每家猪场抽取母猪，后备母猪，仔猪各15份血清样品进行伪狂犬PCR诊断检测。检测结果：母猪感染率33%，后备母猪感染率18% ，仔猪感染率24%，总体感染率25%。

伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种传染病。能够引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)、及脑脊髓炎为主要症状的一种传染病。目前世界上有40多个国家都有本病报道，据不完全统计，中国已有20多个省、市流行过本病，中国许多省市猪场呈爆发流行趋势。种猪感染伪狂犬病，主要表现为繁殖障碍，新生仔猪死亡率可达100%。随着规模化猪场饲养密度和规模化程度的提高，猪的呼吸道病日趋严重，成年猪感染伪狂犬病虽然不表现临床症状，但伪狂犬病病毒会引发呼吸道病或造成免疫抑制，因而仍然是规模化猪场最严重的传染病之一[1, 2]。此次调查采用PCR检测方法，对邹平县9家猪场405份血样进行提取扩增。

1 材料和方法

1.1 样品

选择当地9个规模化猪场进行耳静脉采血，共取得405份血清样品。其中母猪、后备母猪、仔猪各135份。

1.2 主要试剂及仪器

离心吸附柱法病毒DNA提取试剂盒购自世纪元亨。即用型PCR混合液PCR MIX 购于北京佳兰生物。上游引物：5’~CAGGAGGACGAGCTGGGGCT~3’，下游引物：5’~GTCCACGCCCCGCTTGAAGCT~3’。引物由生工生物合成。染色剂使用GelRed染色。PCR仪使用晶格科学仪器T960。

1.3 方法

1.3.1 提取模板DNA 按试剂盒说明取血清100ul,加入消化液及蛋白酶K水浴1h。加入300ulDNA结合液10000rpm离心30s。加入500ulDNA洗涤液10000rpm洗涤两次。洗脱离心得模板DNA。

1.3.2 PCR扩增 每份总体积为20ul.PCR MIX10ul,引物2ul，模板2ul,超纯水6ul。按扩増条件为:94℃变性3min，进入循环。94℃60s→65℃60s→72℃60s，40个循环后72℃延伸5min。

1.3.3 电泳 1%的琼脂糖TAE电泳缓冲液中电泳。

2 结果

2.1 样品电泳图

见附图。

2.2 各类猪感染率

目的基因217bp。从左到右依次为DL2000 DNA MARKER，标准阳性样品，样品1~7。其中样品1，3，5，7为阳性样品。(见附表)。检测的9个场内仅有1个场没有出现阳性样品。总体阳性率25%。

附图 PCR检测结果

附表 各类猪感染数量及感染率(头、%)

项目母猪后备母猪仔猪总体 感染数量452432101 感染率33.317.823.724.9

3 结论

猪伪狂犬病是当地猪场主要威胁之一。出现的气喘，死胎等症状很可能与带伪狂犬病毒存在很大关系。母猪阳性率>仔猪阳性率>后备母猪阳性率。带毒母猪作为重要传染源之一，很多仔猪存在垂直传播或者出生后不久被感染。隐性感染带毒猪与健康猪共存，缺乏有效的隔离检疫是造成猪伪狂犬病持续蔓延的原因之一。

[1] 杨睿, 翟少钦, 王孝友等. 重庆地区猪伪狂犬野毒株感染的流行病学调查[J]. 兽医科技, 2013(1): 96-97.

[2] 刘中原, 刘石, 徐卫松等. 利用技术对猪伪狂犬疫苗含毒量的评价[J]. 浙江农业科学, 2013(4): 475-477.

[3] 吕爱军, 谢三星. 猪伪狂犬病的诊断与防治研究进展[J]. 当代畜牧, 2000(5): 26-27.

（2014–02–11）

S8

A

1007-1733(2014)05-0068-01