藏药赛北紫堇总生物碱镇痛药效学研究

李海丽 ，潘国庆 ，酉志亮，姜 伟，南康鹏

1青海民族大学化学与生命科学学院，青海 西宁810007;2 青海省植物化学资源重点实验室，青海 西宁810007

紫堇属(Corydalis DC. )全球约320 种，主要产于亚洲。我国约200 余种，全国均有分布，以西南部种类分布最多，其中青藏高原约120 余种。赛北紫堇［Corydalis impatiens(Pall.)Fisch］为罂粟科紫堇属植物［1，2］。赛北紫堇是藏药应用中很重要的药材，用于治疗各种出血、肝炎、胆囊炎、流感等疾病，也有将其用于治疗跌打损伤或其它外伤、发烧、肠胃炎等［3，4］。

但是迄今为止，赛北紫堇药理活性的研究尚处于空白阶段，本试验对赛北紫堇总生物碱的镇痛药理活性进行了初步的研究，为藏药赛北紫堇的临床用药提供了理论基础。

1 材料、动物与仪器

1.1 药品与试剂

藏药赛北紫堇总生物碱提取物，每克生药约含0.04399 g 生物碱(藏药赛北紫堇于2011 年8 月21日采于青海省贵德县，并经由青海省药检所藏药室骆桂法研究员鉴定，总生物碱提取物是由粗粉经2%盐酸渗漉提取，提取液浓缩至小体积后加碱碱化至pH =12，收集沉淀干燥即得，待用时用生理盐水稀释);阿司匹林泡腾片(阿斯利康制药有限公司，生产批号1101102);生理盐水;冰醋酸为分析纯。

1.2 试验动物

KM 小白鼠，雌雄兼用，体重(20 ±2)g，购于青海省实验动物中心，青医动字第2012004 号，饲养于青海民族大学动物饲养室，环境温度22～26 ℃，相对湿度55%～65%。动物饮用纯净水，饲料购于青海省实验动物中心(普通全价颗粒饲料Ⅱ号)，适应环境一周后进行实验，实验前禁食不禁水12 h。

1.3 试验仪器

RB-200 智能热板仪(成都泰盟科技有限公司);XB-5200B 超声波清洗(宁波新芝生物科技股份有限公司);FA1604 电子天平(上海精密科学仪器有限公司);金马牌JPT-5 架盘天平(上海岑达天平秤有限公司);灌胃器;量筒等。

2 试验方法与结果

2.1 统计学方法

2.2 对热刺激所致小鼠疼痛的影响［5，6］

取健康雌性小鼠，体重18～22 g，实验前对小鼠进行筛选，智能热板仪温度设定在(55.0 ±0.5)℃，预热10 min。将小鼠置于热板仪上，以放置热板仪至出现小鼠舔后足所需时间(s)为该鼠的正常痛阈值，重复2 次，每次间隔30 min，以2 次痛阈值平均值作为该小鼠给药前的正常痛阈值。凡在5 s 内或在30 s 后才出现舔后足及跳跃者均弃之不用。选出合格小鼠50 只，随机分成5 组，每组10 只，空白对照(生理盐水)组，阳性对照(阿司匹林)组，藏药赛北紫堇总生物碱高、中、低组(计量依据前期藏药赛北紫堇总生物碱对小鼠LD50 测定的试验，根据药典以其LD50 8.55 mg/mL 生物碱的0.2 倍、0.15倍、0.1 倍为高中低剂量)。按表1 给药，灌胃给药1次/天，连续灌胃7 d，末次给药后15、30、45、60 min测定痛阈值，若给药后小鼠的痛阈值超过60 s，立即取出，以免烫伤，其痛阈值以60 s 计算。结果见表1。

表1 赛北紫堇总生物碱对小鼠热板法痛阈值的影响(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

表1 赛北紫堇总生物碱对小鼠热板法痛阈值的影响(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

注:与空白对照组比较* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

组别Group剂量Dose(mg/kg)给药前痛阈值The pain threshold before administration(s)给药后不同时间的痛阈值The pain threshold after administration(s)15 min 30 min 45 min 60 min空白对照组Control — 12.20 ±0.65 13.92 ±4.22 12.89 ±3.47 12.44 ±4.56 13.41 ±2.97阿司匹林组Aspirin 40 13.00 ±4.16 21.91 ±19.63＊＊ 18.53 ±10.78＊＊ 0.81 ±5.37＊＊ 15.60 ±5.15紫堇高剂量组Saibei Corydalis-H 34.2 13.25 ±2.57 18.36 ±3.83* 20.53 ±1.45＊＊ 34.11 ±4.00＊＊＊ 16.36 ±3.04*紫堇中剂量组Saibei Corydalis-M 25.65 14.79 ±3.27 16.13 ±4.80 15.92 ±4.28 17.95 ±3.64* 15.64 ±2.62紫堇低剂量组Saibei Corydalis-L 17.1 12.96 ±3.17 13.41 ±6.16 14.47 ±5.42 16.91 ±4.19 14.63 ±4.62

结果显示赛北紫堇总生物碱高、中、低剂量组均能显著提高小鼠对热反应的痛阈值，在给药45min后各组出现最大痛阈值，并且高剂量组与空白对照组比较在各时间段均出现显著性差异，显示藏药赛北紫堇总生物碱对热刺激所致小鼠疼痛具有镇痛作用。

2.3 对醋酸引起的小鼠扭体反应的影响［7，8］

取健康小鼠50 只，体重18～22 g，随机分为5组，每组10 只，空白对照(生理盐水)组，阳性对照(阿司匹林)组，藏药赛北紫堇总生物碱高、中、低组(计量依据前期藏药赛北紫堇总生物碱对小鼠LD50测定的试验，根据药典以其LD50 8.55 mg/mL 生物碱的0.2 倍、0.15 倍、0.1 倍为高中低剂量)。灌胃给药1 次/天，连续灌胃7 d，每组小鼠连续灌胃给药1 周后，再腹腔注0.6%的醋酸溶液0.2 mL，注射醋酸15 min 后，观察记录小鼠的扭体反应次数并计算各组平均值和抑制百分率。结果见表2。

表2 赛北紫堇总生物碱对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

表2 赛北紫堇总生物碱对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

注:与空白对照组比较* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

组别Group剂量Dose(mg/kg)扭体次数Number ofwrithing抑制率Inhibition (%)Control－45.7 ±10.2 0阿司匹林组Aspirin 250 26.8 ±13.4＊＊ 41.4紫堇高剂量组Saibei Corydalis-H 34.2 25.1 ±3.5＊＊ 45.1紫堇中剂量组Saibei Corydalis-M 25.65 27.9 ±9.6＊＊ 38.9紫堇低剂量组Saibei Corydalis-L 17.1 30.2 ±10.1*空白对照组33.9

结果显示阿司匹林组和赛北紫堇总生物碱各组的扭体次数均明显减少，均与空白对照组比较有显著性差异，显示赛北紫堇总生物碱对醋酸引起的小鼠扭体反应产生的疼痛有明显的镇痛作用。

3 讨论

紫堇属植物绝大多数具清热解毒，除湿止痛功效，用于发烧感冒、风湿痹痛，外治疮疡痈肿等症。藏药赛北紫堇中医药用部位为全草，清热解毒，用于肿痛，疥癖疮毒，毒蛇咬伤刀伤等，藏医药用部位为全草，译名桑格丝哇，可活血散瘀利气止痛，治胃炎，胃溃疡跌打损伤，坐骨神经痛，另有藏医用止血记载［1］。

植物化学研究表明，本属植物含多种生物碱，是防治心血管系统、神经系统疾病及抗病毒、抗癌的有效成分［4］，但镇痛药效学仍处于空白阶段，本实验通过采用小鼠热板法和醋酸扭体法观察藏药赛北紫堇总生物碱的镇痛作用。在热板实验中，藏药赛北紫堇生物碱延长了小鼠的痛阈值，说明药赛北紫堇生物碱对由热引起的疼痛有一定缓解作用;扭体实验是化学刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激，是筛选镇痛药最常用的模型之一，藏药赛北紫堇生物碱对冰醋酸引起小鼠的扭体反应具有较好的缓解作用。在实验过程中观察到藏药赛北紫堇高剂量组在30、45 min 时可明显延长小鼠痛阈值，并且藏药赛北紫堇各组均能减少小鼠扭体次数，具有明显的镇痛作用［9-11］。

青海产藏药赛北紫堇植物，海拔在2500～5700 m 间，被藏医视为珍贵药材［12］，并且青海省该植物资源丰富，且易于采收加工，若从药理方面进行严格筛选，有可能制成安全、有效、廉价的新成药用于中医、藏医临床。

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