金黄凝胶剂制备工艺及质量标准研究*

陈 娜，李维超，徐 岩，曹 波，林 宏

(天津市儿童医院天津 300074)

“金黄膏”作为天津市儿童医院院内制剂，处方来源于如意金黄散，由天花粉、姜黄、黄柏、大黄等中药组成，组方严谨，论证合理。本院应用该制剂多年，疗效显著。“金黄膏”是将药物研成粉末与凡士林混匀制备，但药物颗粒较大，有效成分溶出有限，而且原药物未经纯化处理，不适用于体表感染脓性及浆液渗出多者，很大程度上限制了其使用范围。本实验将基质与药液混合制成凝胶剂，其中采用水溶性基质卡波姆934，促透剂2%月桂氮酮，pH 调节剂三乙醇胺，防腐剂0. 2%山梨酸钾。并对该制剂进行了质量标准研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国戴安高效液相色谱仪(P 680 A 泵、ASI-100TM自动进样器、UVD170S 四通道紫外检测器、Chromeleon 色谱工作站);超声波提取器AS3120(奥特塞恩思仪器有限公司);分析天平(Shimadzu Libror AEI 40 SM);电子恒温水浴锅。

1.2 试药 姜黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110823 -200603);大黄酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号0773 -9809);盐酸黄柏碱对照品(四川维克奇生物科技公司，批号20100410);中药饮片均来自本院药剂科，经鉴定符合《中华人民共和国药典》2010 年版各药味项下规定;甲醇、乙腈为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 制备工艺研究

2.1.1 处方 处方来源于2010 年《中国药典》一部如意金黄散［1］，由天花粉、姜黄、黄柏、大黄、白芷、陈皮、厚朴、甘草、天南星、苍术等饮片组成，基质为4%卡波姆934，促透剂为2%月桂氮酮，防腐剂为0.2%山梨酸钾，pH 调节剂三乙醇胺。

2.1.2 药物有效成分提取 用渗漉提取法［2］提取金黄膏经验方中天花粉、片姜黄、黄柏、大黄、白芷、陈皮、厚朴、甘草、天南星、苍术等饮片的有效成分，收集渗漉液，用减压浓缩的方法进行浓缩，真空干燥。

2.1.3 凝胶基质的选择 水性凝胶剂因其具有美观、舒适、生物利用度高等优点，是近年发展较快的剂型。本实验选择水溶性凝胶基质卡波姆基质(934、940、941)、纤维素类基质(甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素)、壳聚糖基质与药液进行胶化实验，以凝胶剂的均匀性为指标进行考查，结果是卡波姆934 效果比较好。

2.1.4 金黄凝胶剂制备工艺 取4%卡波姆934 加2%月桂氮酮、甘油、丙二醇研磨均匀，加适量纯化水静置过夜使之充分溶胀，得凝胶基质Ⅰ;取一定量的提取液加入适量纯化水润湿搅拌，加入适量三乙醇胺调pH为6.0 ～7.0，搅拌均匀，即得Ⅱ;将Ⅱ加入Ⅰ，搅拌均匀，加入0.2%山梨酸钾，加纯化水至全量，即得金黄凝胶。

2.2 质量标准研究

2.2.1 性状 本品为凝胶剂。内容物为光滑、均匀、半透明的棕褐色凝胶。

2.2.2 鉴别

2.2.2.1 大黄的鉴别 取本品5 g，加水30 ml，再加盐酸1 ml，加热回流30 min，趁热滤过，滤液冷却，乙醚萃取2 次，每次20 ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml 使溶解，作为供试品溶液;另取大黄对照药材0.1 g，加甲醇20 ml，浸泡1 h，滤过，取滤液5 ml，蒸干，残渣加水10 ml 使溶解，再加盐酸1 ml，加热回流30 min，趁热滤过，滤液冷却，乙醚萃取2 次，每次20 ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml 使溶解，作为对照药材溶液;再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1 ml 含大黄酸1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录VIB)试验，吸取上述3 种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚(30 ～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶ 1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的5 个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气熏后，斑点变为红色。见图1 和图2。

2.2.2.2 黄柏的鉴别 取本品5 g，加1%醋酸甲醇溶液30 ml，于60 ℃超声处理20 min，离心，分取上清液蒸干，残渣加甲醇2 ml 使溶解，作为供试品溶液;另取黄柏对照药材0.1 g，加1%醋酸甲醇溶液20 ml，于60℃超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2 ml，作为对照药材溶液;再取盐酸黄柏碱对照品，加甲醇制成每1 ml含盐酸黄柏碱0.5 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录VIB)试验，吸取上述3 种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15∶ 5∶ 1)的下层溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图3。

2.2.3 检查

2.2.3.1 pH 值 取本品4 g，加水20 ml，搅拌使溶解成均匀溶液，照《中国药典》pH 值测定法依法测定，应在6.5 ～7 范围内。

2.2.3.2 微生物限度检查 按《中国药典》生物限度检查法检验，细菌总数 ＜100 个/ ml;霉菌总数 ＜100个/ ml;不得检出金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌。

2.2.4 含量测定

2.2.4.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈- 2% 冰醋酸溶液(45∶ 55)，体积流量:1.0 ml/min，检测波长:430 nm， 柱温:35 ℃，进样量10 μl。

图1 大黄紫外薄层色谱图

图2 大黄可见薄层色谱图

图3 黄柏薄层色谱图

2.2.4.2 溶液制备

①对照品溶液制备 精密称取姜黄素对照品适量，加甲醇制成每1 ml 含姜黄素10 μg 的溶液，即得。

②供试品溶液制备 称取本品内容物2 g，精密称定，置具塞离心管中，加甲醇25 ml，超声处理30 min，放冷，离心，分取上清液，精密量取上清液2 ml 于10 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

③阴性对照溶液制备 称取缺姜黄处方药材，按本品制备工艺同法制备阴性对照样品，称取2 g，精密称定，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4.3 系统适用性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，图谱见图4。理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于4000。结果供试品溶液与对照品色谱在相同位置上有相同的峰，且能与相邻的峰大道基线分离，阴性无干扰，确定选择该色谱条件。

2.2.4.4 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液2、5、8、10、15 和20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(C)为横坐标，得回归方程为:Y=8294.9C - 0.5911(r =0.9999)。结果表明姜黄素在0.019 84 ～0.1984 μg 范围内，与峰面积具有良好的线性关系。

2.2.4.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，连续测定6 次，连续进样3 d。结果色谱峰面积的日内、日间精密度RSD 均＜2.0%，表明该方法的精密度良好。

图4 姜黄素对照品(A)供试品溶液(B)阴性对照溶液(C)HPLC 图

2.2. 4. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号1101)，室温放置，分别于0、2、4、6、8、10 和12 h 注入液相色谱仪测定。结果色谱峰面积的RSD 为0.34%，表明供试品溶液室温放置12 h 内稳定。

2.2.4.7 重现性试验 取同一批号(批号1101)供试品内容物适量，精密称定6 份，照供试品溶液同法操作制备样品，注入液相色谱仪，测定峰面积。结果平均含量为0.439 mg/g，RSD 为0.58%，说明该方法的重现性良好。

2.2.4.8 回收率试验 取同一批号(批号1101)已知含量的本品内容物适量约1 g，精密称取9 份，置具塞离心管中，各取3 份分别精密加入姜黄素对照品溶液(0.0714 mg/ml)各5、6 和7.5 ml，照供试品溶液同法操作制备样品，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算姜黄素回收率，结果平均回收率为100. 05%，RSD 为1.24%。结果见表1。

表1 姜黄素回收率测定结果

2.2.4.9 样品测定 取三批样品(批号1101、1102、1103)，按“2.2.4.2”项下供试品溶液制备方法制备，按“2.2.4.1”项下色谱条件进行分析测定。结果三批样品含量合格。见表2。

表2 三批样品中姜黄素的含量(n=3)

2.2.5 皮肤刺激性试验 取2.5 ～3.0 kg 白色成年健康家兔6 只，♀♂各半，试验开始前24 h，紧贴皮肤细心剪去脊柱两侧的被毛，去毛面积各约3 cm ×3 cm，取0.5 ml 样品直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布(2.5 cm ×2.5 cm)和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，另一侧涂布赋形剂做对照，贴敷5 h。贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。在去除药物后0.5、1、24、48 和72 h 观察家兔皮肤反应，对皮肤红斑和水肿进行评分。结果样品未出现红斑、发疹、水肿等现象，家兔无异常表现。

3 讨论

凝胶剂是目前应用比较广泛的剂型之一。在皮肤温度的作用下，凝胶能转变为流动性好的液体，不仅提高生物利用度，而且具有一定的吸附力，能使药物在患处发挥较长时间，不会污染衣物，运输、储存及使用更为方便，患者依从性更高。以卡波姆为基质的凝胶剂具有释药快、易涂展、对皮肤和黏膜无刺激性、附着力强、滞留时间长等优点，且其具有良好的水溶性基质特性，易洗脱，不污染衣物，是制备凝胶剂的理想辅料，在药剂学领域有着广泛的用途［3］。经皮促透剂月桂氮酮与皮肤耦合效果极佳，大大缩短了药物经皮吸收的时间，并且药物释放速度加快、吸收好［4］。三乙醇胺调节pH 值和黏度，卡波姆水溶液为酸性，经三乙醇胺中和后，其pH 范围在6 ～11 时黏度最大，有助于凝胶的涂布，且调节pH 在6 ～7 时适于金黄提取物的稳定，并不对人体皮肤产生刺激作用。本研究确定的含量测定方法灵敏、准确，且专属性较强，可有效控制本品生产、使用过程中产品的质量，对于中药复方新药研究及质量控制具有一定的意义。

1 中国药典［S］.一部. 2010:720

2 宿树兰，王永珍. 不同方法提取姜黄中姜黄素的工艺筛选［J］. 中成药，2002，24(1):67

3 李娜，买尔丹·马合木提.新疆紫草提取物凝胶剂的制备及质量考察［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(1):14

4 张娅茹，王思农. 三黄凝胶剂的研制及质量控制［J］. 西部中医药，2011，24(8):28