去势仔猪同时免疫猪瘟、口蹄疫、蓝耳病疫苗的效果研究

王文礼，杨 利，贾元超，龙 杰，黄 丽，何永钢

（四川省梓潼县畜牧兽医局，四川 梓潼 622150）

1 试验用疫苗和器材

1.1 猪瘟活疫苗（脾淋源）云南生物制药有限公司生产，批号为20120710。

1.2 猪口蹄疫O型合成肽疫苗 （多肽2570+7309）上海申联生物医药有限公司生产，批号为20120604。

1.3 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）齐鲁动物保健品有限公司生产，批号为1206010-2。

1.4 试验用器材 免疫接种用器具，318mc型酶标仪，移液器、TL-2000MM-1微振器，TDL80-2B离心机，Z-93自动双重纯水蒸馏器，SKP-电热恒温培养箱。

2 试验用抗体检测试剂

2.1 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒ELISA抗体检测试剂盒 武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，批号为121213。

2.2 猪O型口蹄疫（FMD）病毒ELISA抗体检测试剂盒武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，批号为121208。

2.3 猪瘟（CSF）病毒ELISA抗体检测试剂盒 武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，批号为121216。

3 试验仔猪分组和检测方法

3.1 试猪选择 在四川梓潼县某养殖场随机选择已断奶的30日龄未免疫过任何疫苗的DLY仔猪30头，由专人饲养和管理，饲喂相同品牌全价饲料，自由饮水。试验前对所选中的猪进行全面健康检查：体重在10～12 kg/头，呼吸为 15～18 次/min，脉搏为 65～78 次/min，体温在38.8～39.3℃，食欲正常，精神状态良好；经耳静脉采血检测，CSF、FMD、PRRS病毒抗体均呈阴性。

3.2 试猪分组 将这30头猪随机分成3个试验组：对照组10头，在猪去势的同时在其左右侧颈部和臀部分别肌注生理盐水2mL；第1组10头，在猪去势的同时于其左右侧颈部分别肌注CSF活疫苗2mL和O型FMD合成肽疫苗2mL；第2组10头，在猪去势的同时于其左右侧颈部和臀部分别肌注CSF活疫苗2mL、O型FMD合成肽疫苗2mL、PRRS活疫苗1头份。

3.3 方法 分别在免疫后30、60、90、120d采集每头猪的耳静脉血5.0 mL，用ELISA抗体检测试剂盒进行CSF、FMD、PRRS抗体测定，具体操作方法依照试剂盒说明书进行。

4 数据统计与分析

使用酶标仪（630nm波长处）测定各样品反应孔中的OD630值，观察各组免疫抗体的动态变化，所得OD630值数据用SPSS10.0软件的One-Way ANVOA方法进行统计学分析。

5 试验结果

5.1 临床免疫副反应 接种疫苗后4 h内观察临床反应，发现第2组有1头猪出现呕吐、轻微肌肉震颤、呼吸急促的现象。呕吐物约50g，把这头有轻微反应的仔猪放进保温箱中（试验当时是冻雨雪天），约1h后副反应症状消失。其他猪无可见的副反应症状。

5.2 第2组和对照组血清PRRS病毒抗体的动态变化根据猪PRRS抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，在酶标仪上读各孔OD630值，试验成立的条件是：阳性对照孔OD630值均应≥0.7，阴性对照孔OD630值均应＜0.3。计算阳性对照孔的平均值和样品KQ值，公式为KQ=100×样品OD630值/阳性对照孔OD630平均值。若KQ值≥20，判为PRRS病毒抗体阳性；若KQ＜20，则判为抗体阴性。本试验阳性对照孔的OD630平均值为1.895，阴性对照孔的OD630平均值为0.061，证明本次抗体检测试验成立。据此计算出本试验PRRS样品的OD630值≥0.379，判为PRRS抗体阳性。详细数据见表 1。

表1 免疫血清PRRS抗体ELISA检测OD630均值（s）

表1 免疫血清PRRS抗体ELISA检测OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 组 1.441±0.136 1.347±0.226 1.367±0.243 1.317±0.237对照组 0.147±0.024 0.185±0.043 0.135±0.037 0.165±0.025

5.3 1、2组和对照组FMD抗体的动态变化 根据猪O型FMD抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，在酶标仪上读各孔OD630值，试验成立的条件是：阳性对照孔OD630值均应≥0.8，阴性对照孔 OD630值均应＜0.3；样品OD630值≥0.4时判为阳性，样品OD630值＜0.4时判为阴性。本次抗体检测试验阳性对照孔的平均OD630值为1.48，阴性对照孔的平均OD630值为0.084，因此，该抗体检测试验成立。数据见表2。

表2 免疫血清FMD抗体ELISA检测OD630均值（s）

表2 免疫血清FMD抗体ELISA检测OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 组 1.187±0.036 1.360±0.042 1.397±0.047 1.415±0.035 1 组 0.888±0.041 1.269±0.039 1.438±0.033 1.456±0.043对照组 0.294±0.032 0.256±0.021 0.211±0.045 0.157±0.036

5.4 1组和2组血清猪瘟病毒抗体的动态变化 根据猪CSF抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，在酶标仪上读各孔OD630值，试验成立的条件是阳性对照孔OD630值均应≥0.6，阴性对照孔 OD630值均应＜0.3；样品OD630值≥0.35时判为阳性，样品OD630值＜0.35时判为阴性。本次检测阳性对照孔的平均OD630值为1.649，阴性对照孔的平均OD630值为0.057，所以本次抗体检测试验成立。详细数据见表3。

表3 免疫血清CSF抗体ELISA检测OD630均值（s）

表3 免疫血清CSF抗体ELISA检测OD630均值（s）

30 d 60 d 90 d 120 d 2 组 0.403±0.051 0.372±0.042 0.263±0.028 0.157±0.027 1 组 0.397±0.043 0.369±0.034 0.258±0.023 0.154±0.028对照组 0.189±0.023 0.161±0.034 0.146±0.031 0.105±0.025

6 抗体阳性率变化情况

采用ELISA方法，按试剂盒说明书计算抗体阳性率。判定标准为：CSF样品OD630值≥0.35，表示猪瘟抗体阳性；FMD样品OD630值≥0.4，表示FMD抗体阳性；PRRS样品OD630值≥0.38，表示PRRS抗体阳性。由此得出各期各组各种抗体的阳性率：在试验进行到30 d时，2组的FMD抗体阳性率为90%，1组的FMD抗体阳性率为80%，直到120 d时，两组FMD抗体阳性率都达到了100%；在试验的30～120 d阶段，2组和1组的PRRS抗体阳性率都是100%；在试验30 d时，2组和1组的CSF抗体阳性率为70%，在60 d的阳性率为60%，在90～120 d，两组的CSF抗体均显阴性。

7 分析与结论

7.1 从表1、表2、表3可以看出，在整个试验期间（120 d），对照组（10头猪）血清中的 CSF、FMD、PRRS抗体都呈阴性；1组和2组中FMD和PRRS的抗体OD630均值与对照组中相应的抗体OD630均值比较，差异显著（P＜0.05）；在 30～60 d期间，CSF 抗体 OD630均值与对照组中相应的抗体OD630均值比较，差异显著（P＜0.05）。说明本次试验期间，各试验组猪均不存在自然感染CSF、FMD、PRRS的情况，所测得的阳性抗体均源于疫苗免疫后产生。

7.2 从表1还可以看出，第2组3针同时免疫后的30d内，一直都有较高滴度的PRRS阳性抗体（OD630值＞0.38），这种高滴度抗体至少可以维持到120d。证明同时肌注3针疫苗的免疫方法在整个育肥期间对PRRS都有较好的免疫保护作用。

7.3 从表2可以看出，第2组3针免疫后在第30d都有较高滴度的FMD抗体，血清样品OD630值在0.842～1.553之间，其均值为1.187，并且还略高于同期试验组的FMD抗体OD630均值（0.888）。1、2两组的FMD抗体OD630均值都在0.4以上，说明PRRS对FMD抗体的产生具有促进作用，这与孟丽军等的试验结果较一致。这种高滴度的抗体至少可以维持到120d，证明3针同时肌注的免疫方式在整个育肥期间对猪FMD也都有很好的免疫保护作用。

第1组在免疫后30d，只有2份血清样品的FMD抗体OD630值为0.337、0.377，略低于0.4的阳性判定标准，可能是个体差异所致，其他8份血清样品的OD630值在0.639～1.397之间，都在0.4以上，而该组样品OD630的平均值为 0.888（＞0.4）；直到 60、90、120d，该组 10 份样品的OD630值都大于0.4，说明同时接种CSF、FMD两种疫苗的免疫方法对FMD还是有较好的免疫保护作用。

在试验30d时，第2组的FMD阳性抗体OD630均值为1.187，略高于第1组的FMD抗体OD630均值（0.888）（P＜0.05），差异显著；到试验60d及以后，1、2组中的FMD阳性抗体滴度基本持平（P＞0.05），差异不显著。说明猪PRRS活疫苗在免疫初期对猪FMD抗体的产生有促进作用。

7.4 从表3可以看出，1、2组猪在免疫30～60d后，CSF抗体检测呈阳性（OD630值都＞0.35），但抗体滴度都不太高，血清样品OD630值在0.35～0.44之间，只略高于阳性抗体判定标准（0.35），与试剂盒提供的阳性抗体OD630均值 1.28比较，差异极大（P＜0.05）。

2组和1组的CSF抗体OD630均值差异不显著（P＞0.05）；与对照组比较，在试验进行到90 d时，两免疫组血清中的CSF抗体均呈阴性，差异也不显著（P＞0.05）。证明在仔猪去势时无论是用CSF活疫苗、FMD合成肽疫苗、PRRS活疫苗三种疫苗同时免疫的方法，还是按一贯采用的CSF活疫苗、FMD合成肽苗两种疫苗同时免疫的方法，都必须在初次免疫猪CSF疫苗60d后，再次加强免疫CSF活疫苗，这样才能确保育肥后期对CSF的免疫保护作用。

7.5 从各组各抗体阳性合格率可以看出，试验2组和1组在免疫后30～120 d期间，FMD和PRRS抗体合格率都超过了国家规定的70%标准，但是CSF抗体合格率只在免疫后30d才达到国家规定的70%标准，到60d，CSF抗体合格率只有60%，到90～120d时，CSF抗体合格率就已为0了。

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