中山地区健康成人外周血CD4+T淋巴细胞参考区间的建立

高赛珍 欧 慧 鲁婧婧 李兆琦 朱远锋 罗小铭 刘洪波

广东省中山市疾病预防控制中心，广东中山 528403

CD4+T淋巴细胞是免疫反应的中心细胞，并为HIV感染的主要靶细胞。人体感染了HIV后，可导致CD4+T淋巴细胞数量的不断减少，从而继发免疫缺陷。CD4+T淋巴细胞计数可以评价HIV感染者免疫状况、预测判断疾病进程、评价抗病毒治疗效果和估测预后，为HIV感染患者免疫系统损害状况最明确的指标。目前，我国尚未建立Partec PAS流式细胞仪计数CD4+T淋巴细胞的生物参考区间，中山地区亦未建立本地区人群的CD4+T淋巴细胞计数生物参考区间。本研究使用Partec PAS流式细胞仪测定了140例中山地区健康成人外周血的CD4+T淋巴细胞数，以确定本地区健康成人外周血CD4+T淋巴细胞的生物参考区间。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究采用配额抽样的方法，选取140名15～59岁的本地区健康个体，分为5组：15～19岁年龄组，男9名，女8名；20～29岁年龄组，男17名，女18名；30～39岁年龄组，男20名，女20名；40～49岁年龄组，男15名，女15名；50～59岁年龄组，男9名，女9名。纳入对象需经常规体检无异常，实验室检测HBV表面抗原以及HCV、HIV和梅毒抗体均阴性，谷丙转氨酶和血细胞常规计数均正常。

1.2 检测仪器及试剂

德国Partec公司的PAS型流式细胞仪和配套的CD4+T细胞快速计数试剂、校准标准微球、样品管及鞘液，质控品为BECKMAN IMMUNO-TROLTM Cells。

1.3 标本的采集和检测

采集静脉血2～3mL，置于含K3-EDTA抗凝剂真空采血管；用标准微球对仪器进行校准，然后在样品管中加入20μL抗凝全血，再加入 20μL PE 标记的 CD4 分子抗体，混匀并于室温避光放置10～15min使之充分反应，最后加入800μL 免洗缓冲液并轻轻混匀上机；质控品与样品同样处理和测定。处理后的样品检测在6h内完成。

1.4 统计学处理

用 SPSS 13.0软件进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。各组数据皆呈正态分布且具方差齐性，因此各年龄组间的CD4+T淋巴细胞计数结果均值比较采用方差分析，而相同年龄组男性和女性之间的CD4+T细胞均值比较采用两独立样本t检验，以x±1.96s确定参考区间。

2 结果

2.1 离群值的剔除

根据CLSI C28-A3 文件[1]，各组数据按大小顺序排列后，将疑似离群值与其相邻值的差值（D）和数据全距（R）相除，若D/R＞1/3则考虑为离群值。根据该文件规则，男性20～29岁年龄组一数据为离群值而被剔除。

2.2 中山地区健康成人的CD4+T淋巴细胞计数结果

表1 中山地区不同年龄和性别的健康成人CD4+T淋巴细胞计数结果比较（个/μL）

2.3 中山地区健康成人的外周血CD4+ T淋巴细胞数参考区间

由于所分各组的CD4+T淋巴细胞数均值差异均无统计学意义，因此合并本研究获得的全部个体的CD4+T淋巴细胞计数结果。合并数据呈正态分布，故以（±s1.96）确定其95%的分布范围，结果为（804.7±387.3）个/μL。

3 讨论

淋巴细胞亚群能反映机体的免疫状况、判断药物疗效，并且还可以预示疾病进展的快慢，因而在感染性疾病、肿瘤和自身免疫性疾病的研究中越来越受到重视。美国疾病预防控制中心测定成人外周血CD4+T淋巴细胞数的参考范围为（844±247）个/μL，并规定CD4+T淋巴细胞绝对数≤500个/μL作为AIDS诊断依据之一，以此作为HIV感染后需要开始进行抗病毒治疗的实验室指标[2]。然而，外周血中淋巴细胞含量受生活环境、社会经济、种族特点的影响，不同地域及不同种族的正常参考值不尽相同，不同仪器和试剂获得的结果也存在一定的偏差。因此，《全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）》要求各地应建立本地区的包括CD4+T淋巴细胞绝对计数的正常参考范围[3]。

本研究结果显示，中山地区健康成人外周血CD4+T淋巴细胞的参考范围为（804.7±387.3）个/μL。其变异范围与陈铁龙等[4-5]的研究结果类似，但明显大于美国和国内大都数实验室建立的CD4+T淋巴细胞参考范围[6-10]。这可能与使用的仪器、试剂等的不同有关。另外，本研究结果表明，不同性别和年龄的健康成人外周血CD4+T淋巴细胞之间没有差异，这与已有的大部分研究结果相一致[6-9]。

本研究建立的中山地区健康成人外周血的CD4+T淋巴细胞计数参考范围，可以为本地区艾滋病患者的临床分期诊断、抗病毒治疗效果提供参考依据。由于儿童外周血CD4+T细胞的参考范围与成人不同[3]，我们下一步工作将建立本地区不同年龄段儿童的外周血CD4+T细胞计数的参考范围。

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[3] 中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）[J/OL]，2009 [2013-04-25].http//ncaids.chinacdc.cn/n16/n1193/n4073/n299951.files/n326381.pdf.

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