新型稀释液用于猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗的免疫效果研究

张丽燕 郝伟伟 方鹏飞邱文英 徐 静 余 谦 向丕元 张 莉 曾 谊

（四川省华派生物制药有限公司 四川简阳 641400）

猪传染性胃肠炎和流行性腹泻分别是由传染性胃肠炎病毒和流行性腹泻病毒引起的猪的一种高度接触传染性疾病［1-2］，主要表现为发热、呕吐、严重脱水和2周龄以内的仔猪死亡率高等症状。临床治疗时，多种抗生素、止泻药均无明显疗效，给养猪业造成了巨大的经济损失［3］。疫苗佐剂作为一种非特异性免疫增强剂，可增强机体的免疫应答能力或改变免疫应答的类型，是疫苗发挥免疫作用的重要组成部分，选择合适的佐剂，对于提高疫苗免疫效果有重要的意义［4］。为进一步提高猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗的免疫效果，以仔猪为试验动物，利用新型稀释液和PBS分别稀释疫苗，进行疫苗免疫效果的比较试验［5-6］，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗 由四川省华派生物制药有限公司研发中心研制。

1.2 稀释液 13115稀释液：由四川省华派生物制药有限公司研发中心研制；PBS：由四川省华派生物制药有限公司研发中心配制。

1.3 试验动物 14～21日龄健康仔猪20头，PED、TGE抗体检测阴性（中和抗体效价均不高于1:4）。

1.4 抗体的测定 在免疫接种后每隔7 d分别对试验猪进行采血，5 000 r/min离心15 min分离血清，通过抗体中和试验分别检测血清中的PED以及TGE中和抗体效价。

1.5 免疫效果试验 将20头14～21日龄健康仔猪编号，随机分为A、B两组，每组10头。A组猪注射疫苗时用13115稀释液进行稀释，B组猪注射疫苗时用PBS进行稀释。

A、B组猪均采用后海穴注射免疫，剂量均为1头份/头。在免疫接种后每隔7 d分别对试验猪进行采血，5 000 r/min离心15 min分离血清，通过抗体中和试验检测血清中PED、TGE中和抗体效价。

2 结果与分析

2.1 免疫后中和抗体效价 在免疫接种后第7、14、21、28、35、42 d，分别对 A、B 两组试验猪进行采血，5 000 r/min离心15 min分离血清，采用抗体中和试验分别测定血清中TGE以及PED中和抗体效价，结果见表1。

由表1可知，分别用13115稀释液和PBS稀释猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗，通过后海穴免疫仔猪后，采用13115稀释液组TGE和PED中和抗体效价均在21 d达到峰值，且其中和抗体效价是PBS液稀释组的3倍甚至3倍以上。

表1 中和抗体效价测定结果

2.2 13115组和PBS组抗体消长 根据表1中的数据制作抗体消长曲线图（见图1-图2），从图中可以清楚的对比出A、B两组抗体的消长规律。A组用13115稀释液稀释TGE-PED二联活疫苗具有更加明显的优势，抗体产生早，中和效价上升速度快，并且达到的效价峰值更高，峰值维持时间更长。

图1 TGE中和抗体效价曲线图

图2 PED中和抗体效价曲线图

3 讨论

1)为了预防由猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒引起的仔猪腹泻，越来越多的养殖场采用猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗来对种猪及仔猪进行免疫，这与猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗产生的免疫效力密不可分。相比于灭活疫苗，活疫苗具有更加明显的优势：接种后在体内有生长繁殖能力，接近于自然感染，可激发机体对病原的持久免疫力，用量较小且免疫持续时间较长。但是近年来在注射疫苗后的猪场仍有部分仔猪发生腹泻，这与仔猪个体有很大关系，因此，进一步提高该疫苗的免疫效果是当前的重中之重。本试验通过利用新型13115疫苗稀释液来稀释猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗，以PBS稀释疫苗作为对照，得到了较理想的免疫效果。

2)在病毒感染过程中，往往是先通过体液免疫来阻止病毒在机体内传播，若动物机体内已具有高滴度的抗体，对于预防疾病的传播就具有非常重大的意义。本试验用新型佐剂稀释猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗后，与用PBS稀释相比，新型佐剂组展现出了很大的优势：7 d内抗体迅速升高，高抗体持续时间长等，对于猪场TGE和PED疫苗免疫有很好的借鉴参考。

3)试验所使用的佐剂为一种新研制开发的疫苗佐剂，其中含有免疫增强剂、免疫调节剂和免疫缓释成分，采用特殊工艺加工处理后，使佐剂与抗原具有良好的亲和性，保持稳定的特性，刺激机体免疫细胞持续性产生抗体。

4)试验中采取的免疫方式为后海穴注射，非专业人员对该种注射方法在操作过程中可能会有些许误差，容易造成因为主观操作而致使免疫效价不高甚至免疫失败。而对肌肉注射都很熟悉，因此，在后续试验设计中，拟进行后海穴及肌肉注射方式的对比试验。

［1］ 殷震，刘景华.动物病毒学［M］.2版.北京:科学出版社，1997.

［2］ 蔡宝祥.动物传染病诊断学［M］.南京:江苏科学技术出版社，1993.

［3］ Saif L J，Wes1ey R D.Transmissib1e gastroenteritis.In:Swine Disease ［M］.7th ed.Ames:Iowa State University Press，1996:362-386.

［4］ 穆杨，周丽梅，侯宏虎，等.三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较［J］.动物医学进展，2007，28(10):37-39.

［5］ 赵卓，潘延钵，邓玉芹，等.用新型纳米佐剂配置猪伪狂犬病灭活疫苗的免疫效果研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2010(1):144-146.

［6］ 朱刚，黄炯，符子华，等.口蹄疫A型油佐剂和1eo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究［J］.中国兽药杂志，2006，40(8):5-8.