全自动细胞处理系统制备与手工制备解冻红细胞质量指标比较

李 凌

目前，对于RH(D)阴性等稀有血型的血液一般都采取冷冻保存的方式延长血液保存期，以前都采用手工方法进行保存和洗涤，手工方法因操作繁琐，洗涤次数多，需要时间长，常常延误临床患者的使用，而使用全自动细胞处理系统(ACP215)克服了手工开放式洗涤制备方法操作步骤繁琐、制备时间长、工作效率低、人为因素影响多等缺点［1］。笔者近期对2 种方法制备冰冻解冻红细胞进行了初步的比较，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 试验用设备:－80℃低温冰箱(日本三洋)，大容量离心机(Thermo 6000i)，37℃～40℃水浴箱(山东普华)，血细胞计数仪(Sysmex KX-21N)，分光光度仪(722)，无菌接管机(费森尤斯)，全自动细胞处理系统(ACP215)。试验用耗材及制剂:200 ml 使用甘油(规格160 ml，生产厂家:北京博德桑特输采血器材科技开发中心)、600 mlPVC 转移袋(北京博德桑特输采血器材科技开发中心)、9%Nacl(规格80 ml，北京博德桑特输采血器材科技开发中心)，0.9%Nacl(1 000 ml，四川南格尔生物医学股份有限公司)，一次性甘油化耗材LN225(美国血液技术公司)、一次性去甘油化耗材LN235(美国血液技术公司)。

1.2 方法 血样的采集和处理:来源本站血液管理科成品库，使用CPDA-1 作保存液的全血，在2℃～6℃保存。50 袋随机分成A、B 2 组，每组25 例。A 组作为对照组，使用手工方法制备，B 组作为试验组，使用ACP215 全自动细胞处理系统制备。检测红细胞回收率、游离血红蛋白及甘油含量。制备方法如下:

1.2.1 A 组( 对照组) 按手工法制备冰冻解冻红细胞准备:将200 ml 全血在离心机中离心(2 500 g ×12 min)后，按照规程，使用压浆板去上层血浆及白膜层，获得未甘油化的血液制剂。甘油化:将A 组红细胞转移至600 ml 深低温冰冻袋中，用无菌接管机将冰冻袋导管和甘油连接，手工加入160 ml 低温保护剂，加入同时，进行摇晃，加入完毕，在室温静置30 min，将甘油化的红细胞放入纸盒，放入－80℃专用冰箱冰冻保存。洗涤去甘油:把冰冻红细胞从－80℃专用冰箱中取出，迅速放入37℃～40℃的水浴箱中，摇动使血袋与水充分接触，达到快速融化。根据手工洗涤操作规程，使用80 ml 9%Nacl溶液，2 000 ml 0.9%NaCl 溶液，离心6～7 次去上清进行洗涤，洗涤完后，用0.9%NaCl 溶液悬浮红细胞。2 组制备质量标准［2］按照国家质量标准:红细胞回收率≥80%，游离血红蛋白≤1 g/L，甘油含量≤10 g/L。测定方法［3］用细胞计数仪测定去甘油后产品，测得冰冻红细胞准备前后的红细胞数量，并依此计算出红细胞回收率;按照检测规程用Trinder 法测定游离血红蛋白。

1.2.2 B 组( 试验组) 将200 ml 全血在离心机中离心(2500 g×12 min)后，按照规程，使用压浆板去上层血浆及白膜层，获得未甘油化的血液制剂。甘油化使用B 组:将B 组红细胞转移至600 ml 深低温冰冻袋中，用无菌接管机将冰冻袋导管和ACP215 全自动细胞处理系统一次性甘油化耗材LN225 连接。ACP215 开机自检后，选择甘油化程序，将一次性甘油化耗材LN225 安装好后，按开始键。处理机利用自动将160 ml 低温保护剂加入装浓缩红细胞的600 ml 血袋中，加入同时，机器全自动摇床边加边振荡，保证充分混合。机器自动加入完毕后，在室温静置30 min，让甘油充分渗入红细胞中。静置后，将甘油化的红细胞平整地放入专用纸盒，再放入－80℃专用冰箱内冰冻保存。解冻融化:把冰冻红细胞从－80℃专用冰箱中取出，迅速放入37℃～40℃的水浴箱中，摇动使血袋与水充分接触，达到快速融化。洗涤去甘油融化后的红细胞用无菌接管机与一次性去甘油耗材LN235 连接。ACP215 开机自检后，选择去甘油化程序，安装好一次性去甘油化耗材及相应的9%NaCl、0.9%NaCl 溶液后，按开始键，红细胞处理仪按照设定程序进行7 次洗涤。机器洗涤后，选用0.9%NaCl 溶液悬浮红细胞。

2 结果

两种方法准备的冰冻解冻红细胞的质量指标比较，见表1。

表1 两种制备方法检测指标比较(±s)

表1 两种制备方法检测指标比较(±s)

3 讨论

冰冻红细胞是借助冰冻保护剂(甘油)低温保护的红细胞。主要用于稀有血型和自身血长期保存。临床使用时需洗涤去甘油，经过洗涤的解冻去甘油红细胞去除了细胞的代谢产物及抗凝剂，减少了输血中的不良反应，是较为理想的血液制品［4-5］。使用时，将冰冻红细胞复融，加一定量的洗脱液去除红细胞内外的几乎所有甘油，再将红细胞悬浮于一定量的0.9%NaCl 溶液中，便可供患者使用。影响冰冻解冻红细胞的质量指标主要有红细胞回收率、游离血红蛋白浓度和甘油残留量。从表1 可以看出，采用全自动细胞处理系统保存，洗涤制备的冰冻解冻红细胞其“红细胞回收率”、“游离血红蛋白浓度”和“甘油残留量”与手工法相比经统计学分析，差异并无显著性，均能达到国家标准。

使用全自动系统洗涤冰冻解冻红细胞，因具有很强的连续性，使得制备的冰冻解冻红细胞仅需1 h 左右，而使用手工法制备因连续离心6～7 次，需要多人配合手工分离上清液，添加洗涤液，离心等许多不连续的步骤去完成，使得制备时间需5 h 左右，制备出的红细胞必须在6 h 内使用。由此可见，使用全自动系统对临床患者急救用血是十分有利的。

综上所述，ACP215 细胞处理系统洗涤出的红细胞完全能达到国家规定的要求，而且是全自动完成所有步骤，其重复性高，不受操作人员手法影响，红细胞是在全密闭系统中处理，减少了细菌污染的机会，延长了去甘油红细胞的保存时间，进一步提供输血的安全性。

［1］ 金志坚，王拥军.细胞洗涤机去甘油化技术的应用［J］. 中国输血杂志，2006，19，(1):55-56.

［2］ GB18469-2012，全血急成分血质量要求［S］.

［3］ 中华人民共和国卫生部. 血站技术操作规程(2012 版)［S］. 卫医政发［2012］1 号文件.

［4］ Lecak J，Scott K，Young C，et al.Evaluation of red blood cells stored at-80 degrees C in excess of 10 years［J］. Transfusion，2004，44(9):1306-1313.

［5］ Holovati JL，Wong KA，Webster JM，et al.The effects of cryopreservation on red blood cell microvesiculation，phosphatidylserine externalization and CD47 expression［J］. Transfusion，2008，48(8):1658-1668.