金荞麦果实中有效成分的分析

唐 宇，贾洪锋，孙俊秀，钟志惠，邵继荣

金荞麦(Fagopyrum cymosum)是蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum Mil1.)，为多年生野生荞麦种之一。金荞麦富含表儿茶素、芦丁和槲皮素等有效活性成分，具有显著的抗癌、抑制肿瘤细胞侵袭和转移，以及消炎抗菌等重要作用［1－2］，是生产多种重要的抗癌药物和癌预防药物(如复方金荞麦颗粒、金荞麦片、和威麦宁胶囊等)的主要原料植物［3－4］，需求量较大。目前金荞麦的利用主要是其根茎，其研究也多限于根茎，地上部分的研究和利用报道甚少。而由于金荞麦属于多年生类型，大量采挖其地下根茎，势必对其资源造成极大的破坏，极不利于资源的可持续利用。为此，我们对金荞麦的果实有效成分进行研究，以期为合理利用金荞麦野生资源提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

金荞麦(F.cymosum)成熟果实，采自于四川省凉山州普格县五道箐乡。果实脱壳后，将种子(果仁)和壳(果皮)干燥，于研钵研磨成粉状备用。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 试剂

表儿茶素标准品:中国药品生物制品鉴定所，纯度98%;芦丁标准品，中国药品生物制品鉴定所，纯度90.5%;槲皮素标准品:中国食品药品检定研究院，纯度96.5%。甲醇(西陇化工股份有限公司，HPLC级)，乙腈(西陇化工股份有限公司，HPLC级)，磷酸(西陇化工股份有限公司，AR级)。

1.2.2 实验仪器

普析通用L9高效液相色谱仪北京普析通用仪器有限责任公司(配有可变波长紫外检测器和Pgrandsil－STC －C18，150 mm ×4.6 mm ，5 μm 色谱柱);SHIMADZU，AUW220D电子天平 日本岛津公司;KQ－5200E超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 表儿茶素的测定

表儿茶素的测定参照袁建平等［5］的方法。精密称取经研细的金荞麦样品1.000 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入20 mL乙腈，用保鲜膜封口，超声波(250 W)提取10 min，过滤后的残渣按照上述方法再提取1次，合并两次提取液，转入50 mL容量瓶中定容，经0.45μm滤膜过滤后进行分析。色谱分析条件:色谱柱:(150 mm ×4.6 mm ，5 μm);流动相:乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(8∶92);流速:1.0 mL/min;柱温:35.0℃;检测波长:280 nm;进样量:20 μL。

1.3.2 芦丁和槲皮素的测定

芦丁和槲皮素的测定参照张丽静［6］和方玲芬［7］的方法。精密称取经研细的金荞麦样品1.300 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入40 mL甲醇，用保鲜膜封口，超声波(250 W)提取60 min，过滤后定容至50 mL，经0.45μm滤膜过滤后进行分析。色谱分析条件:色谱柱:(150 mm ×4.6 mm ，5μm);流动相:甲醇 －0.4% 磷酸溶液(1∶1);流速:1.0 mL/min;柱温:30.0℃;检测波长:360 nm;进样量:10μL。

1.3.3 表儿茶素标准溶液的配制及标准曲线

精密称取0.020 0 g表儿茶素标样，用乙腈的水溶液(乙腈与水体积比=1∶9)定容至50 mL，作为标准贮备液(表儿茶素400μg/mL)。以标准贮备液为基础，以乙腈的水溶液(乙腈与水体积比=1∶9)为溶剂，配制表儿茶素梯度稀释标准溶液，浓度从5 μg/mL到 160 μg/mL(5，10，20，40，80，120，160 μg/mL)，以峰面积 Y为纵坐标，对照品质量浓度(μg/mL)X为横坐标做图，绘制标准曲线，获得其回归方程为Y=6 071.8X－17 995，表儿茶素在5～160μg/mL的范围内线性关系良好，相关系数为R=0.999 6。色谱分析条件同 1.3.1。

1.3.4 芦丁和槲皮素混合标准溶液的配制及标准曲线

精密称取0.005 3 g芦丁标样，0.005 1 g槲皮素标样，用甲醇定容至50 mL，作为标准贮备液(芦丁106μg/mL，槲皮素102μg/mL)。以标准贮备液为基础，以甲醇为溶剂，配制芦丁和槲皮素混合梯度稀释标准溶液，芦丁浓度从5.3μg/mL到53μg/mL(5.3，10.6，21.2，31.8，42.4，53 μg/mL)，槲皮素浓度从 5.1 μg/mL 到 51 μg/mL(5.1，10.2，20.4，30.6，40.8，51 μg/mL)，以峰面积 Y 为纵坐标，对照品质量浓度(μg/mL)X为横坐标做图，绘制标准曲线。色谱分析条件同1.3.2。

芦丁的回归方程为Y=74 374X－184 393，芦丁在5.3～53μg/mL的范围内线性关系良好，相关系数为 R=0.999 7;槲皮素的回归方程为 Y=128 445X－339 760，槲皮素在5.1～51 μg/mL的范围内线性关系良好，相关系数为R=0.999 2。

2 结果与分析

2.1 金荞麦果实中表儿茶素含量

表儿茶素具有抑制肿瘤细胞的侵袭和转移、抑制肿瘤细胞增殖过程和显著的抗氧化、清除自由基，抗致突变作用，对痢疾、伤寒、金黄色葡萄球菌等细菌也有极强的抑制作用［8］。是金荞麦根茎提取物的主要成分，在地上部分的茎、叶中含量很低，在果实中则未见相关报道［9－12］。金荞麦果实中表儿茶素的HPLC测定结果见图1、图2，分析结果见表1。从结果可看出，在金荞麦果实中含有表儿茶素，但含量很低，且仅仅只在种子部分，果皮中则完全没有。

图1 表儿茶素标准品色谱图

图2 金荞麦果实中表儿茶素色谱图

表1 金荞麦果实中表儿茶素含量分析结果

2.2 金荞麦果实中芦丁和槲皮素的含量

芦丁具有抗氧化性、抑制脂质过氧化反应、维持血管舒张、减少血管脆性、防止心血管疾病发生等功能［13－14］。槲皮素是芦丁的苷元，其作用与芦丁相似。芦丁和槲皮素的HPLC测定结果见图3、图4，分析结果见表2。从图3看，芦丁的保留时间是2.683 min，槲皮素的保留时间是 6.183 min，芦丁和槲皮素在此条件下能够达到完全分离。测定结果表明，金荞麦果实中含有较高的芦丁含量，但种子和果皮中芦丁含量分布不同，种子中芦丁含量大大高于果皮，是果皮含量的2倍多。而槲皮素在果实中含量则很低，种子和果皮中均只有少量槲皮素，是芦丁含量的几分之一至十几分之一(表2)。

图3 芦丁和槲皮素标准品色谱图

图4 金荞麦果实中芦丁和槲皮素色谱图

表2 金荞麦果实中芦丁和槲皮素的分析结果

3 讨论

金荞麦为多年生宿根草本植物，株高0.5～1.5 m，花期7～9月，果期8～10月。其果实为卵状三棱形瘦果［15］。金荞麦果实较大，在荞麦属各个种中，仅次于栽培荞麦种甜荞居第二位，千粒重可达30 g左右，每个单株约结实5～20 g。果实中蛋白质、脂肪、微量元素及维生素的含量均较丰富［16］，有很高的利用价值。

我们先前的研究表明，金荞麦果实中含有较高的总黄酮［17－19］，但总黄酮中有哪些成分尚不清楚。通过本实验表明，金荞麦果实中含有芦丁、槲皮素和表儿茶素等有效成分，但其中主要以芦丁为主，槲皮素、表儿茶素等含量甚微。我国古时即将金荞麦根茎作为中药入药，近年来通过对金荞麦大量的研究，发现其提取物具有抗菌、抗感染、解热抗炎、抗癌细胞侵袭和转移的作用，而其主要成分为表儿茶素，且主要集中在地下根茎部分，地上部分的茎、叶含量则很低［9－12］。本次实验发现金荞麦的果实中也含有少量表儿茶素，值得进一步研究。

在栽培荞麦种中，由于苦荞麦营养和药用价值高，种子中富含芦丁等黄酮成分，由此被广泛开发制成多种保健产品［20］。从本研究结果看，金荞麦果实中也含有较高的芦丁含量，因此，金荞麦果实可开发利用的潜力巨大。虽然金荞麦果实中表儿茶素、槲皮素等含量较低，但由于果实中蛋白质含量高、氨基酸组分全，必需氨基酸含量高，富含有效成分芦丁和维生素、微量元素等，具有很高的经济价值，可将其进行综合利用，例如果皮可用来制保健枕芯，果仁(种子)可用来生产茶、糕点、面食制品等多种保健产品，既能充分利用资源，又能达到可持续利用的目的。

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