维生素D3固体分散体片制备与稳定性研究

曾宇君，刘 娟，，黄 勇

(1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 402460;2.重庆市药效评价工程技术研究中心，重庆 402460)

维生素D是机体必需的一种维生素，属于类固醇类激素，在体内具有多方面活性，是促进机体钙磷吸收的主要元素。维生素D2与维生素D3对哺乳动物的活性基本相同，且对包括家禽在内的鸟类，维生素D3的活性远高于维生素D2，约20～40倍［1］。因此，兽医临床多采用维生素D3进行相关疾病的治疗。但是维生素D3对光照和高温不稳定，常规制剂易降解失效，难以保证其质量稳定性。固体分散技术可将易挥发、易分解的不稳定药物制成固体分散体系，增加药物稳定性，减少用药剂量，提高药物生物利用度，并可根据需要制成片剂、注射剂、散剂以及栓剂等［2］。需要注意的是，固体分散体长时间贮存会出现硬度增加、析出结晶、药物溶出度降低的情况，即老化现象［3］。目前在维生素药物中对维生素C和维生素E采用固体分散技术进行新制剂制备的报道较多，制备维生素D3新制剂的报道较少，本试验对维生素D3固体分散体片进行了工艺与稳定性研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与药品 维生素D3固体分散体片(重庆天龙牧业科技有限公司制备);维生素D3对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号1001－200505);维生素 D3(郑州汇鑫科技股份有限公司，批号20081108);PEG－6000(成都科立隆化工贸易有限公司，批号20081009);乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20080309);甲醇(天津市大茂化学试剂厂，批号20080702);氯仿(天津市博迪化工有限公司，批号20080220);醋酐(重庆川东化工有限公司，批号20080415);浓硫酸(重庆川东化工有限公司化学试剂厂，批号20070831)。

1.1.2 仪器 电子天平(YP1200型，上海精科);高效液相色谱仪(型号waters 2487，天津市沃尔孚科技发展有限公司);电子恒温水浴锅(DXKW，北京中兴伟业仪器有限公司);电热恒温鼓风干燥箱(DHG型，上海精宏试验设备有限公司);超声波振荡器(KQ3200E，宁波科生超声设备公司)。

1.2 方法

1.2.1 维生素D3固体分散体的制备条件 采用正交试验设计法，以分散比例(因素A)、温度(因素B)、光照(因素C)为考察因素，维生素D3含量为检测指标，采用L4(23)正交表［4］，筛选优良的制备工艺，正交试验方案见表1。

按照上述方案，采用熔融法制备维生素D3固体分散体，将维生素D3均匀分散至载体熔融液中，冷冻干燥，研末，过80目筛，置冰箱(4℃)内备用［5］。

表1 维生素D3固体分散体制备方案正交试验设计表

1.2.2 维生素D3固体分散体片与普通片的制备工艺 参照文献［6］，将维生素D3固体分散体以适当比例和空白淀粉粒子、硬脂酸镁、滑石粉混合均匀，制成维生素D3固体分散体片，按0.5 g/片进行压片，维生素D3的含量为1250单位/片。取处方量维生素D3溶解于乙醇中，均匀喷洒在空白淀粉粒子上，以适当比例与硬脂酸镁、滑石粉混合均匀，制成维生素D3普通片，按0.5 g/片进行压片，维生素D3的含量为1250单位/片。

1.2.3 定性鉴别 取维生素D3原料约0.5 mg，加入氯仿5 mL溶解，再依次加入醋酐0.3 mL和浓硫酸0.1 mL，振摇，观察颜色变化［7］。维生素 D3固体分散体片和普通片，可先分别研磨过80目筛后，取适量粉末再进行上述操作。

1.2.4 含量测定方法 参照文献［8］，测定方法如下。

1.2.4.1 对照品溶液的制备 准确称取维生素D3对照品0.05 g置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精确量取上述溶液1 mL稀释到10 mL，作为对照品溶液，置冰箱(4℃)内备用，对照品溶液含维生素D3100 mg/L。

1.2.4.2 色谱条件 色谱柱:Waters 38145－21柱(250 mm×4.6 mm);流动相为甲醇 ∶乙腈=90∶10;流速1.0 mL/min;检测波长265 nm;柱温25℃;进样体积5 μL;检测器为二极管阵列检测器。

1.2.4.3 标准曲线的绘制 用甲醇分别稀释对照品溶液至 50、20、10、2、0.5 mg/L，在上述色谱条件下分别吸取5 μL进样测定，以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性拟合，同时用最小二乘法进行线性回归，得回归方程为 Y=223427X+35460，R2=0.9999。结果表明，维生素D3进样量在2.5～250 ng范围内线性关系良好。绘制标准曲线(图1)。

图1 维生素D3标准曲线图

1.2.4.4 供试品溶液的制备 分别取维生素D3固体分散体片和普通片各若干片，放器皿中研细，搅拌均匀。精密称取样品5 g于10 mL容量瓶中，用流动相定容至8 mL，摇匀，超声溶解20 min，加流动相定容至刻度，再摇匀，将溶液转移到离心管，放置到离心机中4000 r/min离心10 min。将离心后的溶液上层清液，取0.22 μm滤膜过滤，滤液为供试品溶液。精密量取5 μL供试品溶液进行HPLC分析。根据峰面积用标准曲线计算维生素D3的相对百分含量。

1.2.5 维生素D3固体分散体片稳定性研究

1.2.5.1 光稳定性试验 在温度为25℃，将维生素D3固体分散体片用普通白色塑料袋密封包装，置于照度4500 Lx下放置10 d，进行加速试验，在第0、5、10 天各取样 1 次，设普通片为对照组，按1.2.4项下方法测定维生素D3含量。

1.2.5.2 加速试验 在温度(40±2)℃、相对湿度75% ±5%条件下，将维生素D3固体分散体片用普通白色塑料袋密封包装放置6个月，进行加速试验，在第0、1、2、3、4、5、6 个月各取样1 次，设普通片为对照组，按1.2.4项下方法测定维生素D3含量。

2 结果

2.1 正交试验工艺研究结果 正交试验结果可见，以A2B1C2组合为最佳工艺，即维生素D3和分散载体按照1∶20的比例，经60℃水浴，在避光的情况下进行固体分散包被，其含量最高，工艺为最佳，详见表2。

表2 维生素D3固体分散体制备方案正交试验结果

2.2 定性鉴别结果 鉴别结果见表3，维生素D3固体分散体片鉴别显色均符合要求，且第1、4步显色明显，而维生素D3普通片只有第4步显色明显，第1步显色不明显，中间两步无颜色变化。

表3 维生素D3原料、固体分散体片和普通片的理化鉴别结果

2.3 含量测定结果 维生素D3高效液相色谱图见图2。根据维生素D3固体分散体片与普通片的出峰面积，将其分别代入标准曲线，计算得出维生素D3的含量(图3)。维生素D3固体分散体片的平均相对百分含量为97.94%，普通片为95.6%。

图2 维生素D3高效液相色谱图

2.4 维生素D3固体分散体片稳定性研究结果

2.4.1 光稳定性试验结果 在上述光照条件下，随着光照时间的延长，维生素D3固体分散体中维生素D3含量微有下降，但保持在高含量水平;普通片含量下降明显，第5天实验室判断已为不合格，结果见图4。

2.4.2 加速试验结果 维生素D3固体分散体片中维生素D3含量随着放置时间的延长虽有微量降解，但无明显变化;而普通片则发生了较大变化，第2个月实验室判断已为不合格，结果见图5。

3 讨论

3.1 维生素D3性质不稳定，遇光、氧、热等易发生降解而失效，导致体内生物利用度降低。通过正交试验结果可看出，载体、温度、光照是影响维生素D3固体分散体稳定性的三大因素，增加载体比例、降低包被温度、避免光照可有效阻隔维生素D3和空气、光、热的接触，大大减缓药物在生产、贮存过程中被水解和氧化。正交试验结果中A2B1C2组合鉴别显色结果最明显且所测相对百分含量最高，所以维生素D3固体分散体的最佳工艺为:维生素D3和载体PEG－6000按照1∶20的比例，经60℃水浴，在避光的情况下进行固体分散包被。将易氧化分解的维生素D3制备成固体分散体，可以大大提高维生素D3的稳定性和生物利用度，减少毒副反应，防治动物维生素D缺乏症，具有安全、有效、应用方便的优势［9］。

3.2 稳定性研究的目的是考察药物及其制剂在温度、湿度和光线的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存和运输条件提供科学依据，是新药研究必不可少的内容［10］。通过对维生素D3固体分散体片稳定性的考察，发现在本试验条件下，维生素D3固体分散体片较普通片抗光、氧、热的能力更强，可有效保护药物的成分，提高生物利用率。但试验结果也显示，固体分散体片在光照、高温和潮湿环境下，也有部分降解，故维生素D3固体分散体片应干燥、常温、避光贮存。

［1］ 冯志华，刘观忠，张义明.维生素D在动物营养中的应用研究［J］.中国畜牧兽医，2004，31(8):16 －18.

［2］ 洪 涛，欧阳五庆.固体分散体的载体选择及质量评价的新进展［J］.专论与综述，2004，(9):84 －86.

［3］ 陆 彬.药物新剂型与新技术［M］.北京:人民卫生出版社，1998:13.

［4］ 明道绪.生物统计附试验设计第三版［M］.北京:中国农业出版社，2001:356.

［5］ 郭芳茹，张遂平，杨建春，等.癸氧喹酯固体分散体制备方法及效果评价研究［J］.河南畜牧兽医，2012，3(1):31 －32.

［6］ 胡功政.兽医药剂学［M］.北京:中国农业出版社，2008:140.

［7］ 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2010版二部［M］.北京:中国农业出版社，2011:268－269.

［8］ 朱 英，杨艳伟，王 歆.化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱测定［J］.卫生研究，2005，34(5):624 －625.

［9］ 刘 娟，黄 勇.维生素D3固体分散体在兽医临床应用价值讨论［J］.内江科技，2009，(11):29 －30.

［10］邹 阳，黄 华.固体分散法制剂工艺研究进展［J］.中国医药工业杂志，2005，36(10):648 －651.