HPLC测定绿绒蒿中槲皮素的含量研究

2013-11-29孙跃宁王海英

中国民族医药杂志 2013年7期

孙跃宁王海英孙楠

(青海阿如拉藏医药研究开发有限公司，青海西宁 810003)

绿绒蒿，藏名欧贝，为罂粟科植物全缘绿绒蒿Meconopsis integrifolia(Maxim.)Franch.及五脉绿绒蒿Meconopsis quintuplinervia Regel、长叶绿绒蒿 Meconopsis lancifolia(Franch.)Franch.等的干燥花，6～8月花盛期采集，晾干［1、2］。绿绒蒿全世界共用49种，主产于亚洲中南部，以我国最为丰富。绿绒蒿不仅具有很高的观赏价值，有限种类还可以入药治病。其性味凉，甘，涩。清热，用于肝热病，肺热病。如全缘绿绒蒿、尼泊尔绿绒蒿全草可入药，具有清热解毒的功效，其他如被称为“红毛洋参”、“雪参”的绿绒蒿根可入药，可治疗气虚、浮肿、哮喘等症［3、4］。绿绒蒿中含有大量的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、解热和保肝的作用［5］。槲皮素为绿绒蒿中所含的活性成分，槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，用于治疗慢性支气管炎，此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量的等作用，对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用［6、7］。本文采用HPLC测定绿绒蒿中槲皮素的含量，因此为评价绿绒蒿药材的质量及研发提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器:HHS－4型电热恒温水浴锅，生产厂家:国华电器有限公司;LC－20AT高效液相色谱仪，生产厂家:日本岛津。

1.2 试药:绿绒蒿药材由金诃藏药股份有限公司提供，批号:20120701，20120702，20120703;槲皮素对照品，批号:100081－200406(供含量测定用);以上对照品购自中国药品生物制品鉴定所;双蒸馏水(自制);甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇－0.4%磷酸(50:50)为流动相;检测波长为360nm;流速1.0mL/min;理论板数按槲皮素峰计算应不低于5000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含槲皮素20μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1n，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，加入盐酸5mL，置水浴中加热1n，取出，迅速冷却，转移至50mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

图1 (A)槲皮素对照品

图1 (B)绿绒蒿样品的HPLC图谱

2.3 线性关系实验:精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10、12μL注入液相色谱仪测定，按2.1项下的色谱条件测定峰面积，以进样量为横坐标(X)，以峰面积的积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线。得槲皮素回归方程为Y=47472X－1026，r=0.9999;结果表明，在上述色谱条件下，槲皮素在0.0396 ～0.2376μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度实验:精密吸取两种对照品溶液各10μL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，结果槲皮素对照品的RSD为0.26%(n=6)说明仪器性能良好。

2.5 稳定性实验:精密吸取制备的供试品溶液10μL，于0、2、4、6、8、10h 进样，测定峰面积，结果在测定时间内，供试品中槲皮素含量稳定。

2.6 重复性实验:取同一批号样品5份，分别按样品溶液制备法制备，测定其槲皮素峰面积值，其结果样品中槲皮素平均含量为1.41mg·g－1，RSD 为 1.03%(n=5)，表明分析方法重复性良好。

2.7 回收率实验:精密吸取已知含量的样品6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液，按样品制备方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见下表1