气相色谱法测定复方地榆栓中冰片的含量＊

张 雅 王剑波 李穆琼 曹 蔚 王四旺

第四军医大学药学系天然药物学教研室（西安710032）

复方地榆栓是由地榆、白及、铁苋菜、冰片等六味药材组成的复方中药新药，具有清热解毒，利湿消肿，止血止痛的功效。2008年获得国家SFDA临床批件，现已进行三期临床研究，主要用于内痔、外痔、混合痔等引起的便血、肿胀和疼痛。其中冰片，味辛、苦，微寒；功能开窍醒神，清热止痛［1］。本方主要取其“清热止痛”之功，可直达病所，为方中使药。为更有效控制复方地榆栓的内在质量，参考文献［2，3］，本文建立了以气相色谱法测定复方地榆栓中冰片的含量，为控制该制剂的质量提供依据。

1 仪器与试药 1.1 仪 器 Thermo fisher ISQ型气相色谱仪，FID检测器（美国Thermo fisher公司）；Sartorius AG ME235S型电子分析天平（德国Sartorius公司）；SK250LHC型超声波振荡器（上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试药 冰片对照品（批号为110743－200905）购自中国药品生物制品检定所；水杨酸甲酯（批号为110707－201011）购自中国药品生物制品检定所；复方地榆栓样品（第四军医大学药物研究所提供）；其他试剂均为分析纯。

2 色谱条件 采用弹性石英毛细管柱GsBPINOWAX－MS（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）；柱温140℃；进样口温度220℃，检测器温度220℃；分流比为50∶1。

3 方法与结果 3.1 内标溶液的制备 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀即得，浓度为1.90mg／mL的溶液。

3.2 对照品溶液制备 精密称取冰片对照品80.4mg，置10mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。

3.3 供试品溶液的制备 取复方地榆栓样品5粒，切碎，混匀，取1g精密称定，置25mL具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液 （1.90mg／mL）5mL，超 声（53KHz）处理30min，取出摇匀，静置滤过。

3.4 阴性对照溶液的制备 按处方量制备不含冰片的阴性供试品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

3.5 线性关系 精密量取对照品母液（8.04mg／mL）0.2，0.5，1，1.5，2，2.5mL分别各置于5mL容量瓶中，加入内标溶液（5.08mg／mL）2mL，加乙酸乙酯至刻度，摇匀。在上述色谱条件下分别精密吸取1μL，注入气相色谱仪，记录峰面积。以冰片对照品的浓度为横坐标，冰片峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：y＝0.751x－0.0069，相关系数r＝0.9999。结果表明，冰片对照品在0.3216～4.0200mg／mL浓度范围内呈良好的线性关系。结果见表1和图1。

表1 冰片对照品浓度与峰面积值的关系

3.6 专属性试验 取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液，按本文条件分别进样，色谱图见图2，结果表明，本条件下阴性无干扰。

图1 冰片对照品的标准曲线图

图2 对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液色谱图

3.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液1μL，按上述色谱条件操作，连续进样6次，测定冰片峰面积与内标峰面积的比值，其比值的RSD值为0.23%；精密吸取供试品溶液1μL，按上述色谱条件操作，连续进样6次，测定冰片峰面积与内标峰面积的比值，其比值的RSD值为0.26%。结果见表2。

3.8 稳定性实验 将对照品溶液和供试品溶液，每间隔一定时间（0，2，4，6，8，12h）分别进样1次，对照品中冰片的峰面积与水杨酸甲酯的峰面积的比值的RSD为0.72%；供试品中冰片的峰面积与水杨酸甲酯的峰面积的比值的RSD为0.72%。结果表明对照品溶液和供试品溶液在12小时内稳定。结果见表3。

表2 精密度试验结果

表3 稳定性试验结果

3.9 重复性实验 取同一批（批号为111101）样品，按供试品溶液的制备方法，制备6份供试品溶液。按上述色谱条件操作，进样测定结果；冰片平均含量为1.09%，RSD%为0.31%。结果表明本方法重复性好。结果见表4。

3.10 回收率实验 采用加样回收法，取已测知含量的复方地榆栓（含量为1.09%），分别添加冰片对照品，按供试品溶液制备法操作，按上述色谱条件进行测定，以下式计算回收率，结果见表5，表明本方法具有良好的回收率。

表4 重复性试验结果

表5 加样回收率试验结果

3.11 含量测定 取复方地榆栓样品三批（091103，091104，091105），按照供试品溶液处理方法制备供试液，进样测定，结果见表6，表明本方法稳定。

表6 复方地榆栓样品测定结果

3.12 含量测定限度制定 根据上述样品中冰片含量测定结果及复方地榆栓重量（1.5g／粒）进行计算，样品中冰片的含量范围在15.95mg～16.17mg之间，考虑到不同来源的冰片药材含量有一定的变动范围，故将本品的含量测定限度暂定为：每粒含冰片的总量不得少于12mg。

4 讨 论 用气相色谱法对本品进行含量测定，在不同柱温130℃、140℃、150℃，不同分流比10∶1、30∶1、40∶1、50∶1及不同流速0.8mL／min、1mL／min、1.2mL／min、1.5mL／min下测定，所得出的保留时间、分离度、对称性得到一定的改善，当柱温为140℃、分流比为50∶1、流速为1mL／min时，使本品的保留时间确定在12min内，分离度好，对称性好。

本实验分别用乙酸乙酯、石油醚、环己烷为溶剂对复方地榆栓中冰片的含量进行了测定。结果表明用乙酸乙酯为溶剂提取的冰片含量较高，故使用乙酸乙酯为溶剂。

本实验还对溶剂量进行了考察，分别在5mL、10mL、30mL条件下进行了实验。结果表明用5mL提取的冰片含量较高且节省溶剂。

对提取方法（超声和摇晃）、超声时间（10min、20min、30min、45min）进行了选择，根据结果，最终选择了超声30min进行提取。

以上实验结果表明，用气相色谱法对本品中冰片进行含量测定，方法简便、准确、可靠，可用于该制剂的质量控制。

［1］中国药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2010：136.

［2］张秋琼，刘文志，张秋菊，等.GC法测定复方苦参栓中冰片含量.湖北中医学院报，2010，12（5）：36－37.

［3］杨亚丽，吴 芳.气相色谱法测定三七伤药片中冰片的含量［J］.陕西中医，2011，32（8）：1067－1069.