快速冷冻切片技术在门诊活检组织诊断中的应用价值

罗庆丰 高 玟 詹名花 涂 侃 蔡 勇 黄传生

本研究对我院923例患者门诊活检组织进行了快速冷冻切片诊断，现分析报告如下。

1 资料方法

1.1 一般资料

本组923例均为本院2006年3月至2008年10月的门诊患者，男性496例，女性427例;年龄21～78岁，平均55.8岁。其中鼻咽组织382例，胃黏膜组织275例，食管黏膜组织114例，肠黏膜组织112例，宫颈组织40例。仪器与设备:德国生产microfreeze 550型低温恒冷冷冻切片机。

1.2 方法

门诊活检的新鲜黏膜组织15 min内送病理科，用OTC包埋剂包埋，冷冻固化后放入低温恒冷冷冻切片机切片，连续切片4张，厚度为5 μm，AAF液固定，HE染色，树胶封片，在普通光学显微镜下观察并做出诊断。冷冻切片剩余组织常规石蜡切片，最后将冷冻切片与标本常规石蜡切片诊断结果对照［1］。

2 结果

923例门诊活检组织冷冻切片与常规切片诊断符合率分别为95.03%(363/382)、92.10%(105/114)、90.91%(250/275)、91.07%(102/112)、97.50%(39/40)。鼻咽组织漏诊肿瘤例数为13例，其漏诊率为3.40%;胃黏膜组织漏诊肿瘤例数为13例，其漏诊率为4.73%;食管黏膜组织漏诊肿瘤例数为9例，其漏诊率为7.89%;肠黏膜组织漏诊肿瘤例数为10例，其漏诊率为8.93%;宫颈组织漏诊肿瘤例数为1例，其漏诊率为2.5%，见表1。

表1 923例门诊活检组织冷冻切片的冷冻诊断结果

3 讨论

门诊活检组织快速冷冻切片诊断时间短，能迅速提供准确的信息，既满足患者及家属迫切了解疾病情况的心理要求，又能快速为临床决定手术方式提供依据。常规门诊活检标本一般都要在72 h才能做出诊断报告，而快速冷冻切片检查一般在30 min内能做出诊断，这显著缩短患者等待诊断结果的时间，同时诊断准确率达92.14%，能够满足临床初步诊断的要求。

质量良好的冷冻切片和有经验的病理诊断医师是门诊活检组织冷冻切片诊断较高准确率的关键［2］。活检小组织块用OTC包埋剂支撑其底部(起垫高组织的作用)，包埋时注意将黏膜垂直包埋，以更好显示病变，待其凝固后修平，然后将微细组织的待切面朝上放入垫高的OTC包埋剂中，再涂上适量OTC包埋剂，放入冷冻切片机内继续冷冻，使用吸热锤压平组织，使组织均匀快速下降温度。由于各种组织的结构不同，切片最适宜的温度也不同，不能一概而论。对于活检小组织一般温度在-16℃至-18℃之间，冷冻时间相对短一些，肉眼观察周围全发白时及时修整，一般为5 min左右，避免冷冻时间过长，组织变脆，影响切片的完整性，切片时速度可相对慢且要匀速切片，过快会出现跳刀现象，制片出现裂痕。制作冷冻切片的另一个关键就是防止切片皱折，首先调节好防卷板，要求准确地调整至适当的位置，调节固定好后，再不要轻易扭动。另外，要细心地使用毛笔将切片摊平。同时要注意清洁防卷板，防止污染和切片皱折。切片切好后要及时固定，适合冷冻切片的固定液也有多种(乙醇、甲醇、丙酮及混合固定液等)。我们使用AAF混合固定液(冰乙酸∶甲醛∶95%乙醇为8∶12∶80)，甲醛对组织起固定作用，乙醇收缩组织，冰乙酸起核蛋白沉淀作用，同时使组织膨胀，抵抗乙醇的收缩作用，保持组织的结构稳定。这样染色后组织结构清晰，细胞收缩小，染色鲜艳，核浆对比鲜明。

病理诊断医生要充分了解患者基本情况，掌握临床病史资料，联合内镜下的大体情况，例如患者有无溃疡及肿块［3］，同时要充分了解冷冻切片下的组织学形态特征。显微镜下冷冻切片质量与石蜡切片相比，有着细胞结构模糊变形、核变大，容易变形、排列致密，有水肿，胞浆丰富等特征。如果诊断困难，应立即科内会诊，并保持客观、冷静，从严掌握诊断标准，把握病理性核分裂像、肿瘤组织浸润等恶性特征，切忌主观及片面，如有疑问应重新活检或等待石蜡切片，不可过度诊断［4］。本研究各种活检组织中出现一定程度的漏诊，其漏诊率为鼻咽组织3.4%，胃黏膜组织4.7%，食管黏膜组织7.9%，肠黏膜组织8.1%，子宫颈组织为0。因为诊断指标控制严格，本研究无肿瘤误诊比例出现，而且漏诊率比例较低，同时有常规切片诊断的补救措施，能够快捷地解决诊断中的问题。该研究结果与Winther C［5］及 Stewart等［6］结果相一致。

门诊黏膜活检组织快速冷冻切片诊断符合率高，可缩短诊断时间，减少患者就诊等待时间，在我院的临床病理工作中取得了良好效果，值得推广应用。

［1］罗庆丰，谢 梅，高 玟，等.冰冻切片及免疫组织化学技术在胸腹水细胞诊断中的应用〔J〕.实用癌症杂志，2007，22(4):363.

［2］侯巧燕，何 雯，张美艳.不同组织的快速冷冻切片技术探讨〔J〕.广西医学，2008，30(10):1159.

［3］金铁臣，邱建学，曹 军.内镜活检标本冷冻切片在消化道癌快速诊断中的应用〔J〕.安徽医学，2004，25(4):330.

［4］叶 琼，胡宝春，谢小云.冷冻切片在门诊活组织检查中的应用及体会〔J〕.实用医学杂志，2006，22(21):2536.

［5］Winther C，Graem N.accuracy of frozen section diagnosis:a retrospective analysisi of 4785 cases〔J〕.APMIS，2001，119(4):259.

［6］Stewart CJ，Brennan BA，Koay E，et al.value of cytology in the intraoperative asseeement of ovarian tumors:a review of 402 cases and comparison with frozen section diagnosis〔J〕.Cancer Cytopathol，2010，118(3):127.