TopoⅡα在乳腺癌组织中表达及其与蒽环类药物敏感性的关系

肖华伍 欧阳取长

近年来在我国，乳腺癌的发病率直线攀升，已经成为妇女恶性肿瘤死亡的主要原因［1］。目前，化疗在乳腺癌的治疗中仍占有重要的地位，蒽环类药可说是乳腺癌化疗的基石，但目前尚缺乏预测化疗敏感性的精确指标，也难以判断蒽环类药物自身治疗效果和不良反应之间的平衡点。DNA拓扑异构酶Ⅱalpha(DNA topoisomcrasenⅡα，TopoⅡα)是DNA拓扑异构酶Ⅱ的同功酶，为各类抗肿瘤药物的作用靶点。其分子量为170 kD，基因定位于17q21～22，以ATP供能发挥催化活性。TopoⅡα是引导DNA复制的1个多酶复合物的重要组成部分，在基因的复制和转录中发挥关键的作用。有研究表明［2］，TopoⅡα表达最高的时候是在细胞的快速增殖期，故此可以认为细胞的增殖潜能同TopoⅡα的表达量成正比。我们应用SP免疫组织化学技术，检测TopoⅡα在乳腺癌中表达水平，并分析TopoⅡα表达与蒽环类药物化疗疗效的敏感性关系，旨在为乳癌化疗药物的选择提供科学依据，为临床个体化治疗提供指导。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取湖南省肿瘤医院乳腺癌标本68例，均为女性，年龄22～65岁，平均年龄(45.5±6.8)岁。化疗前行乳腺标本的穿刺活检，其中HER2均为阳性，其中绝经前患者46例，绝经后患者22例，PR阳性11例，阴性57例，临床分期Ⅱ期55例，Ⅲ期13例。所有患者采用蒽环类方案化疗4个周期，化疗前后行乳腺及腋下MRI、CT或B超检查。根据世界卫生组织乳腺恶性肿瘤病理分类方法［3］:浸润性导管癌 44例，占64.7%;导管内癌 4例，占 5.9%;髓样癌 6例，占8.8%;腺癌和黏液性腺癌均为7例，各占10.3%。

1.2 免疫组化检测方法

鼠抗人TopoⅡα、ER、PR、HER-2单克隆抗体购自上海麦莎生物科技有限公司，而SP试剂盒均购自北京金菩嘉医疗科技有限公司。全部乳腺癌组织标本都先经过10%的甲醛固定，石腊包埋，切片的厚度为4 μm，组织切片用3%的双氧水溶液处理10 min，然后按顺序加入Ⅰ抗(抗TOPⅡ)、Ⅱ抗(抗TOPⅡ)，然后用DAB显色和苏木精复染后封片进行观察。Ⅰ抗被TBS液替代，作为阴性对照;而阳性对照则采用已知的扁桃体组织。

1.3 判定标准

TopoIIα判断标准:由两位高年资的医生在双盲条件下用显微镜进行观察，阳性表达是指在乳腺癌细胞核内有棕黄色颗粒，若阳性细胞数＜5%为(－)，5%～10%为(±)，11%～50%为(+)，51%～75%为(++)，＞75%为(+++)。其中(+)～(+++)为TopoⅡα阳性患者，(－)及(±)为 TopoⅡα阴性患者。

疗效判断按1981年WHO制定的实体瘤疗效评价标准:完全缓解(CR)，部分缓解(PR)，稳定(SD)，进展(PD)，总有效率(RR)=CR+PR。

1.4 统计学方法

应用SPSS 15.3的统计软件对结果进行统计。计数资料使用卡方检验。

2 结果

2.1 蒽环类药物疗效与TopoⅡα表达的关系

服用蒽环类抗肿瘤药物并且疗效达完全缓解的4例患者中TopoⅡα阳性3例，占75.0%，而32例疗效达部分缓解的患者中TopoⅡα阳性20例，占62.5%;26例疗效达稳定的患者中TopoⅡα阳性表达14例，占53.8%;余7例病情进展的患者中TopoⅡα阳性表达4例，占42.8%。结果表明TopoⅡα表达水平与蒽环类药物的疗效有一定相关性。

2.2 TopoⅡα表达与蒽环类药物疗效的关系

69例乳腺癌中TopoⅡα阳性表达40例，其中蒽环类药物有效23例，有效率为57.5%，而TopoⅡα阴性表达29例中蒽环类药物有效13例，有效率仅为44.8%，两者差异显著，P＜0.05，结果表明 TopoⅡα阳性患者应用蒽环类药物的治疗效果显著高于TopoⅡα阴性患者。

2.3 不同蒽环类方案的疗效与TopoⅡα表达的关系

比较蒽环类联合烷化剂、蒽环类联合烷化剂及5-Fu、蒽环类联合紫杉醇、蒽环类联合烷化剂及紫杉醇、蒽环类联合多西紫杉醇5种不同的蒽环类方案的疗效，结果表明对蒽环类药物有效的乳腺癌患者其联合方案与TopoⅡα表达无显著相关性，见表1。

表1 不同蒽环类方案的疗效与TopoⅡα表达的关系

3 讨论

针对乳腺癌患者预后的评估指标及与疗效相关的生物学标志物是当前研究的热门方向。DNA拓扑异构酶Ⅱalpha(DNA topoisomcrasenⅡα，TopoⅡα)是DNA拓扑异构酶Ⅱ的同功酶，在真核细胞中同基因的复制、转录和修复等密切相关的1种蛋白酶，在不同类型的肿瘤细胞和组织中TopoⅡα的表达与预后具有一定的相关性。

临床上针对TopoⅡα为靶点的抗癌药物应用越来越广泛，特异性强，选择性好，能够选择性地作用于癌细胞，临床疗效显著。该类药物统称为为抑TopoⅡα抑制剂。可将这类药物分成嵌入型和非嵌入型两大类［4］。嵌入型药物通过药物结构分子中所带有的类似于嘧啶碱的多环类结构，并将其植入到DNA与TopoⅡα相互结合的双链中，干扰TopoⅡα发挥正常的作用，抑制肿瘤细胞DNA链与TopoⅡα的再连接，从而导致DNA双链不稳定而发生断裂致使细胞死亡。此类药物以蒽环类药物为代表(例如阿霉素、依托泊甙等)。其表达的减少将会造成响肿瘤对化疗的敏感性下降。有研究表明［5］，肿瘤细胞对于蒽环类抗肿瘤药物的敏感程度同其细胞内TopoⅡα蛋白的表达水平密切相关。非嵌入型就是指［6-7］，该类药物能够直接同TopoⅡα或着DNA双键结合，从而干扰酶发挥正常的功能，以鬼臼乙叉甙、替尼泊甙等为其典型代表。

故此，TopoⅡα在乳腺癌组织中的表达与其预后的相关指标存在一定程度上的联系，乳腺癌组织生长速度越快，浸润程度越深，越广泛，TopoⅡα表达的阳性越多，乳腺癌淋巴转移则越严重，由此表明肿瘤组织中TopoⅡα的表达水平与疾病的进展同样呈正相关［8-11］。此外，TopoⅡα同Her-2作为两个相互独立的预后和治疗相关因子，其免疫组化的阳性表达具有相类似的临床意义［12-14］。对于乳腺癌患者在进行化疗治疗前若对于TopoⅡα的表达水平进行检测，从而有助于医生判断患者的预后并相应地选择合适的化疗方案，从而有针对性地提高疗效。

TopoⅡα在乳腺癌组织中的表达与蒽环类药物辅助化疗中的研究结果表明［15-16］，TopoⅡα阳性组的患者采用蒽环类药物化疗方案中总体生存期显著高于TopoⅡα阴性组患者。此外，还有实验比较TopoⅡα高表达的晚期乳癌患者采用蒽环类药物和紫杉醇类药物的化疗效果，结果表明［17-18］TopoⅡα阳性表达的患者给予单一药物阿霉素进行治疗，其症状缓解率相对较高，表明体内TopoⅡα蛋白高表达的乳腺癌患者依然可以通过蒽环类抗肿瘤药物化疗取得显著的疗效。

在此次研究过程中以接受过蒽环类药物新辅助化疗的患者作为所研究的对象，对TopoⅡα在乳腺癌组织中的表达情况进行检测和分析，研究结果表明TopoⅡα阳性组患者蒽环类药物治疗疗效显著要高于TopoⅡα阴性组的患者，而在比较含蒽环类药物的不同化疗方案疗效时，TopoⅡα的表达水平没有显著的差异。总而言之，TopoⅡα能够评估乳腺癌的生物学行为及其预后，预测蒽环类药物对于化疗的敏感程度，对于相应地选择合适的治疗方案具有至关重要的指导价值。

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