Ang-2、VEGF在进展期胃癌中的表达及与淋巴管生成的相关性分析

施 怡 李勇 陈石伟

到目前为止手术仍是唯一的胃癌治愈手段，但即使获得根治性切除的患者也会有50%～90%的患者术后复发或者死亡，患者5年生存率仅30%［1-2］，而淋巴结转移是影响进展期胃癌患者预后的重要因素。本组研究就促血管生成素(angiopoietin，Ang-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在进展期胃癌中的表达及其与淋巴管生成的相关性进行探讨，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择我院2008年1月至2011年1月收入的进展期胃癌患者共66例，其中男性51例，女性15例，年龄57～73岁，平均年龄(62.1±7.8)岁;低分化腺癌 31例、中分化腺癌19例、高分化腺癌16例。另外选取同批中18例患者的癌旁2～3 cm处胃黏膜组织以及正常的胃组织作为对照，所有患者标本均经病理组织学的诊断所证实。患者术前均未经任何的抗肿瘤治疗，经10%的甲醛固定，并行常规石蜡包埋制作成4 mm厚的切片。

1.2 免疫组织化学染色

采用免疫组化SP法进行染色，Ang-2、VEGF免疫组化试剂盒均购自武汉博士德公司，标本经常规二甲苯后给予梯度酒精脱水、水化并高压修复，滴加3%的过氧化氢溶液以及山羊血清封闭，滴加一抗过夜，PBS冲洗后滴加生物素标记二抗，甩掉PBS液并滴加链霉菌抗生物素一过氧化物酶溶液，加入新鲜配置的DAB溶液并于显微镜下观察3～5 min，苏木精染色30 s，温热PBS冲洗，给予梯度酒精脱水，二甲苯透明，给予中性树胶封片。所有标记过的染色标本均设置阳性及阴性对照。

1.3 免疫组化结果检测

免疫组化结果采用双盲法检测。Ang-2、VEGF阳性判断标准:以细胞膜或者细胞质出现棕黄色的颗粒作为阳性表达，每张切片随机选择5个不同的视野，结果包括阳性细胞比例+染色强度。阳性细胞比例中≤10%计0分，≥11%～25%计1分，≥26%～50%计2分，≥51%～75%计3分，＞75%～100%计4分。染色强度计算中，弱为0分，中为1分，强为2分。结果0～3分为阴性，≥4分为阳性［3］。而淋巴管密度计数采用Wendner等［4］方法，先在低倍镜下观察切片以确定淋巴管密度最高处，再在高倍镜下计算D2-40阳性淋巴管数，采用多功能病理图像分析仪对标本5个视野内的淋巴管个数进行计数，所有5个视野内淋巴管的均数作为该部位的MLVD值。

1.4 统计学处理

数据采用SPSS16.0统计学软件进行处理，资料采用均数±标准差(±s)表示，计量资料采用t检验，计数资料采用q检验，其中P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同胃组织中Ang-2、VEGF表达情况对比

Ang-2、VEGF表达阳性率在胃癌组织中分别为63.6%(42/66)和54.5%(36/66)，显著高于癌旁组织的16.7%(3/18)、12.5%(2/18)，及正常组织中的5.6%(1/18)、5.6%(1/18)，P＜0.05。

2.2 胃癌组织中Ang-2、VEGF阳性表达与临床病理参数之间关系

胃癌组织中Ang-2、VEGF阳性表达与TNM分期和有无淋巴结转移明显相关。TNM分期Ⅰ～Ⅱ的Ang-2、VEGF表达阳性率显著低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ的患者，P＜0.05;无淋巴结转移的Ang-2、VEGF表达阳性率显著低于有淋巴结转移的患者，P＜0.05。见表1。

表1 胃癌组织中Ang-2、VEGF表达与临床病理参数的关系(例，%)

2.3 胃癌组织中Ang-2、VEGF的表达与MLVD之间的相关性

Ang-2阳性表达组淋巴管密度平均为(15.32±3.25)个，显著高于阴性组的(12.65 ± 2.51)个，t=4.053，P＜0.05。而 VEGF阳性表达组淋巴管密度平均为(15.06±3.17)个，显著高于阴性组的(12.48±2.49)个，t=3.218，P＜0.05。

3 讨论

淋巴结转移是影响进展期胃癌患者预后的重要因素。淋巴结转移是恶性肿瘤所独有的行为学特征，是影响恶性肿瘤疾病预后的重要因素。有多种因子参与肿瘤淋巴结转移的调控，本组研究探讨血管内皮生长因子和血管生成素的促肿瘤淋巴结转移作用。

血管生成素(angiopoietins，Ang)是一类分泌型的细胞因素，主要是由血管内皮细胞所分泌产生，由于其能促进血管的生成，故被命名为血管生成素［5］。Ang-2基因位于8p23.1，由496个氨基酸组成，与Ang-1有着60%的同源性，并能够与受体酪氨酸激酶(Tie2)相结合［6］。Ang-2能够竞争性地拮抗Ang-1，能够通过竞争性抑制Ang-1与Tie2相互作用而参与血管的重塑和血管内膜的去稳定化，Ang-2正常情况下多分布在子宫、胎盘和卵巢当中，可能与这3种组织的血管重建密切相关［7］。但在病理情况下，Ang-2还能够表达于炎症、创伤以及肿瘤部位，参与血管的重建，其与肿瘤的生长、转移和侵袭密切相关［8］。而遗传学表明Ang-2也是淋巴管发育过程中重要的因子，Ang-2能够使牛肠系膜淋巴管内皮细胞中Tie2受体磷酸化，从而能够达到诱导淋巴管内皮细胞增殖和迁移的目的［9］。本组研究显示，胃癌组织中的Ang-2(63.6%)表达阳性率显著高于癌旁组织及正常组织中的表达，结果对比有统计学意义，P＜0.05。在随后的胃癌组织中Ang-2表达与临床病理参数之间相关性研究中显示，胃癌组织中Ang-2表达与TNM临床病理和有无淋巴结转移明显相关，TNM分期Ⅰ～Ⅱ的Ang-2表达阳性率显著低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ的患者，结果对比有统计学意义，P＜0.05;无淋巴结转移的Ang-2表达阳性率显著低于有淋巴结转移的患者，结果对比有统计学意义，P＜0.05。研究结果表明Ang-2与肿瘤的恶性程度以及淋巴结转移情况密切相关。此外，本组研究还发现，Ang-2阳性表达组淋巴管密度平均为(15.32±3.25)个，显著高于阴性组的(12.65±2.51)个，结果对比有统计学意义，P＜0.05。表明Ang-2在胃癌中能够促进癌周微淋巴管的生成，从而达到促进胃癌淋巴结转移的目的，Ang-2与胃癌淋巴管生存密切相关。

VEGF具有促进血管内皮细胞的迁移、增殖及诱导血管生成的能力，促进微小静脉通透性增加，与肿瘤的浸润性生长以及肿瘤血管生存密切相关［10］。但有研究表明单纯阻断VEGF表达并不能够完全地阻断肿瘤的生长及血管的形成，其原因可能在于肿瘤组织中存在其他的因子与VEGF协同作用，目前有许多实验研究表明胃癌组织中的Ang-2与VEGF表达具有显著的相关性［11］。本组研究显示VEGF在胃癌中呈现高表达，且其表达与胃癌淋巴管的生成密切相关，其通过促进胃癌淋巴管的生成达到促进胃癌淋巴结转移的目的，而Ang-2与VEGF表达是否共同促进胃癌的发生、发展，有待于进一步的研究发现。

综上所述，本组研究认为胃癌中Ang-2、VEGF能够促进癌周微淋巴管的生成，从而促进胃癌淋巴结转移。Ang-2、VEGF有望成为预测淋巴管生成以及淋巴结转移的重要指标。

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