骨桥蛋白在卵巢癌及交界性肿瘤中的表达及临床意义

陶 潜 张晓娟 郑艳莉 鲁晓燕

骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是新近发现的卵巢癌生物学标志物之一，在肿瘤形成过程中刺激细胞粘附、迁移、信号传导和血管形成。本文研究OPN在卵巢交界性肿瘤及卵巢癌中的表达，分析其与肿瘤分化、临床分期的关系，以提高卵巢癌的早期诊断率。

1 材料与方法

1.1 一般资料

48例卵巢癌及35例卵巢交界性肿瘤标本均来自南通市第一人民医院2005年1月－2012年12月的手术标本。所有患者均为女性。卵巢癌患者年龄28～69岁，平均年龄51.4岁;肿瘤多为囊实性;发生于双侧者23例;肿瘤平均直径7.34 cm，浆液性乳头状囊腺癌21例，黏液性乳头状囊腺癌12例，内膜样癌10例，5例为转移性癌。交界性肿瘤患者平均年龄41岁;肿瘤平均直径9.24 cm;交界性浆液性乳头状囊腺瘤24例，交界性黏液性乳头状囊腺瘤9例，交界性内膜样肿瘤2例。所有病例术前均未放疗或化疗，均经HE染色及本院两位主治以上病理医师诊断。同时选取20例卵巢良性浆液性囊腺瘤对比。

1.2 方法

采用免疫组织化学EnVision法。OPN单克隆抗体购自福州迈新公司。所有标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋，行HE及免疫组织化学染色。并用已知阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗和二抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

采用双盲法观察每张切片。OPN染色以细胞胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性着色。具体观察方法:高倍镜下(×200)随机选择5个视野，每个视野计数200个细胞，共1 000个细胞。①按阳性细胞数占细胞总数的比例计分:无阳性细胞计0分，阳性细胞＜25%计1分，阳性细胞＞25%计2分。②按阳性细胞显色强度计分:无显色计0分，细胞质内浅黄色颗粒计1分，棕黄色颗粒计2分，棕褐色颗粒计3分。①+②≥3分记为阳性，否则为阴性。

1.4 统计学分析

采用Stata10.0软件分析，各组间率采用χ2检验，P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN在卵巢组织中的表达

骨桥蛋白在卵巢癌、交界性肿瘤及浆液性囊腺瘤组织中阳性率分别为 72.9%(35/48)、45.7%(16/35)及15.0%(3/20)，组间差异具有统计学意义(P=0.000)。

2.2 OPN表达与卵巢癌病理特征的关系

在浆液性癌、黏液性癌、内膜样癌及转移性癌中表达阳性率分别为 80.9%(17/21)、58.3%(7/12)、70.0%(7/10)及80.0%(4/5)，组间差异无统计学意义(P=0.542)，显示其表达与癌组织学类型无相关性。但在分化较好的癌中OPN表达率明显低于分化差的癌。26例有盆腔淋巴结转移的癌，OPN表达者22例，其表达与无淋巴结转移者差异显著，见表1。此外，本组研究同时观察到伴有腹膜非浸润性种植的交界性肿瘤，OPN的表达明显强于无腹膜浸润者。3例伴有微浸润交界性浆液性乳头状肿瘤浸润区癌细胞明显表达OPN。

表1 OPN在卵巢癌组织中的表达

3 讨论

OPN是1种含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，最早是由Senger［1］于1979年作为1种与恶性转化有关的钙结合磷酸化糖蛋白提取的，通过与其主要受体整合素和CD44的相互作用，在肿瘤细胞的移行、浸润、促进肿瘤血管的形成、抑制凋亡等多个环节中发挥着重要的作用［2］。骨桥蛋白在许多人类肿瘤组织中表达增高，如肝癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌［3-6］。高亚丽等［7］通过免疫组织化学方法检测乳腺癌中OPN的表达，结果显示OPN与乳腺癌的组织学分级，淋巴结转移呈正相关，与5年生存率呈负相关。余洋等［8］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表达，显示OPN随肿瘤病理分级、临床分期的增高而明显增加，并且在初发组和复发组、单发组与多发组的比较中，差异显著。本组研究结果中，卵巢癌OPN阳性率72.9%，而良性肿瘤几乎无表达，提示OPN可能通过同样的作用途径促进卵巢上皮细胞异常增生和恶性转化。

本组实验中，OPN表达与卵巢癌组织学类型无相关性，而与组织学分级密切相关，低分化的卵巢癌OPN表达明显高于高分化癌，表明OPN的表达不仅反映了卵巢癌细胞的增殖活性，还与肿瘤的进展密切相关。OPN在有淋巴结转移的癌组织中OPN表达明显高于无淋巴结转移组，显示阳性表达的卵巢癌细胞具有更强的侵袭、转移能力，与Kim等［9］研究结果相符。伴有腹膜非浸润性种植的交界性肿瘤，OPN的表达明显强于无腹膜浸润者，伴有微浸润交界性浆液性乳头状肿瘤浸润区癌细胞明显表达OPN，更进一步提示OPN在肿瘤细胞的突变及进展中发挥了不可忽略的作用。还有学者用组织化学和原位杂交检测到了卵巢乳头状囊腺癌里已钙化的沙样瘤里存在OPN［10］，因此对于伴沙粒体形成的交界性浆液性肿瘤应密切随访血清OPN水平。

关于OPN与卵巢癌的研究尚处于初始阶段，众多报道结果不一，可能是由于研究方法、实验条件不同和选择对象不一致及统计方法不同导致。OPN与卵巢癌的关系有待于进一步研究。

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［6］陈 军，覃思繁.骨桥蛋白与MMP-9在乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.实用癌症杂志，2008，23(4):339.

［7］高亚丽，邢鲁奇.骨桥蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.河南科技大学学报(医学版)，2008，26(4):251.［8］余 洋，李明明，师宏斌，等.骨桥蛋白和环氧化酶-2在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义〔J〕.宁夏医学杂志，2010，32(5):430.

［9］Kim JH，Skates SJ，Uede T，et al.Osteopontin as a potential diagnostic biomarker for ovarian cancer〔J〕.JAMA，2002，287(13):1671.

［10］Maki M，Hirota S，Kaneko Y，et al.Expression of osteopontin messenger RNA by macrophages in ovarian serous papillary cystadenocarcinoma:a possible association with calcification of pasmmoma bodies〔J〕.Pathol Int，2000，50(7):531.