奶牛酮病对抗氧化系统影响的研究

2013-11-21肖立群谭凌平单明辉

中国畜牧兽医文摘 2013年4期

肖立群谭凌平单明辉

（河北省大厂县大厂镇畜牧兽医水产站，河北廊坊 065300）

目前，我国奶牛酮病发病率显著增高，尤其是隐形酮病，会降低奶产量，给奶牛业发展带来了重大的经济损失。其临床表现为顽固性消化紊乱，呼出气放酮味，产乳量下降，机体脱水和一定的神经症状；临床体征为酮血、酮尿、酮乳、低血糖、血浆游离脂肪酸浓度升高和肝糖含量降低[1]。为了进一步研究奶牛酮病的发生机理，我们首次研究奶牛酮病对抗氧化系统的影响，旨在为临床防治奶牛酮病提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

奶牛酮病阳性血清和对照血清分别采自某牛场。

1.2 实验仪器

1.2.1 722分光光度计，上海第三分析仪器厂制造。

1.2.2 低速台式离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.2.3 微量移液器，中外合资上海求精生化试剂仪器有限公司。

1.2.4 电热恒温水浴锅，江苏常熟医疗器械厂。

1.2.5 漩涡混匀器，上海第一医学仪器厂。

1.3 实验试剂

1.3.1 T-SOD、MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.3.2 无水乙醇（分析纯）分子式：CH3CH2OH，天津市河东区红岩试剂。

1.3.3 无水乙酸（分析纯）分子式：CH3COOOH，天津市化学试剂二厂。

2 实验方法

2.1 实验动物处理

应用酮粉法对某农场的荷斯坦奶牛进行酮病抽样检测。实验动物分为两组，每组10头，分别为对照组和阳性组。粉剂配置及操作方法如下：

2.1.1 配制亚硝基铁氰化钠0.5 g，无水碳酸钠10 g，硫酸铵20 g，将以上药物研磨混匀，不宜太细，贮存于棕色瓶中备用。

2.1.2 操作方法取粉末0.1 g置于载玻片上或反应盘内，加入新鲜的尿液或乳液2滴，观察颜色反应[4]。

2.2 血清T-SOD活性测定

试剂盒比色法。

2.3 血清MDA含量的测定

试剂盒比色法。

2.4 数据处理

用Excel软件处理。

3 实验结果

3.1 酮病阳性牛的诊断｛4｝

判断方法：酮体的含量与实验色泽反应的快，慢，深浅成正比，阴性反应成土褐色。阳性结果以“+”表示，并代表酮体的大约含量，可分为：

3.1.1 有紫色迹象，并逐渐加深，于30 s达定点者为（+，+，+，+），约含酮体4.0 mg/l以上。

3.1.2 于30 s开始显微紫色，60 s后呈现紫色为（+，+，+），约含酮体2.0～4.0 mg/l。

3.1.3 60 s开始淡紫色，2 min后呈较深紫色为（+，+），约含酮体1.5～2.0mg/l。

3.1.4 3min后有轻度紫色为（+），约含酮体1.0～1.5mg/l。

3.1.5 3min后有轻微紫色迹象，5min后仍无明显改变为（+/-），约含酮体0.5mg/l。

3.2 血清T-SOD活力及MDA含量测定结果

表1 各组实验血清中T-SOD活力及MDA含量测定结果

由上表数据表明对照组的T-SOD活力显著大于阳性组（p<0.05），阳性组的MDA活力显著大于对照组（p<0.05）

4 分析与讨论

酮病的发病机理很复杂，普遍接受的学说是糖缺乏理论。机体低血糖是发生酮病的关键。由于各种原因所致碳水化合物供应不足及高泌乳消耗大量的糖，导致机体低血糖及能量负平衡。为此，动用机体的脂肪和体蛋白，补充能量的不足。但是脂肪和蛋白质分解产生大量的游离脂肪酸和生酮氨基酸，经过肝的β-氧化为乙酰coA，乙酰coA可与草酸乙酸缩合成柠檬酸，经三羧循环氧化供能。如果生成草酸乙酸的先质丙酸的碳水化合物不足，使得大量乙酰coA不能进入三羧酸循环，导致酮体蓄积，进而引起一系列的代谢与机能紊乱，如前胃消化紊乱，神经机能障碍及内分泌机能紊乱等｛1｝。

SOD是一类广泛存在于动植物及微生物中含金属酶类。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的测定使我们从抗氧化角度揭示奶牛酮病的发生机理。

本实验结果为对照组的T-SOD活力显著大于阳性组，阳性组的MDA活力显著大于对照组。发生原因可能有以下几个方面：一方面为奶牛发生酮病以后，机体发生营养代谢紊乱或自身采食量减少，引起体内Cu、Zn量吸收不足，导致动物机体中SOD含量减少即T-SOD活力有所下降，消除自由基能力减弱。同时间接引起MDA含量增高。另一方面为酮病的产生直接原因是酮体浓度增高，而酮体的主要成分是酸性物质，其大量蓄积的结果常导致动物酸碱平衡失调，引起酸中毒。溶液中的PH过大（过酸）、过大（过碱）都能使酶蛋白变性而失活。从而也可导致上述实验结果。