正交实验优选益肾解毒抗纤颗粒的制备工艺

沈萍章海周明

南昌市第九医院制剂室，江西 南昌 330002

正交实验优选益肾解毒抗纤颗粒的制备工艺

沈萍章海周明

南昌市第九医院制剂室，江西 南昌 330002

目的:优选益肾解毒抗纤颗粒制备工艺。方法:以浸膏得率和何首乌中二苯乙烯苷的含量为考察指标，通过L9(34)正交试验设计优选水提制备工艺条件，确定益肾解毒抗纤颗粒最佳制备工艺。结果:水提制备工艺影响因素大小依次是:提取时间 (B)＞提取次数 (C)＞加水倍量 (A)，最佳制备工艺条件为处方药材加20倍水，提取2次，每次1h。结论:该制备工艺合理可行，有效成分提取率高。

益肾解毒抗纤颗粒;正交实验;制备工艺

益肾解毒抗纤颗粒是我院院内制剂，由巴戟天、熟地、何首乌、肉苁蓉、虎杖、蛇舌草等九味中药组成，具有解毒、祛湿、保肝、益肾等功效，用于慢性乙型肝炎、早期肝纤维化。方中君药何首乌的重要活性成分二苯乙烯苷具有抗氧化、清除自由基，降低胆固醇、保肝等多重功能［1－2］。为了发挥药物最佳疗效，优化制备工艺，运用L9(34)正交试验，以浸膏得率和何首乌中二苯乙烯苷的含量为考察指标，对其水提部分制备工艺进行优化。

1 仪器与材料

安捷伦Agilent 1100高效液相色谱仪;KQ2200DB型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);Xs204分析天平 (梅特勒－托利多仪器有限公司);处方药材(安徽亳州医药有限公司)均符合《中国药典》2010版一部标准;对照品二苯乙烯苷 (中国药品生物制品检定所，批号110844－201003);益肾解毒抗纤颗粒 (自制，批号121016)，益肾解毒抗纤颗粒阴性样品按益肾解毒抗纤颗粒处方组成比例及其制备工艺步骤除去何首乌依法制备。乙腈为色谱纯，水为注射用水，其余试剂为AR级。

2 方法与结果

因加水倍量 (A)、提取时间 (B)、提取次数 (C)是影响提取效果的主要因素，因此采用这3个因素作为考察指标，以浸膏得率和何首乌中二苯乙烯苷的含量为评价指标，进行正交试验优化。

2.1 药物制备

2.1.1 处方 巴戟天15g，熟地15g，何首乌15g，肉苁蓉15g，鸡内金 6g，枳壳 6g，夏枯草 6g，虎杖 12g，蛇舌草12g。

表1 因素与水平

2.1.2 制备 处方中9味药，先将熟地、肉苁蓉烘干(70℃)45分钟，冷却后粉碎成细粉 (80目)待用，其余6味按L9(34)正交试验表 (见表1)进行煎煮提取，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.12－1.14(80℃)的清膏，取清膏加糊精适量及熟地、肉苁蓉细粉，混匀，制粒，干燥，整粒，即得。

2.2 浸膏得率的测定 精密吸取按L9(34)正交表试验进行提取的合并液50ml，置于105℃已干燥至恒重的蒸发皿中，加热浓缩至近干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30分钟，取出，立即称重，按下列计算浸膏得率，浸膏得率=［W×V/(M×50)］ ×100%(W为浸膏质量，V为样品溶液体积，M为药材质量)。

2.3 供试品中二苯乙烯苷的含量测定

2.3.1 色谱条件［3－5］色谱柱:ODS－C18柱 (4.6mm ×250mm，5μm);流动相:乙腈 －水 (16:84)，流速:1.0ml/min;柱 温:30℃;检 测 波 长:320nm;进 样量:20μl。

2.3.2 标准曲线的制备 精密称取二苯乙烯苷标准品3.475mg，置于25ml容量瓶中，加25%乙醇溶解至刻度，摇匀，制成0.139mg/ml标准溶液。精密吸取1.0ml置10ml容量瓶中，加25%乙醇稀释至刻度，分别精密吸取0.0139mg/ml的 标 准 溶 液 2.5、5.0、7.5、10μl和0.139mg/ml标准溶液2.5μl，注入高效液相色谱仪中，以二苯乙烯苷浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为:Y=782150－2140.83，r=0.9998，线性范围为0.03475～0.3475μg。

2.3.3 供试品的含量测定 取9份通过正交试验后制得的供试品2.0g，研细，精密称取各0.2g，置具塞锥形瓶中，加入25%乙醇20ml，称定重量，放入超声波发生器中提取30min，放置室温，称重，用25%乙醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。另取缺何首乌的阴性供试品，同法制备，分别精密量取供试品、阴性供试品溶液各20μl，按“2.3.1”项条件测定，计算二苯乙烯苷含量。

2.4 结果与分析 从浸膏得率和二苯乙烯苷的含量中可知，对药物有效成分含量的影响程度依次为提取时间 (B)＞提取次数 (C)＞加水倍量 (A)，各因素的最佳水平为A2B1C2，即处方药材加水20倍，水提取2次，每次1h。正交试验结果见表2，方差分析见表3。

2.5 验证工艺 按正交实验优选出的最佳制备工艺条件连续生产3个批次，考察制备工艺的可靠性和稳定性，结果表明该制备工艺生产的益肾解毒抗纤颗粒各种客观指标均符合要求，平均浸膏得率达28.51%，二苯乙烯苷含量6.27mg/g，浸膏得率和二苯乙烯苷含量与正交试验结果一致，表明该制备工艺具有可行性。

表2 正交试验结果L9(34)

表3 方差分析表

3 讨论

由以上试验可知，影响益肾解毒抗纤颗粒水提工艺的最主要因素是提取时间，其次是提取次数，最后是加水倍量，即处方药材加水20倍，水提取2次，每次1h，制备工艺实验也得以证实，优选的最佳制备工艺具有可靠性、稳定性及可行性，可用于该制剂的实际生产。水提浸膏的相对密度应控制在1.12～1.14之间，测定时温度为80℃，密度大小对颗粒的成型、颗粒的水分、溶化性、有效成分含量及鉴别、甚至卫生学检查都有直接或间接的影响，进而会影响到整个制剂质量。

［1］刘新桥，高文远，陈海霞.何首乌中二苯乙烯苷提取物的制备工艺及含量测定［J］.中国中药杂志，2007，32(14):1474－1476.

［2］吴晓青.何首乌化学成分与药理活性的研究进展［J］.时珍国医国药，2009，20(1):146－147.

［3］李红娟，王春华，张伟.高效液相色谱法测定首乌精口服液中二苯乙烯苷的含量［J］.时珍国医国药，2007，18(8):1838－1839.

［4］蒋小莉.精乌 (糖衣)片中何首乌的二苯乙烯苷含量测定［J］.中国中医药咨询，2011，21(3):293－294.

［5］朱兰兰，迟雪洁，孙蓉.益肾乌发口服液中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量测定［J］.中国药物警戒，2011，8(5):281－283.

R284.2

A

1007－8517(2013)23－0012－02

沈萍，女，学士，副主任药师。Tel:0791－88499563，13870822578;E－mail:wnshengping.163.com

2013.10.11)