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正交设计优选五倍子提取工艺研究

2013-11-13郑玲英刘芳菊王跃生曾文雪南昌立健药业有限公司南昌00石家庄四药有限公司石家庄05001中药固体制剂制造技术国家工程研究中心南昌0006江西中医学院

江西中医药 2013年5期
关键词:鞣质五倍子浸膏

★ 郑玲英 刘芳菊 王跃生 曾文雪 (1.南昌立健药业有限公司 南昌00;.石家庄四药有限公司 石家庄05001;.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 南昌0006;4.江西中医学院

南昌330006)

五倍子为漆树科植物盐肤木Rhus chinensis Mill.等叶上的虫瘿,主要由五倍子蚜 Melaphis chinensis(Bell)Baker寄生而形成。五倍子具有敛肺降火,涩肠止泻,敛汗,止血,收湿敛疮等功效[1]。五倍子中含有大量鞣质,鞣质具有收敛作用,是治疗久泻久痢、痈肿疮毒的有效成分之一,易溶于水。故采用传统水煎煮法提取芪仙冲剂中有效成分。

本实验以鞣质水解后的没食子酸为指标,采用L9(34)正交试验,对煎煮次数、煎煮时间、加水倍量等因素进行考察,以转移率、干浸膏得率为提取工艺的评价指标,优化其提取工艺,为其后续研究奠定基础。

1 仪器与试药

AL104/01电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)公司);RE-5210旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);RT-02L粉碎机(台湾荣联铁工厂);Agilent 1100系列高效液相色谱仪;KQ-250超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)。

五倍子为漆树科植物盐肤木Rhus chinensis Mill、青麸杨 Rhus potaninii Maxin.叶上的虫瘿,由五倍子蚜寄生而形成,为肚倍,购自江西江中饮片厂,药材鉴定均符合《中国药典》2005版一部的规定。没食子酸对照品(含测用,批号:110831-200302,中国药品生物制品检定所),甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 没食子酸含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品12.5mg,置于250mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为0.05mg/mL的没食子酸溶液

2.1.2 供试品溶液的制备 取五倍子粉末(过四号筛)约10 g,加入10倍量的水,提取2次,每次2小时,滤过,合并滤液,定容至500mL容量瓶中。精密吸取5mL置塞锥形瓶中,水浴挥干,精密加入4mol/L盐酸溶液50mL,水浴中加热水解3.5小时,放冷,滤过。精密量取续滤液1mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

2.1.3 色谱条件[2]色谱柱:Hypersil ODS 柱(250mm ×4.6mm,5μm);流动相:甲醇:0.05%磷酸水溶液(5:95);检测波长:271nm;流速:1mL/分;柱温:25℃。

2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取2.1.1项下对照品溶液 2.5,5,10,15,20 mL 至 25mL 量瓶中,加水稀释至刻度。分别精密吸取10μL,依次注入液相色谱仪,进行测定,以峰面积对浓度(μg/mL)进行线性回归,得回归方程Y=39.944X+17.758(r=0.999 8)。结果表明,没食子酸在 0.1μg -0.534μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,按上述色谱条件,重复进样5次,测定对照品溶液中没食子酸峰面积值,结果RSD=0.96%。

2.1.6 稳定性试验 取同一份提取液供试品溶液,分别在0,2,4,6,8,10,12 小时进样,测定峰面积,结果表明供试品溶液在12小时内峰面积积分值基本稳定,RSD=0.83%。

2.2 正交试验优选提取工艺

2.2.1 正交设计优化工艺 以浸膏得率以及五倍子中的没食子酸含量为考察指标采用正交试验,考察不同加水量,提取次数,提取时间对提取效果的影响,每个因素确定为3个水平,见表1。

表1 提取工艺因素水平表

2.2.2 提取试验 称取五倍子九份,每份称取处方原药材36.64 g,按表 2.1.2 中的方法,采用 L9(34)正交表安排试验进行提取,提取液浓缩并定容至250mL,以供测定没食子酸含量以及浸膏得率。

2.3 膏得率的测定

用移液管精密移取2.2项下定容到250mL的提取液25mL置于已干燥至恒重的蒸发皿中,先于水浴上挥干,然后按2005年版中国药典一部附录IX H烘干法进行测定,即将盛有样品溶液的蒸发皿置于烘箱中,在105℃下干燥3小时,然后移置于干燥器中冷却30分钟,精密称定重量,再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续2次称重的差异不超过5 mg为止。根据以下公式计算药材干浸膏的得率。

2.4 没食子酸转移率及浸膏得率的测定结果

按2.1.3项下的色谱条件,测定各正交试验提取液中的没食子酸含量,并测定其浸膏得率,计算没食子酸的转移率,进行极差和方差分析,结果见表2-4。

表2 正交实验方案及试验结果分析结果

表3 以没食子酸转移率为为指标的方差分析表

表4 以浸膏得率为指标的方差分析表

结果分析:由方差分析表和正交试验结果可以看出,以没食子酸转移率为指标因素A有显著性差异,以浸膏得率为指标因素A和B有显著性差异,三因素对提取的影响效果程度为A>B>C,故结合直观分析,考虑节约成本,缩短工艺时间,确定组合工艺为A2B2C2,即加10倍量水,煎煮2次,每次煎煮2小时。

2.5 验证试验

称取药材三份,按优选工艺进行验证试验。实验方法同上,测定没食子酸的转移率和浸膏得率,结果见表2。

表2 验证试验结果

验证试验结果表明,按优选的提取工艺提取,所得没食子酸的转移率和浸膏得率稳定,表明工艺可行。

3 讨论

水为中药提取中最常用的溶剂,具有价廉,易得,安全,无毒,无污染等特点。五倍子中的主要有效成分为鞣质及没食子酸,其中五倍子鞣质又叫单宁酸,易溶于水,因此本文采用水煎煮法提取五倍子的有效成分。

五倍子中具有多种有效成分,故本试验对五倍子提取物的浸膏得率进行了研究,以最大化提取其中的有效成分群。

[1]国家药典委员会.中国药典2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社。2010:62.

[2]刘芳菊,王跃生,罗晓健,等.HPLC法测定芪仙汤微丸中没食子酸含量[J].江西中医药,2009,,40(5):63 -64.

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