正交设计优选五倍子提取工艺研究

2013-11-13郑玲英刘芳菊王跃生曾文雪南昌立健药业有限公司南昌00石家庄四药有限公司石家庄05001中药固体制剂制造技术国家工程研究中心南昌0006江西中医学院

江西中医药 2013年5期

★ 郑玲英刘芳菊王跃生曾文雪 (1.南昌立健药业有限公司南昌00;.石家庄四药有限公司石家庄05001;.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心南昌0006;4.江西中医学院

南昌330006)

五倍子为漆树科植物盐肤木Rhus chinensis Mill.等叶上的虫瘿，主要由五倍子蚜 Melaphis chinensis(Bell)Baker寄生而形成。五倍子具有敛肺降火，涩肠止泻，敛汗，止血，收湿敛疮等功效［1］。五倍子中含有大量鞣质，鞣质具有收敛作用，是治疗久泻久痢、痈肿疮毒的有效成分之一，易溶于水。故采用传统水煎煮法提取芪仙冲剂中有效成分。

本实验以鞣质水解后的没食子酸为指标，采用L9(34)正交试验，对煎煮次数、煎煮时间、加水倍量等因素进行考察，以转移率、干浸膏得率为提取工艺的评价指标，优化其提取工艺，为其后续研究奠定基础。

1 仪器与试药

AL104/01电子天平(梅特勒－托利多仪器(上海)公司);RE－5210旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);RT－02L粉碎机(台湾荣联铁工厂);Agilent 1100系列高效液相色谱仪;KQ－250超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)。

五倍子为漆树科植物盐肤木Rhus chinensis Mill、青麸杨 Rhus potaninii Maxin.叶上的虫瘿，由五倍子蚜寄生而形成，为肚倍，购自江西江中饮片厂，药材鉴定均符合《中国药典》2005版一部的规定。没食子酸对照品(含测用，批号:110831－200302，中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 没食子酸含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品12.5mg，置于250mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为0.05mg/mL的没食子酸溶液

2.1.2 供试品溶液的制备取五倍子粉末(过四号筛)约10 g，加入10倍量的水，提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，定容至500mL容量瓶中。精密吸取5mL置塞锥形瓶中，水浴挥干，精密加入4mol/L盐酸溶液50mL，水浴中加热水解3.5小时，放冷，滤过。精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 色谱条件［2］色谱柱:Hypersil ODS 柱(250mm ×4.6mm，5μm);流动相:甲醇:0.05%磷酸水溶液(5:95);检测波长:271nm;流速:1mL/分;柱温:25℃。

2.1.4 标准曲线的制备分别精密吸取2.1.1项下对照品溶液 2.5，5，10，15，20 mL 至 25mL 量瓶中，加水稀释至刻度。分别精密吸取10μL，依次注入液相色谱仪，进行测定，以峰面积对浓度(μg/mL)进行线性回归，得回归方程Y=39.944X+17.758(r=0.999 8)。结果表明，没食子酸在 0.1μg －0.534μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样5次，测定对照品溶液中没食子酸峰面积值，结果RSD=0.96%。

2.1.6 稳定性试验取同一份提取液供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12 小时进样，测定峰面积，结果表明供试品溶液在12小时内峰面积积分值基本稳定，RSD=0.83%。

2.2 正交试验优选提取工艺

2.2.1 正交设计优化工艺以浸膏得率以及五倍子中的没食子酸含量为考察指标采用正交试验，考察不同加水量，提取次数，提取时间对提取效果的影响，每个因素确定为3个水平，见表1。

表1 提取工艺因素水平表

2.2.2 提取试验称取五倍子九份，每份称取处方原药材36.64 g，按表 2.1.2 中的方法，采用 L9(34)正交表安排试验进行提取，提取液浓缩并定容至250mL，以供测定没食子酸含量以及浸膏得率。

2.3 膏得率的测定

用移液管精密移取2.2项下定容到250mL的提取液25mL置于已干燥至恒重的蒸发皿中，先于水浴上挥干，然后按2005年版中国药典一部附录IX H烘干法进行测定，即将盛有样品溶液的蒸发皿置于烘箱中，在105℃下干燥3小时，然后移置于干燥器中冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续2次称重的差异不超过5 mg为止。根据以下公式计算药材干浸膏的得率。