HPLC法测定苯磺酸氨氯地平分散片有关物质
2013-11-13梁芬刘旭海王燕霞李露爽江西中医学院南昌330004江中药业股份有限公司南昌330077
★ 梁芬 刘旭海 王燕霞 李露爽 (.江西中医学院 南昌330004;.江中药业股份有限公司 南昌330077)
苯磺酸氨氯地平(amLodipine besylate)为第三代双氢吡啶类钙拮抗药,具有服药量低、药效维持时间长、不良反应少、保护靶器官等优点,是理想的长效降压药,用于治疗各种高血压和稳定型心绞痛。苯磺酸氨氯地平片、马来酸氨氯地平片、苯磺酸左旋氨氯地平及片剂等,国家药品标准均采用反相高效液相色谱法[1-4]测定含量且均以ODS为色谱柱,流动相均为甲醇与0.03mol/L磷酸二氢钾溶液按相同比例配成。其分散片剂的质量标准中无有关物质检查项,国内市场并无已知杂质对照品,故给用已知杂质来评价有关物质检查带来一定困难。本文考查不通实验条件苯磺酸氨氯地平分散片有关物质方法建立,实验结果表明,利用主成份不加校正因子测定其有关物质,该方法结果准确,专属性强,灵敏度高,可为苯磺酸氨氯地平有关物质检查提供一定依据。
1 仪器及试药
Agilent1200高效液相色谱仪(DAD检测器);色谱柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm,5μm);苯磺酸氨氯地平对照品(中国药品生物制品检定所提供);苯磺酸氨氯地平分散片5 mg/片(南通久和药业有限公司);自动三重蒸馏水器(上海亚荣生化仪器有限公司);KQ-500B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂出品);乙腈、甲醇色谱纯(上海星可生化有限公司);磷酸二氢钾分析纯(天津市永达化学试剂开发中心)。
2 方法及结果
2.1 对照品及供试品溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备 取苯磺酸氨氯地平对照品17mg,精密称定,置100mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL,置25mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取苯磺酸氨氯地平分散片10片,研细,精密称取适量(相当于氨氯地平5mg),置200mL量瓶中,加水20mL使溶解,加流动相约160mL,超声处理30分钟,取出,放冷至室温,加流动相至刻度,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
2.2 色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18(250mm ×4.6mm,5μm);以0.03mol/mL磷酸酸二氢钾溶液-乙腈-甲醇(25∶45∶30)为流动相,检测波长237 nm,流速1.0 mL/分,柱温 30℃;进样量 20μl。
2.3 方法专属性
取苯磺酸氨氯地平对照品溶液(34.1 μg/mL)100 mL分别置25 mL量瓶中,进行如下处理:(1)酸破坏试验:加入5mL 1mol/L盐酸溶液超声10分钟;(2)碱破坏试验:加入1mL 1mol/L氢氧化钠溶液超声10分钟;(3)氧化破坏试验:加入1mL 30%过氧化氢溶液继续超声10分钟;(4)热破坏试验:于60℃烘箱中放置3小时;(5)光破坏:于Lux5000的光照箱中放置12小时,然后用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取滤液按照有关物质测定项下方法测定,记录色谱图,结果表明,苯磺酸氨氯地平与各降解产物均能有效分离。
2.4 精密度试验
取上述对照品溶液及供试品溶液,在同一天分别重复进样8次,测定其峰面积,计算其RSD值分别为 1.3%和 1.5%。
2.5 稳定性试验
分别取对照品溶液及供试品溶液,置室温下,分别于 0,2,4,8,12,24 小时进样,结果主峰面积变化不大,RSD值分别为1.5%和1.8%,表明对照品溶液及供试品溶液在室温条件下放置24小时是稳定的。
2.6 线性范围
取苯磺酸氨氯地平对照品适量,精密称定后加甲醇制成 3.13,6.25,12.5,25.0,50.0,100.0μg/mL浓度的溶液,分别精密量取20μL,注入液相色谱仪,测定峰面积。用峰面积(Y)对浓度(X)作回归直线,得方程:Y=27.599 68X+8.084 55,r=0.999 9,因此,浓度在 3.13-100μg/mL 之间有良好的线性关系。
2.7 检测限
取苯磺酸氨氯地平对照品溶液(34.1μg/mL)用流动相逐步稀释至样品溶液中主峰的响应值约为噪音水平的3倍,记录色谱图,得出检测限为1.8ng。
2.8 有关物质测定
取三批苯磺酸氨氯地平分散片各10片,分别置100mL容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液(34.1μg/mL)1mL,置25mL容量瓶中加流动相稀释至刻度,作为对照溶液。再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μL,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%-25%。记录色谱图至主成分峰保留时间3倍。供试品溶液中除溶剂苯磺酸和氨氯地平峰外如显杂质峰,按不加较正因子的主成分自身对照法以峰面积计算有关物质的量,结果见表2。
表2 三批样品的有关物质结果(n=3)
3 讨论
本文在参考2010版《中国药典》及《化学药物杂质研究的技术指导原则》苯磺酸氨氯地平片有关物质测定,三批分散片有关物质测定结果表明其有关物质总量均低于0.5%,符合药典规定
本文考查了不同实验条件苯磺酸氨氯地平有关物质的色谱行为,并用自身对照法进行比较,杂质与主峰均能分开,试验结果表明改方法专属性强、灵敏度高、结果准确。