对地红霉素肠溶片释放度测定方法的分析

王媛

【摘 要】目的 对地红霉素肠溶片释放度测定的三种方法进行系统的研究和比较，并建立其最佳测定方法。方法 分别采用口占 吨氢醇显色法、硫酸显色法以及高效液相色谱法测定地红霉素肠溶片的释放度，对每种方法进行方法学的研究和验证。结果 采用三种方法均可以准确地测定地红霉素肠溶片的释放度，不同方法测得结果差异较小。结论 硫酸显色法因试剂易得，操作简便，快捷、准确，将其作为最佳测定方法。

【关键词】地红霉素；测定方法

地红霉素（dirithromycin）是一种新的第二代红霉素类大环内酯类抗生素，由红霉环胺与脂肪醛酸缩合而成。地红霉素通过阻碍细菌转肽过程，抑制细菌蛋白质的合成。体外试验证明地红霉素对临床上多种常见致病菌有抗菌作用。地红霉素具有与红霉素相似的抗菌谱，其特点是药动学性质优良，半衰期长达20～50h，不良反应相对较轻。

1.仪器与试药

1.1仪器

ZRS-8型智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；ShimadzuUV-2401PC型紫外-可见分光光度计；Shi-madzu高效液相色谱仪（LC-10ATvp泵、SPD-10Avp可见紫外检测器、SCL-10Avp控制器）；AE200电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

1.2试药

地红霉素对照品（纯度99.83%）为自制，并由中国药品生物制品检定所标定；地红霉素肠溶片（规格：0.25g）为自制产品；10%口占吨氢醇甲醇溶液购自北京恒业中远化工有限公司；乙腈、甲醇为色谱纯；盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠及硫酸等均为分析纯。

2.方法与结果

2.1口占吨氢醇显色法

在采用口占吨氢醇显色法测定本品释放度的过程中发现，完全依照USP23中的显色条件，方法的线性和耐受性不佳；经过改良显色条件，可使方法具有较好的线性和显色稳定性。其他条件如对照品溶液的浓度、检测波长等则与USP23中条件相同。

2.1.1美国药典中的显色条件

精密量取待测溶液0.50ml，加入0.50ml乙酐，混匀。然后加入5.0ml冰乙酸，静置5min，加入0.50ml口占吨氢醇试液，放置30min使显色。

2.1.2改良后显色条件

精密量取待测溶液1.0ml，加入0.10mol/L盐酸溶液4.0ml，摇匀，再加口占吨氢醇试液10.0ml，混匀，于沸水中加热5min，于冰浴中冷却，再于室温放置15min。

口占吨氢醇试液的配制取10%口占吨氢醇甲醇溶液0.02ml，置100ml量瓶中，加冰乙酸20ml及盐酸1ml，摇匀，用冰乙酸稀释至刻度。

2.1.3标准曲线的制备

精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成0.07、0.14、0.21、0.28、0.35、0.42、0.49和0.56mg/ml的标准溶液。分别精密量取1.0ml，按上述方法进行显色，测定540nm波长处吸收度。以吸收度A对标准溶液浓度C（mg/ml）进行回归，得标准曲线方程为：A=1.8452C-0.0042，r=0.9998。

2.1.4溶液室温放置稳定性试验

取上述0.28mg/ml的标准溶液于室温下放置，分别于0、1、2、4、6和8h精密量取1.0ml进行显色，测定。结果表明溶液的吸收度在4h内变化不大。

2.1.5回收率试验

精密称取地红霉素11、14及17mg，分别置50ml量瓶中，加入处方量的空白辅料，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。分别精密量取续滤液1.0ml，按上述方法进行显色，于540nm波长处分别测定吸收度。计算测得量及回收率。

2.1.6测定法

取本品，先以盐酸溶液（9→1000）900ml为溶剂，采用篮法，转速100r/min，经2h，每片肠溶膜均不得有裂缝或软化现象；继以磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶剂，45min时取溶液10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，并稀释成0.28mg/ml的溶液，作为对照品溶液；精密量取上述溶液各1.0ml，加入0.10mol/L盐酸溶液4.0ml，摇匀，再加入 口 占 吨氢醇试液10.0ml，混匀，于沸水中加热5min，于冰浴中冷却，再于室温放置15min。以空白试剂溶液作对照，于540nm波长处测定吸收度，以两者的比值计算释放百分率。

2.2硫酸显色方法

采用显色条件与地红霉素肠溶片试行标准中规定的相同条件，即以（75→100）硫酸液5ml为显色试剂，室温下反应1h，检测波长为482nm。

2.2.1标准曲线的制备

精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成32、64、96、128和160μg/ml的标准溶液。分别精密量取5.0ml，加入（75→100）硫酸液5ml，摇匀，室温下放置1h，测定482nm处吸收度。以吸收度A对标准溶液浓度C（μg/ml）进行回归，得标准曲线方程为：A=0.0064C-0.0766（r=0.9993）。

2.2.2溶液室温放置稳定性试验

取上述96μg/ml的标准溶液于室温下放置，分别于0、1、2、4、6和8h精密量取5.0ml，进行显色，测定。结果表明，溶液的吸收度在4h内变化不大。

2.2.3回收率试验

精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素80、100和120μg/ml的溶液，分别精密量取5.0ml，按上述方法显色，测定482nm处吸收度。计算测得量及回收率，结果三个剂量的回收率分别为99.6%、100.2%和99.1%，对应的RSD分别为0.8%、0.6%和0.5%。

2.3高效液相色谱法（HPLC法）

2.3.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamond-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈∶甲醇∶磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.41g与磷酸氢二钾6.91g，加水至1000ml）（44∶19∶37）；检测波长205nm；流速2ml/min；柱温40℃；进样量10μl。

系统适用性试验依照USP23中地红霉素肠溶片含量测定项下方法进行。根据试验结果规定，地红霉素16R异构体峰与9（S）红霉胺峰之间分离度R12 不得小于5.0，地红霉素16R异构体峰与16S异构体峰之间分离度R23不得小于2.0。

2.3.2空白辅料及溶剂的干扰试验

试验结果表明，空白辅料及溶剂（pH6.8磷酸盐缓冲液）均在2min之前出峰，不干扰样品的测定。

2.3.3标准曲线的制备

精密称取地红霉素对照品适量，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成0.05、0.10、0.20、0.40和0.60mg/ml的标准溶液。分别吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积A对浓度C（mg/ml）进行回归，得标准曲线方程为：A=553934C+894.69（r=0.9999）。

2.3.4溶液稳定性及精密度

取上述0.20mg/ml的标准溶液于室温条件下放置，分别于0、1、2、4和6h吸取10μl，进行测定，结果表明，6h内峰面积变化不大，RSD为0.75%。0时连续进样6次，记录色谱图，量取峰面积，计算其相对标准偏差，RSD为0.66%。

2.3.5回收率试验

精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素0.20、0.25和0.30mg/ml的溶液，分别吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算测得量及回收率。结果表明，三个剂量的回收率分别为100.0%，99.7%和99.4%，对应的RSD分别为0.5%、0.6%和0.5%。

2.3.6测定法

分别吸取2.1.6项下所述供试品溶液和对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算释放百分率。

3.讨论

（1）比较上述三种地红霉素肠溶片的释放度测定方法，口占吨氢醇显色法为美国药典中规定的方法，操作繁琐，且显色试剂国内没有生产，必须进口；硫酸显色法为我国试行药品标准中规定的方法，优点为试剂易得，操作简便快捷；HPLC法为参考美国药典中地红霉素肠溶片含量测定方法建立的，优点为准确，灵敏度高，但所需时间较长，成本较高。

（2）三种方法均具有较高的准确度，所测得的释放曲线间差异较小。但综合考虑，硫酸显色法成本较低，操作方便，为地红霉素肠溶片释放度测定的最佳方法。

（3）采用上述三种方法测得的自制地红霉素肠溶片45min的释放量均达标示量的100%左右，说明该制剂的释放性能良好。

（4）USP23规定的方法中，口占吨氢醇是采用的固体，而国内仅有其10%的甲醇溶液销售，因此，上述口占吨氢醇显色法中采用了10% 口占吨氢醇甲醇溶液，方法学研究表明，这种变动不会影响测定结果的准确性。

【参考文献】

[1]刘鑫荣.地红霉素的药理及临床应用[J].国外医药抗生素分册，1995，16（4）：267.

[2]张亚杰，赫爱萍，张斌.HPLC法测定地红霉素及其肠溶片、肠溶胶囊、肠溶颗粒的含量[J].中国药品标准，2004，5（5）：43.