紫外分光光度法测定淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量

邓 伟，李新建，田小林，王 沛*

(1.长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021；2.长春中医药大学，吉林 长春 130117)

紫外分光光度法测定淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量

邓 伟1，李新建1，田小林2，王 沛2*

(1.长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021；2.长春中医药大学，吉林 长春 130117)

目的：建立淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法测定淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量。以甲醇作空白对照，检测波长：270 nm。结果：淫羊藿苷量在0.048～0.40 mg范围内与吸收度呈良好的线性关系，r=0.999 9，平均回收率为98.88%，RSD为2.87%。结论：本方法简便可行、结果准确可靠，重复性好，可作为淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量测定方法。

紫外分光光度法；淫羊藿颗粒；淫羊藿苷；含量测定

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿EpimediumbreviconumMaxim.的干燥地上部分, 始载于《神农本草经》，味辛、甘，性温，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、助阳益精和祛风湿功效，并有抑制脊髓灰质病毒、降血压、增加冠脉流量和防治骨质疏松[1-2]等多种药理作用。临床主要用于治疗阳痿、腰膝痿弱、风寒湿痹、四肢麻木及股骨头坏死等症。淫羊藿的主要有效成份是淫羊藿总黄酮(淫羊藿苷、淫羊藿次苷)和淫羊藿多糖等[3]为了有效的控制淫羊藿颗粒的质量，笔者选取了其中主要药效成分，也是含量较高的淫羊藿苷作为监控指标，现报道如下。

1 实验材料

1.1 材料 淫羊藿饮片购自长春中医药大学附属医院药房，经长春中医药大学药学院鉴定教研室肖寄平老师鉴定确系小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornumMaxim.的干燥地上部分，属《中华人民共和国药典》2010版所载正品;淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号11788-201002)；甲醇为色谱纯(北京化工厂)，其余化学试剂均为分析纯试剂。

1.2 仪器 UV-9100紫外分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司)，电子天平AL204(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司),循环水多用真空泵SHZ-型(上海沪西分析仪器厂有限公司)。

1.3 对照品(标准品)溶液的制备 精确称取经80 ℃干燥至恒重的淫羊藿苷标准品4.0 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，既得(每1 mL中含淫羊藿苷标准品0.16 mg)。

1.4 样品溶液的制备 取淫羊藿颗粒适量，研细，取约5.0 g，精密称定，加70%乙醇50 mL，加热回流1 h，放冷，静置过夜，过滤。再用乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯层。最后用甲醇溶解所得稠膏转溶于25 mL容量瓶中，稀释至刻度，制成每1 mL中约含样品25 mg的溶液，摇匀，用0.45 μm微膜滤过，取滤液，作为样品供试品。

2 实验方法与结果

2.1 最大吸收波长的选择 分别吸取淫羊藿标准品溶液、样品溶液和色谱纯甲醇溶液适量,于紫外分光光度仪上从λ=200～700 nm进行扫描。标准品溶液和样品溶液在λ=270 nm处均有最大吸收，色谱纯甲醇溶液在λ=270 nm处没有吸收，所以确定测定最大吸收波长为λ=270 nm。

2.2 标准曲线的绘制 精确吸取1.3项下淫羊藿苷标准品溶液0.3，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL置于25 mL容量瓶中，定容至刻度,用UV-9100紫外分光光度仪在270 nm处,以甲醇为空白对照分别测其吸光值。以淫羊藿苷量(X)对吸收度值(A)进行线性回归。

由数据得线性回归方程为:Y=1.419 1X-0.047 7(r=0.999 9)。淫羊藿标准品在0.048～0.400 mg范围内线性关系良好。

2.3 精密度实验 分别精密量取1.3项下标准品溶液1.0 mL，6份,分别置于25 mL容量瓶中，定容至刻度，用UV-9100紫外分光光度仪在270 nm处，以甲醇为空白对照分别测其吸光值，取平均值，计算RSD=0.28%，表明仪器精密度良好。

2.4 稳定性实验 精密吸取1.4项下方法制备的同一样品溶液，室温(25 ℃)放置,用UV-9100紫外分光光度仪在270 nm处,以色谱甲醇为空白对照，每隔20 min 测1次其吸光值。数据结果表明:在2 h内淫羊藿苷含量稳定，计算RSD=1.26%，不影响测定结果。

2.5 回收率实验 采取加样回收法，精密称取已知淫羊藿苷含量(高、中、低3个浓度)的样品6份，再精密添加淫羊藿苷标准品，按1.4项下方法制备样品溶液，室温(25 ℃)放置。以色谱甲醇为空白对照，在λ=270 nm处测定吸光度值(结果见表1)。计算得平均回收率为98.88%，RSD值为2.87%。

2.6 样品含量测定 取淫羊藿颗粒成品6批，按1.4项下方法制成样品溶液,依照上述色谱测定条件测定,根据外标法测定计算淫羊藿颗粒中的淫羊藿苷含量。6批淫羊藿颗粒成品的紫外吸收度分别为：0.476、0.467、0.477、0.456、0.466、0.474；含量分别是：0.369 037、0.362 695、0.369 741、0.354 943、0.361 990、0.367 627 mg/粒,均值0.364 339 mg/粒；标示量误差为：96.64、100.45、98.53、102.64、100.64、99.11，符合该新药研发所制定的质量标准。

表1 回收实验测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶液制备的溶剂选择 由于本制剂属于中药制剂，成分比较复杂，考虑到在含量测定时杂质的干扰，对样品的溶解度进行了测定试验。按《中国药典》2010年版一部凡例的标准规定，对供试和淫羊藿苷对照品进行了溶解测定考察，通过使用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、苯、氯仿等试剂进行比较，结果使用甲醇溶解制成最终待测样品的效果最佳。

3.2 色谱条件的选择 本测定方法采用的色谱条件为λ=270 nm处测定吸收度。原因在于淫羊藿苷标准品溶液、样品溶液和色谱纯甲醇溶液，在该波长处均有最大吸收，作为溶媒的色谱纯甲醇溶液在此波长处没有吸收(较好地排除了干扰)，所以确定测定吸收波长为λ=270 nm。测量结果好。

3.3 测定结果 本方法简便快捷，结果准确可靠，重复性好，可作为淫羊藿颗粒中淫羊藿苷的含量测定方法。

[1]李青南,廖进民,吴铁,等.淫羊藿防治羟基脲所致雄大鼠骨质疏松的定量研究[J].中国中医骨伤科杂志,1996,4(3):1.

[2]李青南,廖进民,吴铁,等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨质疏松的实验研究[J].中国药学杂志,1996,31(8):647.

[3]王文龙,顾雪竹,李雪婷,等.淫羊藿提取工艺优化研究[J].长春中医药大学学报,2011,27(2):163-164.

ContentDeterminationoftheIcariininEpimediumBreviconumGrainbyUV

DENG Wei1,LI Xin-jian1,TIAN Xiao-lin2,WANG Pei2*

(1.Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130021;2.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130117)

ObjectiveTo establish a method for determing Icariin in Epimedium breviconum Grain.MethodsUV deternination of Icariin in Epimedium breviconum Grain.Using methanol as blank control,detection wavelength:270 nm.ResultsIcariin in 0.048～0.400 mg Range and absorbance was linear regression,r=0.999 9,the average recovery was 98.88%,RSD 2.87%.ConclusionThe method is simple and reproducible for the determination of Icariin in Epimedium breviconum Grain by UV.

UV;Epimedium breviconum Grain;Icariin;Determination

R284.2

A

1003-5699(2013)01-0072-02

2012-10-19)

吉林省科技厅科技支撑项目(编号:20090926)。

邓 伟(1981-)，男，硕士，讲师。研究方向：骨伤临床与药物研究。

*通信作者：王 沛,Tel:0431-86045206,E-mail:Wapa1988@163.com。