P53、Grb7 在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

刘磊

P53、Grb7 在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

刘磊

目的探讨P53、Grb7在胃肠道间质瘤(GIST) 中的表达及其与GIST生物学行为的关系,为预测该肿瘤的侵袭潜能提供理论依据和可能的预测指标。方法收集58例手术切除的GIST标本,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P53和Grb7蛋白的表达,并结合病理形态学及生物学行为评价进行统计学分析。结果肿瘤组织中的P53、Grb7阳性率分别为85.2% 、83.3%,并随着GIST 恶性分级的增高,其表达均出现递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05)；与生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死、肿瘤细胞特殊排列结构亦有明显关系(P<0.05)。结论P53、Grb7蛋白表达与GIST的发生、发展有关, 检测P53、Grb7表达结合特殊病理学形态可以作为评价GIST生物学行为及预后的客观指标。

胃肠道间质瘤;P53蛋白;Grb7蛋白;免疫组织化学方法

1 资料与方法

1.1选取郑州人民医院普通外科2007年1月至2012年12月手术切除经病理证实且免疫组化均表达CD117或CD34为阳性的胃肠道间质瘤58例；复阅切片重新诊断。其中男性32例，女性26例，年龄分布32～74岁，中位年龄52.6岁，所有患者术前均未接受化疗、放疗、免疫治疗及其他针对肿瘤的治疗。按2001年美国国立卫生研究院(nation institute of health，NIH)诊断标准，根据肿瘤大小、每50高倍镜视野下核分裂计数将58例为：极低度侵袭危险性6例、低度侵袭危险性12例、中度侵袭危险性22例和高度侵袭危险性18例四组。

1.2所有标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片4张，2张分别用于P53、Grb7免疫组织化学检测，1张作HE染色，1张用PBS代替一抗作阴性对照。检测方法采用免抗P53多克隆抗体及S-P 免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物技术开发公司。Grb7试剂盒购自Santa Cruz 公司(单抗,1 ∶ 100)。操作按试剂盒说明书进行。已知P53，Grb7阳性的乳腺癌作为阳性对照。

1.3结果判定 P53蛋白主要在细胞核内表达,以胞核内出现棕黄色染色为阳性染色，光镜下观察整个切片，高倍镜下(10×40)随机观察5个视野，以阳性细胞百分率为判定标准，阳性细胞<10%判定阴性；阳性细胞>10%判定为阳性。阳性细胞为细胞膜或胞质棕黄着色。光镜下观察整个切片，高倍镜下(10×40)随机观察5个视野，以阳性细胞百分率为判定标准,无阳性细胞或阳性细胞5% 为“-”；阳性细胞数5%～25%为“+”；阳性细胞数26%～50%为“++”；阳性细胞数为50%为“+++”。

1.4统计学方法 采用SPSS 13.0 统计软件。免疫组化结果与临床病理特征比较采用χ2检验。P53与Grb7之间的相关性检验运用Spearman相关检验。

2 结果

2.1P53、Grb7在GIST 中的表达及其与临床病理联系 P53 、Grb7在肿瘤细胞中有阳性表达, 详见图1、2。在GIST中P53、Grb7阳性表达率为65.52%(38/58)，55.17% (32/58)。通过χ2检验，P53、Grb7在不同年龄、不同性别、不同部位之间，不同组织学类型之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)，P53与肿瘤细胞密集度、细胞异型性、肿瘤细胞坏死、浸润性生长及特殊排列结构(交叉束状、弥漫片状、栅栏状和古钱币样)有关(P<0.05)，P53、Grb7与GISTs肿瘤的直径、肿瘤细胞核分裂象及组织学分级有关(P<0.05)。随恶性潜能级别升高P53、Grb7表达逐步增高，通过两两比较显示，极低危、低危和中危、高危GISTs之间P53、Grb7的阳性表达率有一定差异(P<0.05)，中危和高危之间P53阳性表达率有显著差异(P<0.05),但极低危和低危之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05)。P53、Grb7表达两者呈正相关(r=0.6667,χ2=212.13,P<0.01),详见表1。

图1 P53在GIST中的表达 400×

临床病理指标NP53Grb7n%n%患者年龄(岁)<5018147778105556≥5040246000225500肿瘤分级极低恶62333311667低度恶127582254178中度恶22156818135909高度恶18147778126667转移浸润无24145033104167有34247058226471肿瘤直径(cm)<2833975339752～516743751062506⁃1022145454167273>101286667108333核分裂数50hFP≤51884446844466⁃1024177083125000>1016138125127500中心坏死无198444494738有39235883235883细胞密集度无2210444483637有36287778246667细胞异型性无28155357145000有30237667186000特殊排列结构无25145600114400有33247273216364

3 讨论

GISTs 的良恶性缺乏明确的诊断标准,准确预测GISTs 生物学行为十分困难。在实际工作中,我们一般根据肿瘤大小、核分裂像的多少。但是,一些直径<2 cm,核分裂像为1 个/ 50 HPF,病理诊断为良性,却在10 年或更长时间发生转移。

P53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因, 50%以上人类恶性肿瘤都可检测到P53基因突变。P53基因可分为野生型P53(wt-p53)和突变型P53(mt-p53)[2]，野生型P53基因功能与细胞分化、DNA合修复以及细胞程序性死亡有关。主要参与细胞周期G1/S交界处检查点的检查机制，负责检查细胞基因组的完整性[3,4]。它强迫具有DNA损伤的细胞在G1期进行修复后进入S期，如修复失败，则P53蛋白可启动细胞发凋亡。野生型P53对于肿瘤具有抑制细胞增殖，诱导凋亡，诱导分化的作用，它通过控制与细胞调控，从而达到抑制癌的目的。突变型P53基因由于失去正常功能而使P53蛋白在细胞中堆积，造成P53蛋白含量升高，抑制细胞凋亡，促进细胞转化和增殖，导致肿瘤的发生。P53基因发生突变时，半衰期明显延长，比正常细胞高出100～1000倍，这是应用免疫组化法检测P53的基础[5]；因此用免疫组化方法检测到的P53多为突变型；本研究结果显示P53蛋白阳性表达率为65.52%， P53与肿瘤大小、肿瘤细胞核分裂象、组织学分级、特殊病理学形态有显著意义(P<0.05)，P53蛋白表达量随恶性潜能级别升高而逐步增高，提示P53基因突变在肿瘤细胞恶性进展中起一定作用,有可能成为临床判定GIST风险程度分级的重要参考指标。因此,我们认为P53结合特殊病理学形态可以作为判断胃肠道间质瘤恶性程度及预后的参考指标。

生长因子受体结合蛋白(growth factor receptor-bound protein， Grb7)是一个没有内源性酶活性的联结蛋白，该蛋白主要是介导各种细胞表面受体和特异性下游信号的耦联，与细胞增殖及肿瘤转移有关[1]，Grb7蛋白有3个特征性结构区[6,7]，1个富含脯氨酸的氨基端，1个GM中央区和1个羧基端的SH2区，调节并激活酶的催化活性。羧基端SH2是Grb7与其他蛋白结合的重要结构，所结合的分子是酪氨酸激酶受体及其他酪氨酸磷酸化信号分子。本研究结果显示Grb7蛋白阳性表达率为55.17%，我们检测了Grb7在GISTs组织中的表达与GIST肿瘤的直径、肿瘤细胞核分裂象、特殊病理学形态有显著意义(P<0.05)，Grb7与肿瘤细胞密集度、细胞异型性、肿瘤细胞坏死、浸润性生长及特殊排列结构(交叉束状、弥漫片状、栅栏状和古钱币样)差异有统计学意义(P<0.05)。

并分析它与组织学分级的关系，随着恶性潜能增加Grb7表达升高，通过两两比较显示差异有统计学意义(P<0.05)。提示Grb7基因突变与GIST的发生有关；Grb7在食管癌中表达率为45%，并且与淋巴转移、肿瘤浸润相关[8]。研究表明胃肠道间质瘤中Grb7阳性表达与阴性表达的5年生存率比较有显著性差异[9]，结果提示Grb7蛋白表达在GIST肿瘤细胞恶性进展中起一定的作用，结合临床病理学形态可能成为临床判定胃肠道间质瘤恶性潜能、生物学行为及预后的良好指标。故Grb7可以作为GIST 的预后判断有一定意义。

本研究结果显示,在GIST 中P53与Grb7的表达呈正相关(P<0.05),提示两者在GIST 的发生发展过程中的作用密切相关, 可能通过协同作用促进肿瘤的发生、发展和肿瘤细胞的侵袭转移。因此, P53、Grb7可以作为预测GIST 恶性潜能及生物学行为较好的客观指标。

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ClinicalsignificanceofP53、Grb7expressioningastrointestinalstromaltumor

LIULei.

DepartmentofGastrointestinalSurgery,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege(Zhanjiang524001,China)

ObjectiveTo investigate the expression of P53, Grb7 protein in gastrointestinal stromal tumor (GIST), and discuss the relationship between their expression and clincopathological characteristics.Methods58 cases of GIST were studied for P53, Grb7 by immunohistochemical staining, Their relations with histomor-phology and biological behavior were analyzed statistically.ResultsThe positive expression of P53, Grb7 was 85.2% (46/54), 83.3%(43/54) respectively. The express-ion of P53, Grb7 increased significantly according to the malignant increasing(P<0.05) and associated with nuclear division、the histological grade、high cellularity,nuclear pleomorphism，tumor necrosis，tumor invasion and perivascular collar-like pattern(P<0.05).ConclusionThese data shows the expression of p53 and Grb7 and the clinical pathologic characteristics of GISTs are related to the biological potential, grading criteria and progression of GIST. we can provide scientific basis for the therapy and prognosis evaluation of the GISTs.p53, Grb7 in GIST.

Gastrointestinal stromal tumor; P53, Grb7, Immunohistochemistry

450003 郑州人民医院

P53 是目前研究最为广泛深入的抑癌基因之一，生长因子受体结合蛋白7 (growth factor receptor bound protein 7,Grb7) 是新近发现的信号联结蛋白,该蛋白主要是介导各种细胞表面受体和特异性下游信号的耦联，与细胞增殖及肿瘤转移有关[1]，二者在胃癌、乳腺癌、食管癌组织中有高表达, P53、Grb7 蛋白已被证实是较好预后标志物。有关P53、Grb27 蛋白在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GISTs) 中的表达情况，尚未见国内外文献报道。因此, 检测GIST中P53、Grb7的蛋白表达,分析其与临床病理特征的关系,探讨P53, Grb7预测胃肠道间质瘤(GIST)恶性潜能及生物学行为、判断预后的意义。