独角莲对S180荷瘤鼠的免疫调节作用及机理初步研究

段玉敏 张洪娟

（黑龙江省中医药科学院·哈尔滨 150036）

1 材料与方法

1.1 药物

独角莲乙醇提取物由黑龙江省中医研究院中药所提供。

注射用环磷酰，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：20100831

1.2 动物

清洁级昆明种小鼠由吉林大学实验动物中心提供。动物合格证号：Scxk(吉)2007-0003

1.3 瘤株

肉瘤S180由黑龙江省肿瘤研究所提供。

1.4 主要仪器与试剂

超净工作台；酶标仪；显微镜；离心机 ；lsever抗凝液；都氏试剂；羊颈静脉血由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供；豚鼠血清，用前生理盐水1：10稀释。

1.5 方法

实验用荷瘤小鼠均按常规方法接种肿瘤细胞。接种次日，随机分为5组，每组30只，另设空白对照组。均为ig给药，每天1次。每组取10只鼠给药10天后停药，尾静脉注射1：4稀释的印度墨汁，0.1mL/10g体重；在注入印度墨汁后1min和11min分别用毛细管从小鼠眼内静脉丛取血25ul，用0.1%Na2CO3溶液2 mL稀释；以0.1%Na2CO3溶液2mL调零点后，将待测样品放入酶标仪中,于650nm波长处测出OD值,颈椎脱臼处死小鼠，称取体重，取胸腺、肝、脾称重，并计算矫正吞噬指数。每组再取10只鼠，给3次药后腹腔注射绵羊红细胞悬液0.2mL/每鼠，进行免疫，继续给药6日后，眼眶取血2500rpm离心10min，分离血清。样品管中加入300倍稀释血清1mL、0.5mL绵羊红细胞稀释液、1：10的豚鼠血清稀释液1mL；对照管中加入1mL生理盐水、0.5mL绵羊红细胞稀释液、1：10的豚鼠血清稀释液1mL。将各管置37℃水浴中保温10分钟，冰浴终止反应后2000rpm离心10分钟取上清液1mL、都氏液3mL于试管中，同时取0.25mL绵羊红细胞稀释液、都氏液4mL于另一支试管中静止10min，于酶标仪中540nm处测各管的吸光度[2]。每组剩余鼠给药10天，眼眶取血2500rpm离心10min，分离血清采用放免法检测IL-2、TNF-α含量，操作按试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 对S180荷瘤鼠免疫功能的影响

表1 独角莲对S180荷瘤小鼠吞噬功能、溶血素及胸脾指数的影响(±S，n=10)

表1 独角莲对S180荷瘤小鼠吞噬功能、溶血素及胸脾指数的影响(±S，n=10)

与模型组比较**P＜0.01， 与空白组比较 ▲P＜0.05

组别 剂量g/kg脾指数mg/10g胸腺指数mg/10g矫正吞噬指数OD 溶血素IC50空白对照 —— 73.21±13.52 23.43±6.21 6.46±1.28 201.14±43.52模型对照 —— 95.67±22.38 15.29±4.14 4.13±0.83▲ 129.54±28.96▲独角莲高 1.6 75.06±17.27*22.69±6.15*6.58±1.39* 184.85±31.26*独角莲中 0.8 78.43±16.25*21.51±5.33*6.06±1.27* 177.42±29.18*独角莲低 0.4 80.64±20.82 17.83±5.29 5.13±1.71 149.37±21.06环磷酰胺 0.003 60.35±15.14* 6.95±2.18*3.89±0.62▲ 131.85±30.62

实验结果表明模型组、环磷酰胺组荷瘤鼠矫正的吞噬指数、胸脾指数均低于正常组P＜0.05；独角莲高、中、低剂量组矫正的吞噬指数、胸脾指数与空白对照组无明显差异P＞0.05，明显高于模型组P＜0.01。表明独角莲具有显著提高机体单核巨噬细胞系统的吞噬功能。

2.2 对S180荷瘤鼠血清中溶血素、IL-2、TNF-α的影响

表2 独角莲对S180荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α的影响(±S，n=10)

实验结果表明，模型组荷瘤鼠外周血TNF-α、IL-2含量明显低于空白组水平但无明显差异P＞0.05。独角莲高、中剂量组小鼠外周血TNF-α、IL-2含量明显高于模型组，与模型组比均具有显著性差异P＜0.05；与空白组水平相当。

3 讨论

癌组织由机体本身组织演变而来，基本上不产生较强的刺激性物质，机体的免疫系统对其有一定的相容性，免疫功能的破坏使肿瘤能够通过多种机制逃避免疫系统的攻击，因此诱导有效的免疫应答、激活和恢复机体的免疫功能防止肿瘤细胞免疫逃逸是提高肿瘤患者生活质量、有效延长生命的关键所在。目前，中草药及其活性成分的抗肿瘤作用研究已成为肿瘤研究领域的一大热点，国内外学者分别对中药直接抗肿瘤、通过免疫途径或作为抗肿瘤药物的增效剂而发挥间接抗肿瘤作用进行了多层面、多靶点的广泛研究[2]。本课题组通过体内、体外实验对独角莲乙醇提取物进行抗肿瘤作用研究并取得很好抑瘤效果[3,4]。本实验通过以肉瘤S180荷瘤小鼠为模型的免疫功能影响研究表明，独角莲能明显提高吞噬细胞的功能，对绵羊红细胞所致小鼠特异性抗体溶血素的生成则有增强作用，能促进免疫因子的生成是荷瘤机体恢复免疫功能，从而揭示该药即具有很强的抗肿瘤作用又有调节机体免疫功能的两效合一作用，为新药注册和临床有效性提供科学依据。

[1] 熊静帆,等.深圳市1999-2004年恶性肿瘤发病趋势分析[J],中华流行病学杂志.2006,13(8)：572-576

[2] 张静,等.中药抗肿瘤的免疫学调节作用和作用机制研究进展[J].中国免疫学杂志，2006，22(6),386-387

[3] 张洪娟,等.独角莲不同工艺提取物体内抗肿瘤活性研究[J].中草药,2008,39,84-86

[4] 段玉敏,等.独角莲乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究[J].中医药学报,2010,38(3),45-47