γ射线辐照单采血小板功能及临床应用研究＊

何其通，余晋林，郭如华，罗益红

（广东省佛山市中心血站 528000）

输血相关移植物抗宿主病（TA-GVHD）是输血反应中最严重的并发症之一，因其临床表现缺乏特异性，易漏诊和误诊并且病死率高达80%～90%，目前该病主要以预防为主［1］。TA-GVHD的主要原因是与输入血液（成分）中含有活性的T淋巴细胞有关。国外从20世纪70年代就发现γ、X射线可以有效破坏淋巴细胞活性，从而射线辐照血液被认为是一种预防TA-GVHD的惟一有效、可靠的方法。怎样的辐照剂量可以最大限度的灭活淋巴细胞而又可以最大限度的保持血小板的功能是一个值得探讨的课题。本文就不同剂量的γ射线辐照单采血小板，对血小板的功能及临床应用效果进行了观察，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 仪器 血液辐照仪Gammacell GC-3000Elan-I加拿大诺迪安公司，放射源为137Cs，活度为50.7E＋12Bq。流式细胞仪FACS Cabibur美国BD公司。显微镜Olympus CX32RTSF日本Olympus公司。

1.2 试剂 植物血凝素（PHA）、淋巴细胞分离液、瑞氏染液、CD41a、CD62p。

1.3 血液标本的制备辐照 将单采血小板分装于5个血袋中，分别作为未辐照组（对照组）和25、30、35、40Gy不同剂量辐照组。辐照组样本分不同剂量置于血液辐照仪中辐照。

1.4 实验方法 将上述经辐照前后的血小板标本经淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞后，用植物血凝素（PHA）刺激T淋巴细胞，使其转化为淋巴母细胞，经瑞氏染色后用显微镜分别计数转化为母细胞的百分率，选取转化率为零的起始辐照剂量为实验剂量。取80份用实验剂量辐照前后的血小板按文献［2］的方法用CD41a、CD62p标记后，用流式细胞仪检测其阳性率。

1.5 临床分组 选取40例接受化疗的急性白血病患者随机分为对照组和治疗组，其中对照组20例，男13例，女7例，年龄17～49岁，中位数年龄32.5岁，其中急性淋巴细胞性白血病12例，急性粒细胞性白血病5例，急性单核细胞性白血病3例；治疗组20例，男15例，女5例，年龄16～51岁，中位数年龄29.8岁，其中急性淋巴细胞性白血病8例，急性粒细胞性白血病5例，急性单核细胞性白血病7例。输注前血小板计数均小于20×109／L，并伴有不同程度的出血表现。治疗组病例输注1个治疗量经γ射线辐照单采血小板，对照组病例输血1个治疗量单采血小板。记录患者输前的血小板计数和输血后1h血小板计数。

1.6 临床疗效判断 血小板纠正增加指数（CCI）＝（输后血小板计数－输前血小板计数）×体表面积（m2）／输入血小板总数（1011），CCI＞10为输注有效［3］。

1.7 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行数据处理，两计量资料的比较用t检验，计数资料率的比较用χ2检验。

2 结 果

表1 不同剂量照射前后淋巴细胞转化结果 （n＝12）

由表1可知，经过4种不同的剂量辐照后，淋巴细胞转化率均有显著性变化，剂量为35Gy时，淋巴细胞的转化率开始为0，说明35Gy能使淋巴细胞全部灭活。

表2 35Gyγ射线辐照前后血小板CD41a、CD62p阳性率的比较（n＝80）

表3 观察组和对照组血小板输注有效率的比较

3 讨 论

TA-GVHD是因为输入的血液中CD4辅助T淋巴细胞识别宿主表达的异源性主要和次要组织相容性抗原（MHC）而激活，进而分泌可溶性细胞因子如白细胞介素-2（IL-2），促使宿主抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞活化增殖，从而形成效应细胞，诱导TA-GVHD的发生［4－5］。大量的实验报道证实了辐照可以有效地诱导淋巴细胞的凋亡［6－7］。

CD41a、CD62p是血小板功能的检测指标，检测CD41a可反映血小板的聚集功能，检测CD62p可知血小板是否处于激活状态，也反映血小板的释放功能［8］。CD62p在活化和非活化血小板间差别最显著，而且不被血浆蛋白所掩盖，不随时间的推移而在活化血小板表面消失，是目前所知反映血小板活化与释放最特异性的标志物［9］。

血液制品的最佳辐照剂量以既能灭活淋巴细胞又能维持其他血液成分的功能与活力和最小的损伤为选择。早期国外推荐剂量为15Gy，后来分别报道了接受15～20Gy辐照血液后仍产生TA-GVHD的报道［10］。FDA把辐照中心靶剂量定为25Gy，其他部位不得低于15Gy，欧洲学术委员会制定的辐照剂量为25～40Gy。本研究探讨了不同剂量辐照后淋巴细胞的灭活和对血小板功能的影响，结果表明剂量达到35Gy时，对血小板功能没有明显的损伤，可以有效地诱导淋巴细胞的凋亡，减少活性淋巴细胞的数量，起到预防TA-GVHD的发生的效果，是一个比较适合的辐照剂量。

［1］ Moroff G，Luban NLC.The irradiation of blood and blood components to prevent graft-versus-host disease：Technical issues and guidelines［J］.Cancer，1997，11（1）：15.

［2］ 王书奎，周振英.实用流式细胞术彩色图谱［M］.上海：第二军医大学出版社，2004：43-44.

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［6］ Klassen NV，Walker PR，Ross CK，et al.Two-stage cell shrinkage and the OER for radiation-induced apoptosis of rat thymocytes［J］.Int J Radiat Biol，1993，64：571.

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［9］ MertenM，Thiagarajan P.P-selectin in arterial thrombosis［J］.J Cardiol，2004，93：855-860.

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