五味子乙素对脑胶质瘤的体内抑制作用研究

吴海星，徐希妮，刘玉清，侯晓节，陶玉龙，金 宏，齐 玲 (吉林医药学院:.009级临床药学本科班，.实验中心，3.病理教研室，吉林吉林 303)

五味子具有保肝、抗衰老、抗肿瘤和抗氧化等作用［1］;五味子的抗肿瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位［2］，五味子乙素(Schisandrin B，Sch B)为主要抗肿瘤成分之一，目前对Sch B治疗脑肿瘤方面的研究很少，且Sch B在体内抑制脑肿瘤的生长的研究至今还未见到有相关的文献报道。本课题组此前的研究发现，Sch B可抑制体外培养脑胶质瘤SHG-44细胞的生长［3］。因此，本实验继续研究Sch B对体内脑胶质瘤生长的作用，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品

雄性Wistar大鼠20只，购自吉林大学实验动物中心［动物合格证号SCXK(吉)2008-0005］，每只重220～240 g。

Sch B(中国药品生物制品检定所)。

1.2 细胞培养及接种

C6大鼠脑胶质瘤细胞系(吉林大学基础医学院提供)置于含10%的1640培养液中培养，待细胞生长至对数生长期，用PBS液洗涤2次后制成细胞悬液，浓度为2×108/mL，台盼蓝染色测细胞存活率＞95%，置4℃冰箱保存待接种。

1.3 动物分组及造模

将实验动物随机分为2组(每组10只)，即肿瘤对照组、Sch B给药组，所有大鼠于右股皮下接种100 μL含2×106个细胞的细胞悬液，术后每日观察动物情况。术后第3天，所有动物2 mL灌胃给药，给药组Sch B 200 mg/kg，对照组等量生理盐水灌胃，连续处理 7 d［4］。

1.4 Wistar大鼠体重的变化

测量每只大鼠在造模前、用药前和用药后的体重，计算各个阶段两组大鼠体重的平均值。

1.5 测算肿瘤重量和体积抑瘤率

给药后的第7天处死大鼠，取出完整的肿瘤组织，检测肿瘤的重量及大小，计算肿瘤抑制率。肿瘤抑制率=(对照组肿瘤平均体积-实验组肿瘤平均体积)/对照组肿瘤平均体积×100%。测量肿瘤的长径和短径，计算肿瘤的体积。肿瘤体积=短径2×长径/2，求体积的平均值［5］。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 大鼠的状态观察

造模前，20只大鼠均活跃，进食正常，肌肉强而有力，毛色有光泽且柔顺;造模后的第2天，两组大鼠均出现进食量减少的现象，行动也变得迟缓，大多数大鼠肌肉松弛并且较造模前消瘦，且出现了脱毛;接种后的第3天，大鼠均出现明显的肿瘤;给药3 d后，对照组大鼠依然有多数消瘦，脱毛现象仍然存在且加重，对照组中有1～2只大鼠出现了颤抖现象;Sch B组大部分进食量恢复了正常，脱毛现象明显减轻，肌肉强度也稍稍恢复。

2.2 Sch B对Wistar大鼠胶质瘤模型体重的影响

接种C6脑胶质瘤细胞后，对照组和Sch B组大鼠体重较造模前均有增加;给药后，对照组与Sch B组大鼠体重较造模前体重明显降低，而Sch B组与造模前体重相比，略有升高，但没有明显统计学意义(P＞0.05)(见表1)。

2.3 Sch B对脑肿瘤生长的抑制作用

在连续给药7 d后，处死大鼠，取出大鼠右后股皮下的肿瘤，称量肿瘤的重量和测量其长径、短径。并用上述公式计算肿瘤体积和抑瘤率。对照组和Sch B组的肿瘤质量、体积和体积抑瘤率见表2。两组肿瘤对比结果:200 mg/kg Sch B组大鼠的肿瘤体积明显小于对照组的肿瘤体积，其体积抑瘤率为66.33%，并且对照组肿瘤的重量也大于200 mg/kg Sch B组的肿瘤重量(见表2)。

表1 Sch B对胶质瘤模型大鼠体重的影响(s，n=10，g)

表1 Sch B对胶质瘤模型大鼠体重的影响(s，n=10，g)

组 别 造模前 用药前 用药后对照组218±12 231±19 209±26乙素组223±9 243±8 225±10

表2 不同条件下小鼠瘤体体积及抑瘤率(s，n=10)

表2 不同条件下小鼠瘤体体积及抑瘤率(s，n=10)

*:与对照组比较，P＜0.05

组 别 肿瘤体积(mm3)肿瘤重量(g)抑瘤率(%)对照组66.33 140±75 0.15±0.06 -乙素组 47±45* 0.12±0.10*

3 讨论

Sch B对肿瘤具有多种作用，它可以通过诱导肿瘤细胞分化及凋亡、逆转肿瘤细胞多耐药性、增加其他抗肿瘤药物的敏感性、抑制肿瘤血管生成等机制来抑制肿瘤的生长及转移［1］。研究表明，Sch B可以促进多柔比星诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡作用，且没有明显的细胞毒性作用［6］。一些体外实验表明，Sch B具有一定的肿瘤抑制作用［7-9］。但对于Sch B对于脑胶质瘤的作用还有待研究。

本课题组建立了Wistar大鼠脑胶质瘤模型，将大鼠分为对照组和给药组，给药组用Sch B处理后发现，给药组大鼠肿瘤症状和体征明显减轻，并且体重减轻程度也降低;同时发现，Sch B可明显抑制体内脑胶质瘤的生长，抑瘤率可达到66.33%。此前实验从体外初步证实了，脑胶质瘤细胞株SHG-44经Sch B处理后，可明显抑制胶质瘤细胞的生长。由此可以看出，Sch B作为五味子的主要成分，具有明显的抗肿瘤作用;尤其是在动物体内，Sch B具有明显的抑制肿瘤生长作用，且可明显改善肿瘤发生后所引起的症状和体征。因此，Sch B可以作为新药进行开发，但其抑制肿瘤生长的作用机制还需要继续研究。

［1］吴海星，侯晓节，徐希妮，等.五味子乙素抗肿瘤的多种作用机制［J］.吉林医药学院学报，2012，33(2):107-110.

［2］郑占虎，董泽宏，佘 靖.中药现代研究与临床应用:第一卷［M］.北京:学苑出版社，1997:148-156.

［3］金 宏，温 娜，纪鹏艳，等.不同浓度五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的影响［J］.中国实验诊断学，2011，15(12):2026-2027.

［4］王晓刚，魏学忠，周定标.Wistar大鼠C6胶质瘤动物模型的肿瘤生长特点［J］.军医进修学院学报，2001，22(4):300-302.

［5］金岳雷，范晓艳，吕冬霞，等.五味子乙素对H22荷瘤小鼠抑制作用的病理学研究［J］.黑龙江医药科学，2008，31(5):7-8.

［6］顾 颖，李 凌.五味子乙素促进多柔比星诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡的研究［J］.实用肿瘤杂志，2006，23(5):412-461.

［7］吕冬霞，崔 健，刘月霞，等.五味子乙素联合顺铂诱导H22肝癌移植瘤细胞凋亡过程中caspase-3，8，9表达的研究［J］.中国老年学杂志，2009，29(2):416-418.

［8］Pan Q R，Wang T，Lu Q H，et al.Schisandrin B—a novel inhibitor of P-glucoprotein［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，335(2):406-411.

［9］李 玲，胡 汛，潘锵荣，等.五味子乙素对MRP介导的肿瘤多药耐药逆转作用的研究［J］.同济大学学报:医学版，2006，27(6):19-23.