复方穿蛭透皮贴醇提工艺研究

王丽娜，王冬梅，宋红敏，齐佳悦，王新成 (吉林医药学院，吉林吉林 132013)

骨质增生症是中老年的常见病、多发病，中医药在治疗骨质增生症方面独具优势。复方穿蛭透皮贴是在传统中医验方的基础上，采用现代制剂技术研制开发的新型透皮给药制剂，该方主要由阿魏、甲珠、水蛭、三七、乳香、没药、徐长卿等十余味中药材组成，临床用于骨质增生的治疗具有良好的效果。本研究采用乙醇提取处方中药材有效成分，通过正交试验考察了不同提取条件对主要有效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的影响，优选出适合本制剂的最佳提取工艺，为该制剂的进一步研究提供实验基础。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪;LC-20AT泵;LC-solution色谱工作站。FA1104N电子分析天平;EYELA OSB-2000旋转蒸发仪(日本);SHZ-D(Ⅲ)循环水真空泵;KQ-250DE型数控超声波清洗器。

三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品均由中国药品生物制品检定所提供，批号依次为:110745-200516、110703-200424、110704-200318。

2 方法与结果

2.1 因素水平设计

根据工艺要求，确定乙醇浓度、乙醇倍量、提取时间、提取次数作为考察因素，每个因素选择3个水平，用L9(34)正交表安排试验见表1。以浸出物得率，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1三种皂苷总含量为评价指标，采用综合评分法进行数据分析，各指标权重系数依次为0.3、0.7。综合评分值等于每项评价指标评分之和，其中每项评价指标评分的计算方法以浸出物得率为例:浸出物得率评分=浸出物得率/最大浸出物得率×权重系数(0.3)×100。

2.2 样品中皂苷含量测定

2.2.1色谱条件

色谱柱:导津 C18-ODS柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，洗脱时间分别为0、15、40 min，乙腈比率分别为 19%、19%、35%;流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm;柱温:35 ℃［1-4］。

表1 醇提工艺因素水平表

2.2.2标准曲线的制备

精密称取三七皂苷R1对照品3.4 mg、人参皂苷Rg1对照品8.3 mg、人参皂苷Rb1对照品8.0 mg，用甲醇溶解于10 mL量瓶中，并定容至刻度作为对照品溶液，其中三七皂苷R1浓度为0.34 mg/mL，人参皂苷Rg1浓度为0.83 mg/mL，人参皂苷 Rb1浓度为0.80 mg/mL。精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10 μL分别注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线。三七皂苷R1的回归方程分别为Y=291 717X+62 432(r=0.999 8)，线性范围0.68～3.40 μg;人参皂苷Rg1的回归方程分别为Y=545 996X-26 701(r=0.999 9)，线性范围1.66～8.30 μg;人参皂苷 Rb1的回归方程分别为Y=374 464X+59 304(r=0.999 9)，线性范围1.60 ～8.00 μg。

2.2.3供试品溶液的制备

按正交试验提取各药材，浓缩定容至100 mL量瓶中。精密量取浓缩液1 mL，加水10 mL稀释，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，柱高10 cm)，用水100 mL洗脱，弃去洗脱液，再用0.1%氢氧化钠溶液80 mL洗脱，弃去洗脱液，用水100 mL洗至中性，最后以70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次(30 mL，30 mL，20 mL)，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，定容，即得。

2.2.4样品的含量测定

将9份样品按上述方法处理，采用高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，并计算三种皂苷总含量。结果见表2，方差分析见表3。

2.3 结果分析

根据以上试验结果和方差分析可知，4因素中乙醇浓度对试验具有显著性影响，4因素对结果的影响顺序为A＞C＞B＞D，即乙醇浓度＞提取时间＞乙醇倍量＞提取次数。根据各因素均值比较结果，兼顾工艺生产节约能源的要求，确定以A2B2C2D2为最佳提取工艺，即70%乙醇，8倍量，提取2次，每次1.5 h。

2.4 验证试验

称取处方量药材，按确立的最佳提取条件提取、干燥，计算浸出物得率，测定指标性成分含量，结果见表4。试验结果表明，指标性成分处于较高水平，表明工艺优选设计合理、稳定、可行。

表2 醇提工艺正交试验结果

表3 醇提工艺方差分析

表4 验证试验结果

3 讨论

中药复方中化学成分复杂，因此其工艺制剂研究应以多指标控制和评价，这样才更具全面性和科学性。复方穿蛭透皮贴是由阿魏、乳香、三七、徐长卿等多味药材组成的复方制剂，因此本研究以浸出物得率，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1三种皂苷总含量为评价指标，采用综合评分法优选提取工艺。根据两指标成分在控制制剂质量中的影响作用大小，设定其权重依次为0.3、0.7，这样经过方差分析优选出的工艺条件更加合理。

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