结肠癌组织中AQP1表达与临床病理特征的关系及预后意义

石晓明 吴胜春 杨永宾 唐雷 王跃欣 吕柏楠

结肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤，近年来发病率一直处于上升趋势。但由于结肠癌早期临床表现不典型，就诊时多已处于进展期，治疗效果及预后都不理想。如能发现与结肠癌发生进展关系密切的基因，则有可能作为肿瘤标志物、预后因子，还有可能作为新的结肠癌生物治疗靶点。关于结肠癌新基因的研究目前已成为热点，但迄今尚未取得突破性进展。新近研究发现，水通道蛋白家族(AQPs)的多个成员与许多恶性肿瘤关系密切［1-3］，已引起学者们的关注。其中水通道蛋白1(AQP1)在结肠癌等疾病中表达增高［4，5］，但有关 AQP1在结肠癌中具体临床意义的研究尚不多见。故本研究检测了AQP1蛋白在结肠癌组织中的表达，进一步对AQP1与结肠癌临床病理特征及肿瘤预后的关系进行了分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2007年9月至2010年10月在我院普外科住院手术并术后病理确诊的结肠原发癌石蜡标本54例，并取其中40例的癌旁组织标本。所有患者的临床病理资料均记录完整，术后均以月为单位进行随访。患者中男40例，女14例;年龄38～74岁，中位年龄58岁。兔抗人AQP1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，免疫组化试剂盒为福建迈新生物技术公司产品。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色：石蜡标本连续4μm切片，脱蜡水化后3%过氧化氢孵育，蒸馏水冲净后以PBS浸泡进行抗原修复。严格按免疫组化试剂盒要求进行操作：工作液封闭、加入一抗、孵育并冲洗后依次加二抗工作液、辣根酶标记链酶卵白素工作液。DAB显色，苏木素复染后进行脱水，最后中性树脂封片，分别进行HE和免疫组化染色。

1.2.2 结果判断：免疫组化结果由2名病理专业医师进行双盲阅片。每张切片随机取5个高倍视野(×400)，每个视野均随机计数100个细胞，计算阳性率。AQP1以黄色或棕黄色颗粒出现在细胞膜和细胞浆内为结果阳性。AQP1阳性记分标准：细胞内无阳性表达为(-)，＜50%细胞阳性表达为(+)，≥50%细胞阳性表达为(++)。

1.3 统计学分析 应用SAS8.0统计软件，采用χ2检验、Kaplan-Meier生存分析检验等方法对实验数据进行处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠癌与癌旁组织AQP1表达比较 结肠癌组织中AQP1表达阳性率为75.93%(41/54)，而癌旁组织AQP1阳性率为22.50%(9/40)。AQP1在结肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(χ2=26.34，P ＜0.05)。

2.2 AQP1表达与结肠癌临床病理特征之间的关系 结果显示，AQP1表达与结肠癌的浸润深度、脉管瘤栓、淋巴结转移情况有关(P＜0.05)，AQP1阳性表达的患者肿瘤浸润深度更深、脉管瘤栓和淋巴结转移的阳性率更高;而AQP1表达与结肠癌患者的性别、年龄、肿瘤长径、肿瘤部位、分化程度、临床分期、是否远处转移等特征无关(P＞0.05)。见表1。

2.3 AQP1表达与胃癌患者预后关系 54例患者中有47例得到随访数据，失访率12.96%。对47例患者进行Kaplan-Meier生存分析检验，AQP1阳性患者的平均生存期为(16±8)月，阴性患者平均生存期为(28±15)月，2组比较差异有统计学意义(χ2=4.738，P=0.030)。见图 1。

3 讨论

结肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤，随着生活水平的不断提高，近年来该病的发生率在国内外均处于上升趋势，严重威胁人民健康。由于结肠癌起病比较隐匿、早期无明显特异症状，患者就诊时经常已处于进展期，甚至已无手术机会，预后很差。因此，确定影响结肠癌的基因并将这些基因作为肿瘤标志物、预后判断因子及生物治疗的靶标已成为当前结肠癌研究的趋势。水通道蛋白1(AQP1)即为目前受到关注的基因之一。迄今AQPs家族已发现13个家族成员(AQP0-AQP12)，可转运水分子、甘油及其他小分子物质。AQP1为水通道蛋白家族的成员之一，基因定位于染色体7p14，蛋白质分子量为28kD，以四聚体形式存在于细胞膜上［6］。国内外研究均有报告认为AQP1可促进肿瘤新生血管的形成，可以促进肿瘤的侵袭、转移，在宫颈癌、结直肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤中均存在高表达［2，4，5，7］。且体外实验表明，抑制其表达可有效逆转肿瘤细胞的侵袭转移能力［7，8］。说明AQP1与肿瘤发生进展关系密切。

表1 结肠癌AQP1表达与临床病理特征的关系例

图1 AQP1表达与结肠癌患者预后关系的Kaplan-Meier生存分析结果

另有研究表明AQP1与胆道肿瘤、胸膜恶性间皮瘤、肾癌等恶性肿瘤的预后有关［9-11］，而关于AQP1与结肠癌临床病理特征及预后关系的报道尚不多见。

本研究结果发现，AQP1在结肠癌组织中表达明显高于癌旁组织，提示AQP1表达与肿瘤发生、进展有关，与其他研究结果类似［2-5］。AQP1与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及脉管瘤栓情况有关，AQP1表达阳性的结肠癌患者肿瘤浸润较深、淋巴结转移率较高、脉管瘤栓情况也更为严重，说明AQP1与结肠癌的侵袭转移行为有关，与国内孔斌等［12］研究的结果相似。但AQP1促进结肠癌侵袭转移的机制还不明确，有待进一步深入研究。本研究进行的预后分析显示，AQP1表达阳性的患者生存期较阴性者短，预后较差。这些结果说明AQP1与结肠癌进展、转移有密切关系，并可作为预后指标。但本研究样本量不大、随访时间也较短，还有待进一步扩大研究规模、延长随访时间，对AQP1在结肠癌中的确切作用予以证实。

本研究发现AQP1与结肠癌的临床病理特征有关，且对结肠癌预后有较好的预测作用。但本研究样本量较小，且仅对一些临床指标进行了分析，具体机制并不明确。因此，进一步研究扩大样本例数、延长随访时间，并对AQP1进行功能和机制研究，对阐明AQP1在结肠癌中的具体作用、促进结肠癌诊治水平进步具有重要意义。

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11 Huang Y，Murakami T，Sano F，et al.Expression of aquaporin 1 in primary renal tumors：a prognostic indicator for clear-cell renal cell carcinoma.Eur Urol，2009，56：690-698.

12 孔斌，吴小华，李勇.水通道蛋白抑制剂乙酰唑胺抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长的实验性研究.中国现代医学杂志，2010，20：1466-1470.