三子散中川楝子的鉴别及栀子苷的含量测定

刘素梅，方忠意，韩 立，班付国，张跃京，臧合英

(河南省兽药监察所，郑州 450008)

三子散为《中国兽药典》2010版二部收载的一个兽药品种［1］，主要含有诃子、川楝子和栀子等药材，具有清热解毒的功能，主要用于三焦热盛，疮黄肿毒，脏腑实热的治疗。该品种项下有显微鉴别及诃子和栀子的薄层色谱鉴别，可以对方中各药进行有效鉴别，但没有含量测定项，仍不能很好的控制药品的质量。通过高效液相色谱法测定栀子苷的含量，以及增加方中川楝子的薄层色谱鉴别，可以为药品质量评价提供科学依据。

1 实验仪器与试药

1．1 仪器 高效液相色谱仪(Waters e2695，2489紫外检测器)、电子天平(METTLER XP250)、超纯水处理器(MILLIPORE MILLI－Q)等。

1．2 试药与试剂 栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为110749－200511;没食子酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为110831－200302;川楝子对照药材由中国药品生物制品检定所提供，批号为121464－200506;供试品按处方制备。

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 川楝子的薄层色谱鉴别 取三子散供试品6 g，加水80 mL，超声处理1 h，放冷，离心，取上清液，用二氯甲烷振摇提取3次，每次25 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷－甲醇(16∶1)为展开剂［1］，展开，取出，晾干，喷以二甲氨基苯甲醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

按处方配比称取除川楝子外其它药材，按制备工艺制备样品，作为川楝子阴性对照样品，阴性对照样品同法操作，在与药材色谱相应的位置上不显斑点，阴性无干扰，结果见图1。

图1 川楝子薄层鉴别图谱

2．2 栀子苷的含量测定

2．2．1 色谱条件 色谱柱为 XBridge C18(5μm，4．6mm ×150mm)柱;流动相为乙腈 － 水(88 ∶12);检测波长为238 nm。

2．2．2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品15 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，制成每1 mL含300μg的溶液;精密量取5 mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含30μg的溶液，过0．45μm微孔滤膜，即得。

2．2．3 供试品溶液的制备 取本品0．3 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，精密称定，超声处理30 min，放至室温，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。用微孔滤膜(0．45μm)滤过，即得。

2．2．4 线性范围 取栀子苷对照品溶液(300 μg/mL)，用甲醇分别稀释成10、15、30、50、150、300 μg/mL的系列对照品溶液，按照浓度由低到高，精密吸取上述溶液各10μL，进高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值与相对应的对照品溶液浓度计算回归，得标准曲线方程为y=33146x+4089，相关系数 r=0．99997，即在10～300μg/mL范围内，栀子苷峰面积与浓度有良好的线性关系，结果见图2。

图2 栀子苷标准曲线图

2．2．5 重复性试验 取同一批样品按照供试品溶液的制备方法同时制备6份，精密吸取上述溶液各10μL，进高效液相色谱仪进行分析，计算栀子苷含量及其RSD。结果显示(表1)，该方法具有很好的重复性。

表1 重复性试验结果

2．2．6 回收率试验 取精密度项下已知含量的样品0．15 g，分别加入与样品所含栀子苷量相当的对照品，按照供试品溶液的制备方法处理，共制备6份，精密吸取上述溶液各10μL，进高效液相色谱仪进行分析，计算栀子苷含量，以下列公式计算回收率，结果见表2。

回收率=(实测值－供试品所含被测成分量)/对照品加入量×100%。

表2 栀子苷回收率试验结果

2．2．7 专属性试验 按处方配比称取缺栀子外其它药材并按制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品按照供试品溶液的制备方法处理，精密吸取10μL进高效液相色谱仪进行分析，结果阴性无干扰，液相色谱图分别见图3～图5。

3 讨论

3．1 川楝子薄层鉴别参考《中国兽药典》2010版二部川楝子项下薄层鉴别方法［1］，用川楝子对照药材做对照，显色后色谱斑点有些模糊;在紫外灯(365 nm)下，供试品和对照药材斑点比较多，均有一黄色斑点比较清晰，且和其他斑点分离较好，若能以该化合物做对照效果会更好，该物是否为川楝素，有待进一步研究。

3．2 栀子苷含量测定时的流动相参考了《中国兽药典》2010版二部栀子项下含量测定方法，并根据仪器和色谱柱对流动相比例进行了适当调整。

3．3 在试验过程中还对诃子的薄层色谱法进行了研究［3］，采用没食子酸对照品作对照，结果供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性无干扰，但显色剂三氯化铁－铁氰化钾(1∶1)溶液会对硅胶造成一定的污染，使薄层板显呈现不均匀的黄绿色。

3．4 栀子苷为栀子的特征性有效成分，故选择栀子苷作为控制本品质量的指标成分。

［1］ 中国兽药典委员会．中国兽药典2010年版二部［S］．

［2］ 李 丽，孟克巴牙尔，张久红，等．蒙成药三子散质量控制方法概述［J］．中国民族医药杂志，2007，(4):60 －61．

［3］ 邬卫东，温爱平，王烈群．薄层扫描法测定三子散中没食子酸的含量［J］．中国民族医药杂志，2003，(2):34 －35．