高效液相色谱法测定半夏泻心口服液中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量

王 敏，王逢春，郭 琪

半夏泻心口服液源于《伤寒论》中的处方半夏泻心汤，是由半夏、黄芩、黄连、干姜、人参等多味中药制成的一种复方制剂，具有寒热平调，消痞散结的功效，常用于心下痞满、呕吐、肠鸣下利等中气虚弱、寒热互结者。制剂中的黄芩与黄连都具有清热解毒的功效，与该制剂的疗效有密切关系［1］。因此采用高效液相色谱法同时测定黄芩与黄连中的主要成分黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，对于保证制剂发挥临床疗效及控制其质量具有一定的参考价值。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪(包括四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站);Mettler AE240电子天平(梅特勒公司)。

1.2 试药 黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110715-200815)，盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110713-200609);半夏泻心口服液(自制，批号:20121026，20121027，20121028)，药材购自北京同仁堂药店;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4．6 mm × 150 mm，5 μm);流动相为甲醇:20 mM醋酸铵溶液(38:62);流速为1．0 ml/min;检测波长为280 nm(0～8 min)，345 nm(8～12min);进样量:10 μl;柱温为室温。

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称定黄芩苷对照品16．08 mg和盐酸小檗碱对照品11．62 mg，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。再分别精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成每毫升含黄芩苷对照品32．16 μg和盐酸小檗碱23．24 μg的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0．22 μm 滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 依照处方比例，按生产工艺分别制备缺黄连、黄芩的阴性样品，按2．3项下供试品溶液的制备方法，制得阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液按2．1项下色谱条件，分别进样。结果显示，供试品溶液中色谱峰与其他色谱峰能达到基线分离，且保留时间与对照品溶液一致，阴性对照溶液在相同保留时间处无色谱峰，表明其他组方药材对黄芩苷及盐酸小檗碱的测定无干扰，见图1。

2.6 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液1、2、5、10、15、20 μl，按 2．1 项下色谱条件分别进样，测定峰面积。以混合对照品的进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程分别为黄芩苷 Y=2011．7X －2．5235(r=0．9999，n=6);盐酸小檗碱 Y=192．45X+0．4498(r=0．9998，n=6)。结果表明，黄芩苷和盐酸小檗碱分别在 0．03216～0．64320 μg 和 0．02324～0．46480 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 取混合对照品溶液，按2．1项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积。结果黄芩苷和盐酸小檗碱的相对标准差(RSD)分别为0．36%和0．85%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.8 稳定性试验 取批号为20121026的样品，按2．3项下方法制备供试品溶液6份，按2．1项下色谱条件，分别在0、2、4、8、10、12 h 各进样 1 次，测定峰面积。结果黄芩苷和盐酸小檗碱RSD分别为2．12%和1．95%(n=6)，表明样品溶液在 24 h 内稳定。

2.9 重复性试验 取批号为20121026的样品，按2．3项下方法制备供试品溶液6份，按2．1项下色谱条件，分别进样测定。结果黄芩苷和盐酸小檗碱的平均含量分别为 293．5 μg/ml和 149．2 μg/ml，RSD 分别为2．01%和 1．35%(n=6)，表明方法的重复性良好。

图1 对照品及半夏泻心口服液样品高效液相色谱图

2.10 加样回收率试验 精密量取黄芩苷和盐酸小檗碱已知含量分别为 293．5 μg/ml和 149．2 μg/ml(批号20121026)6份，分别精密加入1．608 mg/ml黄芩苷对照品溶液 0．1 ml，1．162 μg/ml盐酸小檗碱对照品溶液0．07 ml，按2．3项下方法制备供试品溶液，按2．1项下色谱条件，10 μl进样测定黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 黄芩苷和盐酸小檗碱的加样回收率试验结果

2.11 样品含量测定 取批号为20121026、20121027、20121028的样品，按 2．3项下方法制备供试品溶液，按2．1项下色谱条件，分别进样测定。结果样品中黄芩苷的含量分别为 293．5、269．2、254．7 μg/ml，RSD 分别为 2．01%、1．52%、2．64%(n=3);盐酸小檗碱的含量分别为 149．2、155．9、137．8 μg/ml，RSD 分别为 1．35%、1．85%、1．68%(n=3)。

3 讨论

复方中药制剂发挥药效主要是各味药中多种组分共同作用的结果，因此其含量的多少及之间的比例关系都会影响到制剂的质量。因此在评价、控制复方中药制剂质量时，多种指标成分同时测定比单一指标成分测定更科学，更能很好地体现药品的质量。本实验建立同时测定复方制剂中2种药材的主要成分，能在一定程度反映出制剂的整体质量。方法简便，准确度高，可用于半夏泻心口服液的质量控制。

目前，文献中已报道的同时测定黄芩苷和盐酸小檗碱的方法，均选用单一波长进行检测［2-10］。但本实验发现单一波长无法满足半夏泻心口服液中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的系统性要求。而采用波长切换的方法，分别在其最大吸收波长处测定黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，具有较高的灵敏度，能够保证测定结果的准确性。同时得到的色谱峰型和出峰时间均较理想，能够达到半夏泻心口服液质量控制的要求。

［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)［S］．北京:化学工业出版社，2010:282，285．

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［3］ 李艳荣，蒋晔，郝福，等．RP-HPLC同时测定功劳去火片中栀子苷、黄芩苷及盐酸小檗碱的含量［J］．中成药，2006，28(8):1126-1129．

［4］ 李文霞，宋平顺．HPLC法同时测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量［J］．药学进展，2011，35(4):178-181．

［5］ 吴阳，郭伟英．HPLC法同时测定黄连羊肝丸中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量［J］．中国药房，2010，21(36):3442-3444．

［6］ 金良，李亚男，张秋燕，等．连梅饮中黄芩苷和小檗碱的含量测定［J］．中国现代医药杂志，2009，11(12):32-34．

［7］ 黄燕萍．HPLC测定炎可宁片中盐酸小檗碱、黄芩苷和汉黄芩素的含量［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(20):97-99．

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