HPLC测定舒筋通络颗粒中葛根素含量

赵志强，陈光辉，张久胜

(神威药业有限公司，河北 石家庄 051430)

HPLC测定舒筋通络颗粒中葛根素含量

赵志强*，陈光辉，张久胜

(神威药业有限公司，河北 石家庄 051430)

目的：建立舒筋通络颗粒中葛根素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为DIONEX C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈 -水(11∶89)，流速为1.0mL·min-1，测定波长为250nm。结果：葛根素浓度在0.072～2.166μg的范围内线性关系良好(r＝0.999 9)；平均回收率为99.1％，RSD＝1.0％。结论：建立的HPLC法简便、灵敏、准确，可用于舒筋通络颗粒的质量控制。

HPLC；舒筋通络颗粒；葛根素

舒筋通络颗粒是由中国中医科学院西苑医院和神威药业有限公司共同研制开发的中药新药，由牛膝、骨碎补、川芎、天麻、葛根等9味中药组成，具有补肝益肾、活血舒筋功效，主要用于治疗颈椎病之肝肾阴虚、气滞血瘀证，症见头晕、头痛、胀痛或刺痛，耳聋、耳鸣，颈项僵直，颈、肩、背疼痛，肢体麻木，倦怠乏力，腰膝酸软，口唇色暗，舌质暗红或有瘀斑[1-2]。现代药理学研究表明，方中葛根的主要成分具有扩张血管，改善心脑血管循环，降低心肌耗氧量，保护脑神经等多种药理作用[3-4]。在原舒筋通络颗粒药品标准中，暂无葛根素含量测定项，为有效控制产品质量，本实验研究建立了HPLC检测葛根素的含量测定方法，以期此法为舒筋通络颗粒的质量控制和质量标准提高提供依据。

1 仪器与试药

DIONEX Ultimate3000高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自动进样器，Ultimate 3000二极管阵列检测器，变色龙色谱工作站)，Sartorius CPA225D电子分析天平，KQ-300DA型数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)。

葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110752-200912，纯度：96.0％)；舒筋通络颗粒(神威药业有限公司，规格为12g/袋，批号：11041501， 11042501， 11061501， 11092101，11092201， 11092301， 11092401， 11092501，11092801，11100701，11100601)；乙腈为色谱纯；乙醇为分析纯，纯化水自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DIONEX C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈 -水(11∶89)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：250nm；进样量：10μL。

2.2 溶液制备

取本品细粉约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33 kHz)20min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取葛根素对照品适量，用30％的乙醇制成每1mL约含40μg的溶液作为对照品溶液。取处方中缺葛根的其他药味，按制法制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 系统适用性试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液及空白溶剂30％乙醇10μL进样，记录色谱图，见图1。结果表明，供试品色谱中，在与对照品相应位置上有色谱峰，主峰与其他成分分离良好，理论塔板数按葛根素计算为10 229，阴性对照品及空白对照品对葛根素峰无干扰。

2.4 线性关系考察

精密称取葛根素对照品0.018 80g(纯度96.0％)，置50mL容量瓶中，加入30％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取该储备液0.2，0.5，1.0，2，4，6mL，分别置10mL容量瓶中，用30％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，分别进样10μL，记录峰面积。以葛根素的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝53.481 1X＋0.034 50，r＝0.999 9。说明葛根素在0.072～2.16 6μg线性关系良好。

图1 舒筋通络颗粒、对照品及空白溶液HPLC图

2.5 精密度试验

精密吸取36.096μg·mL-1的葛根素对照溶液10μL，重复进样6次，记录峰面积，测得RSD＝0.17％，说明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品(批号为1104151)，依法制备供试品溶液并测定含量。结果RSD＝0.69％，表明方法重复性良好。

2.7 回收率试验

称取舒筋通络颗粒细粉约0.15g(含量8.575 9mg·g-1)，精密称定，平行做9份，分别精密加入葛根素对照品溶液(0.360 96mg·mL-1)2.8，2.8，2.8，3.5，3.5，3.5，4.2，4.2，4.2mL，然后按上述方法制备供试品溶液，并测定其含量，计算回收率，结果见表1。

表1 舒筋通络颗粒中葛根素加样回收试验(n＝9)

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，10，24h进样10μL，记录峰面积。计算RSD＝0.21％，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.9 样品含量测定

取本品10批，依法测定，计算样品中葛根素含量，测定结果见表2。依据10批样品的测定结果，可拟定葛根素的含量限度为6.0mg·g-1。

表2 舒筋通络颗粒中葛根素含量测定结果

3 讨论

参照《中国药典》2010版一部中葛根项下葛根素含量测定方法，并结合DAD紫外扫描结果，确定检测波长为250nm；经试验考察确定了流动相比例和超声提取方法[5]。

上述方法学实验结果表明，采用HPLC法测定舒筋通络颗粒中葛根素的含量，处理方法简单，测定结果重现性好、精密度高，该法可用于舒筋通络颗粒中葛根素的定量分析。

[1]卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层鉴别[J].中国药业，2010，19(6)：26.

[2]雒晓东，梁德，刘金文，等.舒筋通络颗粒治疗神经根型和椎动脉型颈椎病2期临床研究[J].中国中医骨伤科杂志，2006，14(4)：48-50.

[3]钟宝恒.葛根素药理研究现状[J].中国民族民间医药，2009，(5)：16-18.

[4]赵莹莲.葛根素的药理作用及临床应用进展[J].安徽医药，2010，14(12)：1377-1379.

[5]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：313.

“十二五”期间完成300项中医药标准制修订

国家中医药管理局日前发布《中医药标准化中长期发展规划纲要(2011年～2020年)》。按照《规划纲要》确立的“十二五”时期的具体目标，中医药行业标准水平将有巨大提升，行业规范建设将驶上快车道。

据介绍，目前，中医药标准化工作还面临不少挑战，包括行业内对中医药标准化重视不够，中医药标准化工作基础还很薄弱，中医药标准实施推广不够，中医药标准化专业人才缺乏等。

《规划纲要》提出，到2020年，要基本建立适应事业发展需要、结构比较合理的中医药标准体系，中医药标准化支撑体系进一步完善，基本满足中医药标准化工作的需求；中医药标准应用推广和监测评价体系初步建立；中医药标准化人才队伍建设明显加强；中医药标准化管理体制和运行机制更加完善，我国实质性参与中医药国际标准化活动的能力显著提升。“十二五”期间的目标包括：完成300项中医药标准制修订，基本覆盖医、教、研、药等领域。中医药标准质量水平明显提高，90％以上的中医药标准标龄低于5年，国家标准、行业标准、行业组织标准之间的协调性明显提高。在基层建设一批中医药标准研究推广基地，中医药标准研究制定、应用推广与评价反馈机制基本形成。实质性参与国际标准化活动的能力明显提升。

(信息来源：中国医药报)

Determ ination of Puerarin in Shujintongluo Granules by HPLC

ZHAO Zhi-qiang，CHEN Guang-hui，ZHANG Jiu-sheng
(Shineway Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051430，China)

Objective：To establish amethod for detection of puerarin in Shujintongluo granules.M ethods：HPLC is the determination of puerarin in Shujintongluo granules.Chromatographic column is DIONEX C18column(250mm×4.6mm，5μm).The mobile phase is Acetonitrile-waters(11∶89).The flow rate is 1.0mL·min-1.The wavelength is 250nm.Results：The linear range of Puerarin is 0.072～2.166μg(r＝0.999 9).The Average Recovery Rate is 99.1％(RSD＝1.0％).Conclusion：The method is simple，sensitive，and accurate.It can be used to the quality control of Shujintongluo Granules.

HPLC；Shujintongluo granules；Puerarin

2012-05-15)

*[通讯作者]赵志强，E-mail：zzq2000518＠163.com