不同产地蒲公英药材中总黄酮和咖啡酸含量分析与评价△

冯倩，穆丽，郑伟，苏瑞强,2，惠建国,2，赵志全,2

(1.鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276006；2.中药制药共性技术国家重点实验室，山东 临沂 276006；3.临沂市红十字会 中心血站，山东 临沂 276000)

不同产地蒲公英药材中总黄酮和咖啡酸含量分析与评价△

冯倩1,2*，穆丽3，郑伟1，苏瑞强1,2，惠建国1,2，赵志全1,2

(1.鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276006；
2.中药制药共性技术国家重点实验室，山东 临沂 276006；3.临沂市红十字会 中心血站，山东 临沂 276000)

目的：建立不同产地蒲公英药材综合质量评价方法。方法:采用紫外-可见分光光度法测定蒲公英总黄酮含量，采用HPLC测定其咖啡酸的含量。结果:不同产地蒲公英总黄酮和咖啡酸的含量均差异较大，总黄酮含量在28.63～51.79 mg·g-1，咖啡酸含量在0.007 6%～0.042 4%。结论:以总黄酮和咖啡酸作为质量评价指标，建立的方法简单、快捷、准确，结果表明山东临沂蒲公英的质量较好。

蒲公英；不同产地；总黄酮；咖啡酸

蒲公英为中医临床常用中药，为菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.Mazz、碱地蒲公英TaraxacumborealisinenseKitag.或同属数种植物的干燥全草。味苦、甘，性寒。归肝、胃经。具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋的功能，用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛[1]。我国药用蒲公英资源丰富但种类繁多，分布广泛[2]，质量参差不齐。据报道，蒲公英的主要活性成分是黄酮类、有机酸和甾醇类物质[3]。因此，实验以总黄酮和咖啡酸为指标，分别采用紫外-可见分光光度法和HPLC测定了14个产地蒲公英的总黄酮和咖啡酸含量，为评价蒲公英药材的质量提供依据和参考。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪；G1314A型紫外检测器；Agilent1100工作站；岛津UV-2401PC型紫外可见分光光度计；梅特勒AG285型电子分析天平；FA1004型电子分析天平；LD-400A型高速多功能摇摆粉碎机(浙江永康市红太阳机电有限公司)；数显恒温水浴锅(上海阳光实验仪器有限公司)；KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；KDM型控温电热套(鄄城华鲁电热器有限公司)。

蒲公英药材系作者到各地自行采购，产于安徽、河南、山西、山东、河北、甘肃、陕西、黑龙江等地(均为秋季采收)，经鲁南制药集团股份有限公司惠建国博士鉴定为碱地蒲公英TaraxacumborealisinenseKitag；咖啡酸、芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为：110885-200102，0080-9705)；纯化水、蒸馏水自制；甲醇为色谱级，其余所用试剂为AR级。

2 方法与结果

2.1 总黄酮含量测定

2.1.1 对照品溶液配制[4]精密称取120 ℃减压干燥恒重的芦丁对照品19.749 mg,置100 mL量瓶中，精密加乙醇70 mL使之溶解，加蒸馏水至刻度，摇匀即得(含芦丁0.197 49 mg·mL-1)。

2.1.2 芦丁吸收曲线 精密量取芦丁对照品溶液、供试品溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，依次加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；再加10%氢氧化钠溶液4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀。随行做空白对照，于200～800 nm波长范围内全波扫描，最大吸收波长为510 nm，因此选定510 nm作为检测波长。

2.1.3 标准曲线的制备 精密量取芦丁对照品溶液0.25,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0 mL，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，随行做空白对照，以芦丁浓度为横坐标(X)，以吸光度为纵坐标(Y)绘制标准曲线。其回归方程为Y=12.6X+0.016 7，r=0.999 6，线性范围0.005～0.059 mg·mL-1。

2.1.4 供试品溶液制备

2.1.4.1 提取溶剂的选择 精密称取安徽砀山样品7份，每份0.5 g，分别加50 mL水、甲醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇和无水乙醇，称定重量，水浴回流提取1 h，放冷，称重，用相应溶剂补足减失的重量，过滤，各吸取0.5 mL，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，计算总黄酮含量，分别为42.10，24.61，35.42，36.84，40.43，35.22，18.64 mg·mL-1，结果表明以水和70%乙醇为提取溶剂效果最好，但用水提取时药材粉末漂浮在水面且极易粘附在瓶壁上，影响提取率，而用70%乙醇提取时药材粉末沉在溶剂底部，避免了这种问题，故选择70%乙醇作为提取溶剂。

2.1.4.2提取方法的选择 精密称取安徽砀山样品2份，每份0.5 g，加50 mL 70%乙醇，分别采用回流和超声方式提取1 h，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，计算总黄酮含量分别为38.01，28.13 mg·mL-1，结果表明回流法提取率较高。

2.1.4.3 溶剂用量的选择 精密称取河南鹿邑样品3份，每份0.5 g，分别加25，50，100 mL 70%乙醇，回流提取1 h，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，计算总黄酮含量分别为34.88，36.84，39.19 mg·mL-1。结果表明用100 mL(200倍)溶剂提取率较高。

2.1.4.4 提取时间的选择 精密称取山东临沂样品0.5 g，加100 mL 70%乙醇，回流提取，于0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 h取样1 mL，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，计算总黄酮含量分别为39.63，41.29，41.57，41.84，41.29 mg·mL-1。结果表明，提取时间超过1 h时，总黄酮含量基本无变化，故选择提取时间为1 h。

通过上述试验，确定供试品溶液的制备方法为用200倍药材量的70%乙醇回流提取1 h。

2.1.5重复性试验 精密称取山东临沂样品5份，按2.1.4项制备供试液，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，计算总黄酮含量，结果RSD=0.57%，表明重复性良好。

2.1.6稳定性试验 精密称取山西太原样品0.25 g，按2.1.4项制备供试液，按2.1.2项于510 nm波长处在0，10，20，30，40，50 min时测定吸光度，结果RSD=0.44%，表明供试品溶液在50 min内稳定性良好。

2.1.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的河北安国样品0.1 g，5份，分别加入芦丁对照品(0.197 49 mg·mL-1)15 mL，按2.1.4项制备供试液，按2.1.2项于510 nm波长处测定吸光度，测定含量并计算，结果总黄酮的平均回收率为104.6%，RSD=1.8%，结果见表1。

表1 总黄酮加样回收率测定

注：芦丁对照品加入量均为2.962 4 mg

2.1.8 样品总黄酮含量的测定 精密量取芦丁对照品溶液、不同产地供试品溶液1.0 mL，测定吸光度，计算蒲公英中总黄酮含量。结果见表2。

表2 蒲公英中总黄酮含量测定

2.2 咖啡酸含量的测定[1]

2.2.1色谱条件 色谱柱：Diamomil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm，迪玛公司)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8～4.0，即得)(23∶77)；流速：1 mL·min-1；检测波长：323 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

2.2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取咖啡酸对照品9.72 mg，置 50 mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得 0.194 44 mg·mL-1对照品溶液。

2.2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，用5%甲酸的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。

2.2.3 咖啡酸含量测定 不同产地的蒲公英药材按供试品溶液制备项下处理后，在上述色谱条件下进样分析，用外标法计算蒲公英中咖啡酸的含量，结果见表3。

表3 蒲公英中咖啡酸含量测定 /%

3 讨论

蒲公英药效成分复杂，2010年版《中国药典》只收录了咖啡酸含量测定标准[1]。据报道，总黄酮具有显著的抑菌、抗病毒作用[5]，是蒲公英重要的药效成分，因此，作者建立了蒲公英中总黄酮的测定方法，经验证此法简单便捷，可行性好；同时对不同产地蒲公英的总黄酮和咖啡酸含量进行了测定，结果显示不同省份的药材含量有明显差异，安徽、山东、陕西蒲公英黄酮含量较高，安徽、山东、山西、黑龙江等地蒲公英咖啡酸含量较高；相同省份不同地区的药材，含量差异也较大；安徽亳州人工种植黄酮含量高于野生采收，但咖啡酸含量较低；山东临沂蒲公英黄酮含量和咖啡酸含量均较高。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：331.

[2] 孟志云，徐绥绪，沈建平.蒲公英的研究进展[J].人民军医药学专刊，1997,13(2):83-87.

[3] 路保通，张鸯，胡新安，等.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用[J].中国兽医杂志，2008，44(5)：45-46.

[4] 李喜凤，杜云锋，郝哲.蒲公英中总黄酮的含量测定[J].中华中医药学刊,2009,27(6):1219-1220.

[5] 王晓梅,曹稳根.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].宿州学院学报,2007,22(1):105-107.

DeterminationofTotalFlavonoidandCaffeicAcidinTaraxacumofficinalefromDifferentHabitats

FENG Qian1，2*，MU Li3，ZHENG Wei1，SU Rui-qiang1，2，HUI Jian-guo1，2，ZHAO Zhi-quan1，2

(1.LunanPharmaceuticalGroupCo.，Ltd.，Linyi276005，China；2.StateKeyLaboratoryofGenericManufactureTechnologyofChineseTraditionalMedicine，Linyi276006,China；3.LinyiRedCrossBloodCenter，Linyi276000,China)

Objective：To establish a comprehensive quality evaluation method forTaraxacumofficinalefrom different habitats.Methods：Using ultraviolet-visible spetrophotometry determine total flavonoid and using HPLC determine caffeic acid content.Results：The total flavonoid content is 28.63-51.79 mg·g-1and the caffeic acid content is 0.007 6%-0.042 4%，which are remarkably different in different habitats.Conclusion：Shandong linyi medicinal materials quality is better according to total flavonoid and caffeic acid content.The method is convenient，rapid and accurate，which will be helpful for quality assessment ofTaraxacumofficinale.

Taraxacum；Different habitats；Total flavonoid；Caffeic acid

2013-03-23)

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山东省科技发展计划项目(2011YD19015)

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冯倩，工程师，主要研究方向：中药新药研究与开发，Tel:(0539)8336639，E-mail：fengqian1981p@126.com