HPLC测定心悦胶囊中人参皂苷Rg1、Re及Rb3的含量

杨颖，王宏伟，于文静

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

HPLC测定心悦胶囊中人参皂苷Rg1、Re及Rb3的含量

杨颖*，王宏伟，于文静

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

目的：研究心悦胶囊中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb3的定量方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：Lun C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水梯度洗脱；检测波长为203 nm。结果：线性范围为人参皂苷Rg1在0.098 9～1.978 0μg(r=0.999 1，n=5)，人参皂苷Re在0.312 0～5.38 μg(r=0.999 2，n=5)，人参皂苷Rb3在0.448～8.96 μg(r=0.999 1，n=5)。平均加样回收率人参皂苷Rg1为97.1%，RSD=2.46%(n=6)，人参皂苷Re为97.5%，RSD=1.89%(n=6)，人参皂苷Rb3为100.0%，RSD=2.28%(n=6)。结论：本法简便、灵敏、准确，可用于心悦胶囊的质量控制。

人参皂苷Re；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb3；心悦胶囊；高效液相色谱

心悦胶囊是由西洋参茎叶总皂苷制成的单方制剂，具有益气养心，和血之功效。用于冠心病心绞痛属于气阴两虚证者。原标准仅建立了以人参皂苷Rb3为对照，采用高效液相色谱法进行含量测定，不能全面有效地控制该品种的内在质量，故被列为国家中药制剂质量标准提高行动计划品种。西洋参PanaxquinquefoliumL.是五加科人参属植物，为我国传统的名贵药材之一。西洋参茎叶属于其地上部位，现代研究证明，西洋参地上部位含有以人参皂苷为主的多种活性成分[1-2]，西洋参茎叶总皂苷即为西洋参茎叶提取物。作者在参考相关文献[3-6]的基础上，建立了以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb3为对照品，采用高效液相色谱法测定本制剂中西洋参茎叶总皂苷的含量，旨在全面、有效控制该产品的内在质量。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪。人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-201027)、人参皂苷Re对照品(批号：110754-200822)、人参皂苷Rb3对照品(批号：111686-200501)，中国食品药品检定研究院，供含量测定用；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。心悦胶囊(吉林省集安益盛药业股份有限公司，规格：0.3 g/粒，批号：100624，100717，100718，100819，100820，090510)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Lun C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1进行梯度洗脱；柱温35 ℃，检测波长为203 nm，进样量5 μL，理论板数按人参皂苷Re计算应不低于6 000。

表1 流动相梯度洗脱表

2.2 对照品溶液的制备

取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1对照品0.1 mg、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb3对照品各0.4 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物，研细，取约1.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。HPLC图见图1。

A.人参皂苷Rg1对照品 B.人参皂苷Re对照品 C.人参皂苷Rb3对照品 D.供试品 E.阴性对照品图1 心悦胶囊及对照品HPLC图

2.5 线性关系考察

分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-201027)浓度为0.102 7 mg·mL-1、人参皂苷Re对照品(批号：110754-200822)浓度为0.351 3 mg·mL-1、人参皂苷Rb3对照品(批号：111686-200501)浓度为0.448 mg·mL-1的溶液，分别注入液相色谱仪，按拟定色谱条件测定，以对照品的进样量(μg)为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。人参皂苷Rg1回归方程为：Y=319.51X+14.726，r=0.999 1，结果表明，人参皂苷Rg1在0.098 9～1.978 0 μg线性关系良好；人参皂苷Re回归方程为Y=308.56X+27.87，r=0.999 2，结果表明，人参皂苷Re在0.312 0～5.38 μg线性关系良好；人参皂苷Rb3回归方程为Y=249.41X+34.559，r=0.999 1，结果表明，人参皂苷Rb3在0.448～8.96 μg线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取上述供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积，人参皂苷Rg1平均值为250.00，RSD=2.51%；人参皂苷Re平均值为788.99，RSD=0.95%；人参皂苷Rb3平均值为1 101.81，RSD=1.16%。结果表明所用仪器具良好的精密性。

2.7重复性试验

取本品(批号：100624)，倾出内容物，混匀，按供试品溶液制备方法制备，独立配制6份供试品溶液进行测定，计算含量，人参皂苷Rg1的RSD=1.01%；人参皂苷Re的RSD=0.53%；人参皂苷Rb3的RSD=0.78%。结果表明本法重现性较好，精密度较高。

2.8 回收率试验

精密量取同法测定已知含量的供试品(批号：100624)6份，每份0.75 g，分别精密量取人参皂苷Rg1(批号：110703-201027)浓度为0.844 mg·mL-1的对照品溶液5 mL，加入样品中，按拟订标准的方法提取、测定，计算回收率，结果见表2。

表2 人参皂苷Rg1回收率试验

注：人参皂苷Rg1对照品加入量均为4.22 mg

精密量取同法测定已知含量的供试品(批号：100624)6份，每份0.75 g，分别精密量取人参皂苷Re对照品(批号：110754-200822)浓度为1.242 mg·mL-1的对照品溶液10 mL，加入样品中，按拟订标准的方法提取、测定，计算回收率，结果见表3。

精密量取同法测定已知含量的供试品(批号：100624)6份，每份0.75 g，分别精密量取、人参皂苷Rb3对照品(批号：111686-200501)浓度为21.78 mg·mL-1的对照品溶液10 mL，加入样品中，按拟订标准的方法提取、测定，计算回收率，结果见表4。

表3 人参皂苷Re回收率试验

注：人参皂苷Re对照品加入量均为12.42 mg

表4 人参皂苷Rb3回收率试验

注：人参皂苷Rb3对照品加入量均为21.78 mg

2.9 稳定性试验

对同一份供试品溶液(批号：100624)，按正文色谱条件，每隔8 h进样1次，每次进样10 μL，记录峰面积，计算人参皂苷Rg1的RSD=1.54%，人参皂苷Re的RSD=1.50%，人参皂苷Rb3的RSD=0.56%，结果表明48 h内供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb3含量基本稳定。

2.10 空白试验

为进一步考察实验设计的合理性，取不含西洋参茎叶总皂苷的阴性对照样品适量，按正文含量测定方法进行测定。结果阴性样品色谱中在与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb3峰相应的保留时间位置处无干扰峰检出(见图1)，从而证明本法是合理可行的。

2.11 样品含量测定

照上述方法测定6批样品，结果见表4。

表4 6批心悦胶囊样品中人参皂苷Rg1、Re、Rb3含量测定 mg/粒

根据6批样品含量测定结果，并考虑到实际生产中的波动，含量限度暂定本品每粒含西洋参茎叶总皂苷以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb3总量计，不得少于5.5 mg。

3 讨论

3.1 测定波长的选择

取人参皂苷Rg1、Re、Rb3的甲醇溶液，经UV-2550紫外分光光度计，在190～400 nm扫描，参考《中国药典》2010年版一部西洋参及人参含量测定项下波长，故选择203 nm为实验测定波长。

3.2 色谱柱的选择

曾分别采用Agilent HC C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Diamonsil(2) C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Luna C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)3个不同的C18色谱柱进行试验，结果显示均可得到良好的分离。故规定本法的理论板数按人参皂苷Re峰计不得低于6 000。

3.3 提取方法与提取时间考察

分别对4种提取方法进行了考察。

(1)按原标准方法提取，取装量差异项下的本品内容物，研细，取约3 g，精密称定，加甲醇50 mL使溶解，滤过，残渣加甲醇洗涤3次，每次20 mL，合并滤液及洗涤液，蒸干，残渣加流动相使溶解，并定量转移至100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(2)取装量差异项下的本品内容物，研细，取约1.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(3)取装量差异项下的本品内容物，研细，取约1.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相适量超声处理30 min，放冷；加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(4)取装量差异项下的本品内容物，研细，取约1.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量超声处理30 min，放冷；加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

结果(1)、(2)、(4)相差不大，(3)因溶解时极易产生泡沫，溶解效果不佳，不易定容，无法进行测定。考虑到实验方便和节省时间，故选择方法(2)。

实验建立的方法简便、准确，重现性较好，为心悦胶囊质量标准提高提供了参考依据。

[1] Wang W, Zhao Y Q, Rayburn ER,et al.In vitro anti-cancer activity and structure-activity relationships of natural products isolated from fruits ofPanaxginseng[J].Cancer Chemotherapy and Pharmacology，2007，59(5)：589-601.

[2] 翟鹏贵，赵珺彦，祝铃栋，等.西洋参制剂抗疲劳作用的实验研究[J].浙江中医药大学学报，2007，(6)：761-762 .

[3] 黄新生.高效液相色谱法测定人参茎叶浸膏及人参根中的人参皂苷含量[J].中国中药杂志，2001，26(3)：29-31.

[4] 许传莲.RP-HPLC法测定西洋参茎叶中6种人参皂苷的含量[J].吉林农业大学学报，2002，(3)：53-55.

[5] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：8.

[6] 李俨，李敬华.人参消渴胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定[J].中国药业，2011，20(2)：48-49.

TheDeterminationofGinsenosideRg1，GinsenosideReandGinsenosideRb3inXinyueCapsulesByHPLC

YANG Ying*，WANG Hong-wei，YU Wen-jing

(JilinInstituteforFoodandDrugControl，Changchun130033，China)

Objective：An assay method was developed for the determination of Ginsenoside Rg1、Ginsenoside Re and Ginsenoside Rb3in Xinyue Capsules by HPLC.Methods：The analysis was performed on Lun C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column.Acetonitrile-water gradient elution，detector wavelength 203 nm；Results：Ginsenoside Rg1linear range is 0.098 9-1.798 0 μg；relevant coefficientr=0.999 1(n=5)，Ginsenoside Re linear range is 0.312 0-5.38 μg；relevant coefficientr=0.999 2(n=5)，Ginsenoside Rg1avevage recovery is 97.1%，RSD=2.46%(n=6).Ginsenoside Re avevage recovery is 97.5%，RSD=1.89%(n=6)，Ginsenoside Rb3linear range is 0.448-8.96 μg；relevant coefficientr=0.999 1(n=5)，Ginsenoside Rb3avevage recovery is 100.0%，RSD=2.28%(n=6).Conclusion：The method is simple，rapid and accurate，it is suitable for the quality control of strychnine.

Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Re；Ginsenoside Rb3；Xinyue Capsules；HPLC

2013-01-18)

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杨颖，E-mail：kangroo@xinhuanet.com