不同制剂工艺对鱼腥草有效成分含量及药效的影响

何书海

（信阳农业高等专科学校动物科学系，河南 信阳464000）

中药以其独特的疗效依然在兽医临床上发挥着其不可替代的作用。目前中兽药以散剂、煎剂为主，药效的发挥因剂型和采食限制而受到影响，配方颗粒剂因此应运而生。配方颗粒剂又称作免煎剂，即是将单一中药饮片经过对有效成分提取加工浓缩后制成的颗粒剂，便于临床调配［1］。它是发展我国传统中医药的一种有益尝试，但中药免煎组合方剂的药效作用能否与传统煎剂一致，这在学术界一直存有争议［2］。虽然有研究对验证免煎剂的药效和质量控制做了一些有益的尝试，但要最终解决争议、消除怀疑依然任重而道远；因此对中药材的不同剂型与免煎颗粒剂进行有效成分含量及药效进行观察比较将是一个有效的手段。为了更加客观真实地观察兽药生产工艺对中药有效成分含量及药效的影响，根据前期研究内容［3］，本试验拟选用鱼腥草利用兽药生产中式生产设备将其制备成不同剂型，同时检测相关指标，以期为探讨免煎剂与传统煎剂之间的关系提供科学佐证。

传统医学和现代医学均证明，鱼腥草具有抗菌、清热、镇痛、镇咳、利尿之功效，在兽医临床上鱼腥草常用于感染性疾病的治疗。现代医学研究表明，鱼腥草的主要活性成分为挥发油和黄酮类化合 物，这类物质具有清热解毒、利尿通便、抗菌消炎、抗氧化、消除体内自由基等药理作用［4］，而槲皮素是黄酮类化合物的代表之一。结合本试验为探讨免煎剂与传统煎剂之间关系的目的，本试验拟检测不同剂型鱼腥草中槲皮素含量，同时观察不同制剂鱼腥草的体外抑菌效果。类似研究尚未见报道。

1 材料与方法

1．1 药物 鱼腥草干草（鱼腥草洗净60℃烘箱干燥2h左右至恒重），槲皮素标准样品（分析纯，Sig－ma公司提供），其余药品均为分析纯。

1．2 菌种与培养基 大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌（本校微生物实验室提供）；葡萄糖酚红肉汤（普通液体培养基含葡萄糖1%、酚红0．002%）。

1．3 仪器 DC－NSG型实验型提取浓缩机组（上海达程实验设备有限公司）；DC－1500型实验型喷雾干燥机（上海达程实验设备有限公司）；TU－1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；JA2103N电子天平，TGL－16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1．4 鱼腥草不同制剂的制备

1．4．1 制取工艺 （1）参照相关文献［5］和预试验结果，物料比选择1∶15。即取鱼腥草5 000g加水70 000mL，同时加乙醇和25%盐酸（体积比为4∶1）混合提取液5 000mL，置于DC－NSG型实验型提取（浓缩）机组中进行回流提取。提取物料温度为90℃，提取时间30min；浓缩物料温度为80℃，真空度为0．06MPa，浓缩至5 000mL（料液比浓度为1g／mL）备用。（2）取上述浓缩液2 500mL置于DC－1500实验型喷雾干燥机喷雾干燥，收集全部粉末，备用。

1．4．2 样品处理及含量分析 根据槲皮素溶于乙醇的特点，将喷雾干燥原粉用80%乙醇稀释，定容至2 500mL；再分别量取鱼腥草浓缩原液（简称“原药浓缩液”）和喷雾干燥粉醇溶液（简称“干粉醇溶液”）10．0mL置于 15mL离心管中，在10 000r／min条件下离心10min，移取上清液作为供试品溶液。

1．5 槲皮素标准曲线的制定 精密称取槲皮素标准品10．000mg，置10mL容量瓶中，加80%乙醇溶解并定容，制成浓度为1mg／mL的储备液。以此储备液为参比液在200～500nm范围用紫外可见分光光度计扫描，选择适宜波长。分别量取储备液0．0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5mL 于10mL容量瓶中，80%乙醇定容、摇匀，配制成质量浓度分别为0．00、0．05、0．10、0．15、0．20、0．25、0．30、0．35 mg／mL的溶液，在适宜波长处测定吸收度，绘制标准曲线，计算回归方程。

1．6 不同制剂中槲皮素含量测定 将上述供试液分别置于TU－1810型紫外可见分光光度计中，选择适宜波长测定供试品的吸光度；由回归方程计算出不同样品中的槲皮素含量。

1．7 鱼腥草不同制剂最小抑菌浓度（MIC）测定按《中国兽药典》规定，鱼腥草体外抑菌试验浓度为1g／mL。分别取原药浓缩液（原药浓缩液组）和干粉水溶液（干粉水溶液组）分别对大肠杆菌、沙门菌、链球菌进行最小抑菌浓度的测定，每种细菌3个重复。在无菌条件下，将上述各药液分别用葡萄糖酚红肉汤作管外梯度稀释，每种菌的1～9号管，药物的稀释浓度分别为1∶5，1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，1∶1 280，第10号管不加药物作为对照，每管药液均为1mL，每管菌量均为0．1mL，混合均匀，37℃培养24h，取出观察细菌生长，对照管液体为红色，细菌生长管为黄色。无细菌生长的最低药物浓度即为对该菌株的最低抑菌浓度（MIC）。

2 结果

2．1 检测波长的确定 以80%乙醇溶液为参比液，将槲皮素标准储备溶液在200～500nm波长范围内扫描，得到其最大吸收波长分别位于256nm和362nm附近。结合前人研究结果［6］，本试验采用362nm为测定波长对鱼腥草的槲皮素含量进行测定。

2．2 槲皮素的标准曲线 以浓度（C）对吸光度（A）作标准曲线，并且进行线性回归分析，结果表明，槲皮素标准溶液在浓度与吸光度之间呈现良好的线性关系。经回归处理得方程：C＝10．9770A0．0062（C＝mg／mL），决定系数r2＝0．9924。（图1）。

图1 槲皮素标准曲线与回归方程

2．3 不同制剂中槲皮素的含量 如表1所示，通过紫外分析不同制剂中槲皮素的吸光值，结果表明，鱼腥草原药浓缩液中槲皮素的平均吸光度为0．253 7（λ＝362nm），干粉乙醇稀释液中槲皮素的平均吸光度为0．246 1（λ＝362nm）。经过回归方程计算，原药浓缩液中的槲皮素含量为2．778 7mg／mL，干粉乙醇稀释液中槲皮素的含量为2．695 2mg／mL；两组数值在统计学上无显著差异。

表1 不同制剂中槲皮素吸光度值

2．4 不同制剂鱼腥草抑菌效果 如表2所示，试验结果表明，鱼腥草原药浓缩液对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为12．5mg／mL、6．25mg／mL、3．12mg／mL，3次重复试验显示，在此浓度下抑菌效果有效率达到100%；鱼腥草干粉乙醇稀释液对大肠埃希氏菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为25．0mg／mL、6．25 mg／mL、6．25mg／mL，其中对沙门菌抑菌试验时，在相应浓度下的3次重复试验中2次有效。对其余两种细菌的抑菌能力为100%。

表2 鱼腥草不同制剂抑菌效果 （n＝3）

3 讨论

本试验利用实验型回流提取（浓缩）机组对鱼腥草进行了提取和浓缩，同时利用喷雾干燥机对浓缩液制备成了干粉；该中试生产线型的提取（浓缩）及干燥设备将更客观真实地观察生产设备及制备工艺对中药有效成分及药效的影响。吴景林［5］、罗显华［7］等曾分别采取了索氏提取器回流提取、超声波提取和简单煎煮法对鱼腥草槲皮素的提取工艺进行了研究，对于利用回流浓缩机组提取鱼腥草有效成分的研究尚未见报道。本试验通过对两种鱼腥草制剂中槲皮素有效含量的测定，结果显示，两种制剂工艺对槲皮素含量的影响在统计学上无明显差异，但是从吸光度数值上观察到鱼腥草干粉醇溶液的吸光度对比原药浓缩液有一定程度的降低。这可能是由于在喷雾干燥制粉中，制备工艺使部分槲皮素的含量减少，从而影响了吸光度。

有文献表明［8－9］，鱼腥草合成制剂以及鱼腥草注射液的体外抑菌能力很强，其中对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等有明显的抑制作用；对大肠埃希氏菌、痢疾杆菌等也有作用。本研究利用所制取的鱼腥草原药浓缩液和干粉醇溶液对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌进行抑菌试验，以期获得不同制剂鱼腥草的最小抑菌浓度。结果显示，原来浓缩液对上述3种细菌的最小抑菌浓度均低于干粉醇溶液。鱼腥草有效成分主要包括挥发油和黄酮类，挥发油内抗菌有效成分主要包括癸酰乙醛、月桂醛、蒎烯和芳樟醇等，在利用蒸汽式喷雾干燥机对鱼腥草浓缩液干燥时，使得大量的挥发油随高温蒸汽从排气口逸散，因此影响了鱼腥草的抑菌效果。

本试验结果表明，在制备中药免煎剂时制备工艺对药物含量及药效均有不同程度的影响。虽然中药免煎颗粒剂替代煎剂是发展我国传统中医药的一种积极尝试，但我国目前尚没有统一的质量控制标准，所以质量控制研究是中药免煎颗粒剂在兽医临床进一步推广应用的基础。姜泓等以药材有效成分

提取率为指标，对麻黄、甘草、苦杏仁等进行了配方免煎剂的制备工艺和质量控制研究，结果表明，以这些药材制成配方颗粒免煎剂在工艺上是可行的，并以其有效成分作为质量控制指标是合理的［10－11］。陈黎等采用薄层色谱法和高效液相色谱法对牛蒡子、炒牛蒡子及其免煎剂中主要成分牛蒡苷进行鉴别及含量测定，结果显示，牛蒡子生品与炮制品中牛蒡苷的含量均符合药典限度要求，免煎剂中牛蒡苷含量仅为炮制品中的三分之一［12］。苏鑫等研究了保元汤不同调剂形式对脾虚小鼠负重游泳及MΦ吞噬功能的影响，结果发现，保元汤的传统煎剂和免煎剂均对小鼠的免疫功能有一定的提高作用，而传统煎剂的疗效更为明显［13］。虽然部分免煎中药颗粒的疗效与传统饮片相近甚至效果更好，但不能肯定所有的配方临床疗效都等同于传统的中药煎剂。本试验以单味中药鱼腥草进行了有效成分含量的测定和药效的观察，结果显示，经喷雾干燥后的鱼腥草干粉对3种细菌的体外抑菌能力较原药浓缩液要低；任非等通过对比10种中药饮片和4种方剂的煎剂与免煎颗粒剂的抑菌作用发现，免煎颗粒剂的抑菌作用弱于煎剂［14］，与本研究有相似的结论。“群药共煎”是中药的主要特色，从理论上讲，中药复方药理作用并非等同于单味中药成分提取后的简单混合；多味药物在高温“共煎”之时会产生各种物理及化学变化，煎出成分较为复杂［15］。这些成分通过“君臣佐使”的关系发挥增强疗效、缓和药性的作用，这是免煎剂是无法做到的，因此免煎剂单味药之和的药理效应能否等同于传统中药煎剂，还有待进一步研究。

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