气相色谱－质谱法测定水产品中9种合成麝香

叶 洪，林永辉，杨 方，刘正才，卢声宇，蓝锦昌

(1.福建省出入境检验检疫局技术中心，福建福州350001;2.福建农林大学食品科学学院，福建 福州350002)

近年来合成麝香中作为一种“假持久性有机污染物”［1］受到国内外广泛关注，包括环境激素［2］、遗传毒性［3］、生理生态毒性［4］、微生物毒性［5］和影响酶活［6］等，其危害具有持久性.目前研究人员已在大气［7］、土壤［8］、污水污泥［9］以及鱼虾贝类［10－11］等生物样品体内检测到合成麝香，甚至在人体血液［12－13］、母乳［14］和脂肪组织［15］中也检测到合成麝香化合物.人体内的合成麝香主要是来自化工产品和高蓄积可食性的生物体，因此探索食品尤其鱼虾贝类等易富集合成麝香的水产品中合成麝香的检测方法很有必要.我国对水产品中合成麝香的研究较少，对目前禁用的葵子麝香、西藏麝香、伞花麝香和限用的二甲苯麝香的研究尚未见报道.本文采用超声波有机溶剂萃取，通过硅胶柱固相萃取法净化，并采用气相色谱－质谱(GC-MS)检测水产品中9种合成麝香.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

气相色谱－质谱联用仪7890A-5975C(GC-MS)为美国Agilent公司产品;漩涡振荡器XW-80A为上海精科公司产品;超声波仪KQ500DE为昆山超声波仪器有限公司产品;台式离心机TDL-5-A为上海安亭科学仪器厂产品;旋转蒸发仪2004HK15为上海申生科技有限公司产品;氮吹仪HGC-36A为浙江森森实业有限公司产品;硅胶柱L3860为中国bestown公司产品.

萨利麝香(ADBI)、粉檀麝香(AHMI)、葵子麝香(MA)、特拉斯麝香(ATII)、佳乐麝香(HHCB)、二甲苯麝香(MX)、吐纳麝香(AHTN)、伞花麝香(MM)、西藏麝香(MT)以及内标物荧蒽-D10(纯度99.5%)均购于德国Dr.Ehrenstrofer公司;正己烷(色谱纯)为美国SIGMA公司产品;二氯甲烷(分析纯)为国药集团化学试品.

标准混合液:准确移取9种标准品麝香，经正己烷稀释，配制成200 μg·L－1混合标准溶液，于4℃下保存;准确移取内标物，经正己烷稀释，配制成2 μg·mL－1标准储备液，于4℃下保存.标准曲线:用正己烷配制成外标浓度分别为 0.5、1、2、5、10、50、100 μg·mL－1，内标浓度均为 20 μg·L－1的标准工作溶液.

1.2 气相色谱及质谱条件

1.2.1 气相色谱条件 色谱柱为19091S-433 HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)色谱柱毛细管，色谱柱升温程序:初温80℃，保持2 min后以10℃·min－1速度升至170℃，然后以1℃·min－1升至180℃，最后以30℃·min－1升至270℃，保持7 min.进样口温度250℃，进样量1 μL，不分流进样，载气为氦气(99.999%).

1.2.2 质谱条件 EI离子源，电子能量为70 eV，离子源温度230℃，质谱仪接口温度280℃，溶剂延迟4 min，选择离子扫描模式(SIM)，目标分析物的保留时间和检测离子见表1.

表1 9种合成麝香和内标物的质谱条件Table 1 Mass spectrometry conditions for 9 kinds of synthetic musk and internal standard matter

1.3 样品前处理

取约2 g均质样品于离心管中，准确加入1.00 mL 20 μg·L－1内标液、20 mL正己烷，漩涡混匀;超声提取30 min，4500 r·min－1离心5 min;取上清液10 mL过已采用5 mL二氯甲烷、10 mL正已烷预处理的硅胶SPE柱;经4 mL二氯甲烷洗脱(全过程过柱流速不大于2 mL·min－1)，收集滤液，氮吹至近干;用正己烷定容至1.00 mL，过0.2 μm 微孔滤膜，采用GC-MS测定.

2 结果与分析

2.1 样品提取条件的优化

人工合成麝香具有很强的脂溶性，易溶于非极性有机溶剂，选取正己烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、环己烷、二氯甲烷为提取溶剂进行对比试验，提取的回收率分别为89.4% －95.6%、82.3% －94.3%、83.9% －91.1%、81.9% －89%、84.7% －90.4%、80.7% －90.5%(图 1).结果表明，正己烷提取效果最好，且所含杂质较少，故选取正己烷为提取溶剂.

图1 提取溶剂对回收率的影响(n=6)Fig.1 Effect of extraction solvents on recovery rate(n=6)

以正己烷为提取溶剂，9种合成麝香在提取时间为15、30、45 min的回收率分别为74.7% －85.9%、89.4% －95.6%和 90.1% －95.5%，选取样品超声提取时间为 30 min.

2.2 固相萃取净化条件的优化

经C18柱、HLB柱、Envi-Carb柱、Si-OH柱、JR-AL-N柱的净化后9种合成麝香的回收率见表2.从表2可知:5个柱子中硅胶柱的极性最强，对合成麝香的吸附性最小，故硅胶柱易于洗脱，回收率高，其他小柱对合成麝香的吸附性强，故回收率低，结果表明硅胶柱的净化效果最好，9种麝香的回收率都接近80%，且含杂质少，故选取硅胶柱为固相萃取柱.

表2 不同固相萃取柱添加回收试验的回收率(n=6)Table 2 Recoveries of different SPE cartridges in recovery test(n=6)

考察不同体积(2、4、6 mL)正己烷、环己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷的洗脱效果，结果表明，4 mL二氯甲烷的洗脱效果最佳，对9种合成麝香均能完全洗脱，故选取4 mL二氯甲烷为洗脱液.

2.3 方法的线性范围和检出限

采用SIM模式对9种合成麝香含量均为10 μg·L－1的混合标样(内标物荧蒽-D10浓度为10 μg·L－1)进行检测，麝香对应峰的分离效果好，易于检测，可通过各种合成麝香特征离子的峰面积对目标分析物进行定量分析，结果如图2所示.

图2 9种合成麝香的色谱图Fig.2 Total ion chromatograms(TIC)of nine kinds of synthetic musk

在气相色谱－质谱联用仪的最佳条件下，进样1 μL，对0.5－100 mg·L－1的混合标准品进行分析，得到各目标物的线性方程、相关系数和检出限(表3)，其中仪器的检出限按信噪比等于3计算.

2.4 回收率和精密度

采用内标法对样品进行定量分析，采用前处理方法荧蒽-D10的回收率为82.8% －91.6%.

对黄姑鱼、真鲷鱼和虾3个样品进行回收试验，添加1.00 mL 10 μg·L－1合成麝香混合标准溶液(相当于10 μg·kg－1的样品添加量)，通过内标法定量，样品的平均回收率和标准偏差见表4.从表4可以看出，3种样品的9种目标物的平均回收率为84.1% －116.4%，标准偏差为2.8% －9.5%.

表3 合成麝香的标准曲线参数及仪器检出限Table 3 Parameters of calibration and instrumental LOD of synthetic musk

表4 3种样品中合成麝香的测定及加标回收结果(n=6)Table 4 Results of the determination and spiked recoveries of synthetic musk in three samples(n=6)

2.5 样品分析

采用本方法对本地市场上黄姑鱼、真鲷鱼和虾3个样品进行检测分析.结果表明，3个水产品样品中均含有佳乐麝香和吐纳麝香，黄姑鱼样品中检出 53.09 μg·kg－1佳乐麝香和 19.27 μg·kg－1吐纳麝香(图3);真鲷鱼样品中检出 59.85 μg·kg－1佳乐麝香和 3.62 μg·kg－1吐纳麝香;虾样品中检出 96.37 μg·kg－1佳乐麝香和 23.61 μg·kg－1吐纳麝香.

图3 黄姑鱼样品谱图Fig.3 TIC of SM from Nibea albiflora samples

3 小结

采用正己烷超声波振荡提取样品，通过硅胶固相萃取柱净化，并采用气相色谱－质谱(GC-MS)检测，对水产品样品中的9种合成麝香进行定性定量分析，结果表明，该方法简单易行，准确可靠，回收率高.

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