马立克病鸡血清生化指标的检测与分析

田文霞，王 颖，刘红霞，喻 进，宁官保，高荣琨，高文伟，赵宇军

（山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801）

鸡马立克病（Marek＇s disease，MD）是由疱疹病毒亚科马立克病病毒（MDV）引起的最常见的鸡恶性肿瘤病，以淋巴细胞组织增生，在各内脏器官及外周神经、肌肉、皮肤、性腺、虹膜中产生单核细胞浸润和肿瘤为特征［1］。患有肿瘤型马立克病的鸡能够发生肉眼可见的脂肪性动脉粥样硬化（Arteriosclerosis，AS），与人的慢性动脉粥样硬化相似［2－3］。AS是人类心脑血管疾病的主要病理基础［4］，还可引起其他疾病，例如心肌梗塞、脑梗塞、坏疽等。随着研究的深入，发现血清中γ－谷氨酰转肽酶（gamma glutamyltromsferase，GGT）为冠状微血管损伤的标记物，是非致死性心肌梗死、致死性冠状动脉硬化性心脏病和脑卒中的独立危险因素［5－8］，有学者报道在颈动脉粥样硬化斑块中有GGT表达［9］，从而表明GGT可能参与了动脉粥样硬化的形成。

除GGT外，有研究表明脂蛋白（a）［lipoprotein（a），LP（a）］是决定冠状动脉粥样硬化斑块的重要因子［10］，致动脉硬化死亡率受高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）水平影响，较低的 HDL水平的患者死亡率高［11］。LP（a）在肝脏中合成，是与低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）结构相似的脂蛋白。因此，研究血清中LDL、HDL的含量与AS发生是否有关具有重要意义。

目前关于GGT、PL（a）、HDL、LDL等生化指标与AS的相关性研究与分析已报道较多，但马立克病鸡血清中GGT、HDL及LDL等含量变化与AS间关系的研究尚未见报道。为此，本试验对马立克病鸡血清生化指标GGT、HDL、LDL进行检测与分析，以揭示GGT、HDL、LDL含量变化与 MD动脉粥样硬化之间的关系，可为动物动脉粥样硬化的临床预测提供依据，做到及早预防，减少发病率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 72只1日龄海兰褐公雏鸡，购自太谷县某种鸡场。

1.1.2 毒株 马立克病毒强毒京－1株血毒，购自北京市农林科学院畜牧兽医研究所，批号200806，液氮中保存。

1.1.3 试剂及仪器 G系列γ－谷氨酰转肽酶检测试剂盒，北京九强生物技术有限公司，批号GS9051G；高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，Olympus Life and Science Europa GmbH，Germany，批号OSR6287；G系列低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，北京九强生物技术有限公司，批号GS141Z；O－lympus AU640全自动生化分析仪（MISHIMA OLYMPUS，日本）。

1.2 方法

1.2.1 试验鸡分组、攻毒、饲养 72只1日龄公雏鸡，分为二组，每组各36只。对照组（C）：腹腔注射0.2mL灭菌Hanks液；攻毒组（V）：将马立克强毒京－1株血毒用灭菌Hanks液稀释20倍，每只鸡腹腔注射0.2mL。按照常规饲养管理，观察发病情况。分别于3、6、10、15、20、26、35、45、60d，每组各取4只，心脏采血，剖检观察病变，析出血清，备检。

1.2.2 血清γ－谷氨酰转肽酶含量测定 按照G系列γ－谷氨酰转肽酶检测试剂盒（IFCC速率法）说明书测定。

1.2.3 血清脂蛋白含量测定 在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定 HDL、LDL中胆固醇含量作为HDL、LDL的含量。分别按照高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒和G系列低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒说明书测定。

1.2.4 数据处理 所有试验数据采用SAS 6.12统计软件进行方差分析，以¯x±SD表示。P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 病理剖检结果

26日龄时，攻毒组鸡剖检有肉眼可观病理变化，睾丸肿大，肾稍肿大；35日龄时，肝稍肿大，睾丸肿大，法氏囊萎缩，胸腺萎缩甚至退化，心脏动脉出现粥样硬化；45日龄时出现肝肿瘤。

2.2 血清生化指标的分析

表1为攻毒组与对照组GGT含量的变化，攻毒组35d时明显高于对照组，而其他阶段低于对照组，且差异不明显；表2HDL含量变化显示，攻毒组与对照组相比，HDL在注射 MDV 10、15、20、35、60d时低于对照组，且在15d时差异极显著（P＜0.01）；由表3可见，LDL在注射 MDV 10、15、26、35、45d时高于对照组，且在15d时差异极显著（P＜0.01）。

表1 血清谷氨酰转肽酶活性变化Table 1 The changes of GGT activity in serum U／L

表2 血清高密度脂蛋白含量变化Table 2 The changes of HDL content in serum mmol／L

表3 血清低密度脂蛋白含量变化Table 3 The changes of LDL content in serum mmol／L

3 讨论

在临床医学诊断中，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是作为检测心血管疾病的重要指标，尤其是对AS的检测。高密度脂蛋白含量偏低、同时低密度脂蛋白含量偏高，是动脉粥样心血管疾病血脂异常的表现［12］。Hajjar D P等［13］研究发现，马立克病病毒感染鸡早期阶段出现胆固醇和胆固醇酯代谢改变引起主动脉脂肪增加。本研究对马立克病鸡血清HDL、LDL检测也显示出相同的结果，在发病前期15d时就达到显著水平，而病鸡剖检发现35d时出现动脉粥样硬化症状，提示通过对HDL、LDL的检测可及早预测AS及马立克病的发生。

血清中谷氨酰转肽酶主要来自于肝脏，肝胆系统发生实质性变化时，可使血清中谷氨酰转肽酶含量上升。临床医学专家认为，根据浆膜腔积液脱落细胞学检查诊断为恶性肿瘤的患者，血清中GGT显著升高，结合临床应考虑原发性或转移性肝胆系统肿瘤，如GGT升高不明显，则可基本排除肝胆系统肿瘤，而应考虑其他腹腔、胸腔脏器肿瘤且癌肿未发生肝胆系统转移［14］。MDV可引起鸡肝脏发生实变，发生肝脏肿瘤［1］，本试验攻毒组GGT含量35d时明显升高，可能与临床剖检［15］肝肿大、睾丸肿大、法氏囊萎缩、胸腺萎缩甚至退化、心脏动脉出现粥样硬化有直接的关系，但在其他阶段GGT含量偏低，其相关性还有待于进一步研究证实。

因此，鸡血清HDL与LDL含量变化可作为预测马立克病及动脉粥样硬化的一项重要指标，对HDL与LDL的检测可及早预防马立克病的发生与及时治疗动脉粥样硬化。而马立克病毒引起鸡动脉粥样硬化也可做为研究人类该病的病理模型。

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