RP－HPLC测定人参茎叶总皂苷及不同部位浸膏中Rb3的质量分数

马 畅，申 贵 隽，李 珂 珂，陈 丽 荣，弓 晓 杰

(1.大连大学 环境与化学工程学院，辽宁 大连 116622；2.大连大学 医学院，辽宁 大连 116622)

0 引 言

人参(PanaxginsengC.A.Meyer)系五加科(Araliaceae)人参属(Panax)植物，是特产于我国的一味珍贵药材。研究表明，人参皂苷是人参的主要有效成分[1－3]。人参属植物中人参皂苷的种类和含量存在较大的差异，其各部位中所含皂苷的种类、含量也不相同。人参茎叶中含有大量的人参总皂苷(约7%～16%)，人参茎叶是一种可再生资源，可充分作为人参皂苷制备的原材料，且皂苷成分和药理活性与人参根总皂苷相似[4]。人参皂苷Rb3具有广泛的生理活性，如抗血小板、抗血栓作用，对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作 用 等[5－6]。 人参皂苷的分离及分析方法较多[7－8]，本研究采用 RP－HPLC法对人参不同部位浸膏及茎叶总皂苷中人参皂苷Rb3进行定性定量分析，以期构建分离度好、准确、快捷的人参皂苷Rb3含量测定方法，为开发以人参皂苷Rb3为主的创新药物提供科学依据，为人参茎叶成分及药理活性研究及药材的质量控制提供实验依据。

1 仪器与材料

Waters 600高效液相色谱系统：Waters 600泵，Waters 2487多通道紫外检测器，N2000色谱工作站；TGL－169高速离心机。

人参茎叶总皂苷；人参果浸膏；人参茎叶浸膏；人参须根浸膏；人参根浸膏；人参皂苷对照品Rb3；甲醇，色谱纯；磷酸，分析纯；实验用水，纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱，Nava－Pak®－C18(3.9mm×150mm，4μm)；流动相，甲醇－水－磷酸[V(甲醇)∶V(水)∶V(磷酸)＝65∶35∶1]；体积流量，1.0mL／min；检测波长，203nm；进样量，20μL。此条件下人参茎叶总皂苷及对照品Rb3色谱图见图1。

2.2 样品溶液的制备

精确称取样品(人参茎叶总皂苷)，置于10mL容量瓶中，甲醇溶解超声助溶，定容，高速离心20min(1 600r／min)，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液即为样品液，备用。

2.3 对照品溶液的制备

精确称取人参皂苷Rb3对照品4.0mg，置于10mL容量瓶中甲醇定容至刻度。经0.45μm微孔滤膜过滤待用。

2.4 线性关系考察

精确吸取对照品溶液，分别稀释制成0.04、0.10、0.20、0.40、1.00mg／mL的溶液。分别吸取上述溶液按照“2.1”的色谱条件进行色谱分析。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以进样量为横坐标(X)，得回归方程Y＝445 193.311 3X－175 865.197 1，R＝0.999 9。结果表明，进样量在0.8～20μg具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精确吸取浓度为0.40mg／mL的人参皂苷Rb3对照品溶液20μL，按上述色谱条件重复进样6次，得峰面积的RSD为3.32%，结果表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

精确吸取同一份人参茎叶总皂苷样品溶液，每隔2h进样一次，进样6次，得峰面积的RSD为1.52%，结果表明样品溶液在12h内稳定性良好。

2.7 重现性试验

精确称取同一批人参茎叶总皂苷样品5份，制备样品溶液，按色谱条件测得峰面积RSD为1.39%(n＝5)，此结果表明该方法重现性良好，方法可行。

2.8 加样回收率试验

精确称取人参茎叶总皂苷样品6份，分别加入人参皂苷Rb3对照品适量，制备样品溶液，测得平均加样回收率为100.3%，样品峰面积RSD为2.65%，此结果表明该方法的回收率较好，方法可行。

2.9 样品测定

按“2.2”处理样品，吸取样品液20μL进样，按“2.1”色谱条件进行测定，色谱图见图2～5。用随机外标法计算，结果见表1。

表1 样品中人参皂苷Rb3的质量分数Tab.1 Determination of ginsenoside Rb3in different samples

3 结 论

(1)建立的反相高效液相色谱法测定人参果浸膏、人参茎叶浸膏、人参须根浸膏、人参根浸膏及人参茎叶总皂苷中人参皂苷Rb3，方法简便、快速，而且稳定、重现性好，可以为人参的质量控制提供参考。

(2)实验曾采用甲醇－水－冰醋酸、甲醇－水－磷酸2种流动相，其中加酸的主要作用是调整峰型，通过实验比较冰醋酸和磷酸，发现磷酸较好，峰型较理想。柱温和体积流量对分离度的影响较大，经反复实验，以柱温25℃、体积流量1.0mL／min为佳。

(3)人参不同部位浸膏中人参皂苷Rb3含量测定结果表明，人参果浸膏及人参茎叶浸膏中人参皂苷Rb3含量明显高于人参须根浸膏及人参根浸膏。因此，人参皂苷Rb3在人参地上部分含量更高，人参地上部分与地下部分药理活性有差异，在临床应用时应有所区别。

(4)人参茎叶每年都大量的生长，可作为人参皂苷制备的原材料。人参茎叶作为药用有效部位，其主要生理活性和有效成分人参皂苷的质量标准仍需不断完善，本实验采用RP－HPLC法，以甲醇－水－磷酸[V(甲醇)∶V(水)∶V(磷酸)＝65∶35∶1]为流动相；检测波长为203nm。外标法对人参茎叶总皂苷中人参皂苷Rb3进行定性、定量分析，不仅方法简捷、分离效果好，也可以为人参茎叶产品的开发利用提供实验依据。建立与现代科学技术相适应的中药质量控制方法，对实现中药现代化具有非常重要的意义。

[1]LEI Jun，LI Xiang，GONG Xiaojie，et al.Isolation，synthesis and structures of cytotoxic ginsenoside derivatives[J].Molecules，2007，12：2140－2150.

[2]WONG V K W，CHEUNG S S F，Li Ting，et al.A－sian ginseng extract inhibits in vitro and in vivo growth of mouse Lewis lung carcinoma via modulation of ERK－p53and NF－kB signaling[J].Journal of Cellular Biochemistry，2010，111(4)：899－910.

[3]LI Binghui，ZHAO Jiong，WANG Chongzhi，et al.Ginsenoside Rh2induces apoptosis and paraptosis－like cell death in colorectal cancer cells through activation of p53[J].Cancer Letters，2011，301(2)：185－192.

[4]高爽，汤淳，刘乃侨.论人参的成分及人参皂苷的药用价值[J].辽宁经济职业技术学院学报，2008，18(1)：38.

[5]崔秀明，徐珞珊，王强.人参皂苷 Rb3的抗血小板和抗血栓作用[J].中成药，2006，28(10)：1526－1528.

[6]胡瑜，陈浩凡，臧林泉，等.人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用[J].广东药学院学报，2008，24(5)：590－593.

[7]杨博，富瑶瑶，付绍平，等.人参皂苷Re的分离提纯[J].大连工业大学学报，2009，28(4)：258－260.(YANG Bo，FU Yao－yao，FU Shao－ping，et al.Purification of ginsenoside Re from leaf of protopanaxatriol ginsen[J].Journal of Dalian Polytechnic University，2009，28(4)：258－260.)

[8]史承，吴警，富瑶瑶，等.酶解产物人参皂苷Rh2、Rh3的二氯甲烷层析分离[J].大连工业大学学报，2010，29(5)：313－316.(SHI Cheng，WU Jing，FU Yao－yao，et al.Separation of enzymatic products ginsenoside Rh2and Rh3using dichloromethane on silica gel column[J].Journal of Dalian Polytechnic University，2010，29(5)：313－316.)